从PEI沉淀洗脱σ32和RNA聚合酶实验
试剂、试剂盒 缓冲液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的缓冲液 A仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶实验步骤 材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)试剂缓冲液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol/LNaCl 的缓冲液 A(配方，见“试剂的配制”，PP.184~189)操作程序1)PEI 悬液（见 p.153) 于离心前取 6X50ul 等分试样。各试样用微型离心机离心 lmin, 然后用 50ul 分别含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol/LNaCl 的缓冲液 A 重悬沉淀物。2) 充分混匀后静置 10~15mi。再用微型离心机离心 lmin，取上清样品，如需要，进行快速蛋白质斑点印迹试验（见 pp.l72~173) 和 SDS-PAGE 电泳分析。结果典型的显示 NaCl 洗脱实验结果的 SDS 凝胶照......阅读全文
从－PEI－沉淀洗脱σ32－和－RNA－聚合酶实验
试剂、试剂盒缓冲液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的缓冲液 A仪器、耗材SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶实验步骤材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)试剂缓冲液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol/LNa
从－PEI－沉淀洗脱σ32－和－RNA－聚合酶实验
试剂、试剂盒 缓冲液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的缓冲液 A仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶实验步骤 材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)试剂缓冲液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol
从－PEI－沉淀洗脱σ32－和－RNA－聚合酶实验
试剂、试剂盒 缓冲液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的缓冲液 A 仪器、耗材
沉淀－σ32－和－RNA－聚合酶实验
试剂、试剂盒 聚乙烯亚胺 仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置 聚丙烯酰胺小胶
沉淀－σ32－和－RNA－聚合酶实验
试剂、试剂盒 聚乙烯亚胺仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶实验步骤 材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)试剂聚乙烯亚胺（PEI)(6% 储液，pH7.9)(配方，见“试剂的配制”，pp.184~189)操作程序1)0.2%DOC 上清 (见 p.153)
沉淀－σ32－和－RNA－聚合酶实验
试剂、试剂盒聚乙烯亚胺仪器、耗材SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶实验步骤材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)试剂聚乙烯亚胺（PEI)(6% 储液，pH7.9)(配方，见“试剂的配制”，pp.184~189)操作程序1)0.2%DOC 上清 (见 p.153), 取 6
PEI－沉淀法分级分离可溶性提取物实验
材料与设备提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清，见实验 1，P.146~147〕Tissuc-TearorTM 匀浆器（Fisher Scientific 15-338-55)硫酸铵 (AMS)试剂聚乙烯亚胺 (PEI)(10% 储液,pH7
PEI－沉淀法分级分离可溶性提取物实验
试剂、试剂盒 提取液硫酸铵聚乙烯亚胺 缓冲液 A二硫苏糖醇仪器、耗材 Tissuc-TearorTM 匀浆器实验步骤 材料与设备提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清，见实验 1，P.146~147〕Tissuc-TearorTM 匀浆器（Fisher Scientific 15-338-5
PEI－沉淀法分级分离可溶性提取物实验
试剂、试剂盒提取液硫酸铵聚乙烯亚胺缓冲液 A二硫苏糖醇仪器、耗材Tissuc-TearorTM 匀浆器实验步骤材料与设备提取液〔0.2% 脱氧胆酸钠 (DOC) 上清，见实验 1，P.146~147〕Tissuc-TearorTM 匀浆器（Fisher Scientific 15-338-55)硫酸
RNA－和－DNA－提取：洗脱
DNA 提取方案的还剩余IDE步骤步就是从硅胶中释放纯 DNA 或 RNA。对于 DNA 制备,通常使用 pH 值为 8-9 的 10 mM Tris。DNA 在弱碱性 pH 值下更稳定,在缓冲液中溶解得更快。即使对于 DNA 颗粒也是如此。水的 pH 值往往较低,低至 4-5,并且高分子量 DNA
蛋白质沉淀技术
在过去的 100 年里，虽然人们已经使用过多种不同的沉淀方法，但是 AS 沉淀一直都得到了最广泛的应用，尤其对于酸性蛋白质。此外，PEI 沉淀的应用也正日益普及。接下来，将会对这两种方法进行详细的讨论, 随后对其他几种沉淀方法做简单概述，并针对沉淀过程中沉淀的处理和纯化效率的最大化提出一般性建议。实
蛋白质沉淀技术
蛋白质沉淀技术 实验步骤 一、AS 沉淀 1.原理 虽然有些其他盐类也可以用做沉淀剂，但是 AS
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒免疫亲和介质溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见下文)溴
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 饱和 AMS 沉淀物 偶联缓冲液
蛋白质沉淀技术（三）
3.策略 C 的基本操作程序(1) 配制 10%(V/V)[5%(m/V)] 的 PEI 储存液。PEI(WV) 常以 50%(m/V) 的黏稠液体状态存在（来自于 MPBiochemicals 的 PEI, 其相对分子质量 Mw=50000?100000, 也可采用其他来源，如 Sigma 和
细菌过表达产物（无二硫键者）新纯化实验
实验步骤操作程序第 1 天今天的目的是试验 T7 RNA 聚合酶表达的诱导条件，确定其在上清/沉淀中的分布情况，并为第二天的分离纯化步骤作出初步评估。1) 取一份 50-ml 经低密度培养过夜的大肠杆菌细胞培养物，开始工作。2) 于 A600nm 为 0.3~0.7 时，用 0.8 mmol/L I
细菌过表达产物（无二硫键者）新纯化实验
实验步骤 操作程序第 1 天今天的目的是试验 T7 RNA 聚合酶表达的诱导条件，确定其在上清/沉淀中的分布情况，并为第二天的分离纯化步骤作出初步评估。1) 取一份 50-ml 经低密度培养过夜的大肠杆菌细胞培养物，开始工作。2) 于 A600nm 为 0.3~0.7 时，用 0.8 mmol/L
细菌过表达产物（无二硫键者）新纯化实验
实验步骤 操作程序第 1 天今天的目的是试验 T7 RNA 聚合酶表达的诱导条件，确定其在上清/沉淀中的分布情况，并为第二天的分离纯化步骤作出初步评估。1) 取一份 50-ml 经低密度培养过夜的大肠杆菌细胞培养物，开始工作。2) 于 A600n
包涵体沉淀（σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验
试剂、试剂盒 包涵体沉淀 缓冲液 A 脱氧胆酸钠 N-十二烷基肌氨酸钠 仪器、耗材
包涵体沉淀（σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验
试剂、试剂盒 包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材 Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器（FisherScient
包涵体沉淀（σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验
试剂、试剂盒包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器（FisherScientifi
蛋白质沉淀技术（二）
(4) 小心倒出上清液，并测量其体积。依据表 20.1 所示的以百分饱和度从低到高的顺序加入 AS 以确定所需 AS 的质量。继续伴以快速的搅拌并缓慢加入 AS，以避免局部形成较高盐浓度，之后静置 30 min, 使其形成沉淀。(5) 如步骤 (3) 中所示进行离心。尽量去除上清液, 若之前已经仔细
竞争性－RTPCR:－竞争子－RNA－的构建实验
试剂、试剂盒 乙醇双蒸水DNA 模板[a-32P]ATP仪器、耗材 RT-PCR 竞争子构建试剂盒实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇去除 RNA 酶的双蒸水2. 核酸和寡核苷酸DNA 模板（0.5~1.0ug 线性化的质粒模板或 0.1~0.5ugPCR 模板）3. 放射性复合物[a-3
竞争性－RTPCR:－竞争子－RNA－的构建实验
试剂、试剂盒 乙醇 双蒸水 DNA 模板 [a-32P]ATP 仪器、耗材 RT
竞争性－RTPCR:－竞争子－RNA－的构建实验
第一部分：竞争子的设计；第二部分：竞争子RNA的合成、纯化和定量。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒乙醇双蒸水DNA 模板[a-32P]ATP仪器、耗材RT-PCR 竞争子构建试剂盒实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇去除 RNA 酶的双蒸水2. 核酸
纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA
实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织，直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均匀，冰浴 15 分钟
酶测定法实验
在本单元中，用一种较简单的方法测定它对核心 RNA 聚合酶自非特异性模板 poly(dAT) 起始转录的刺激作用。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒核心 RNA 聚合酶纯σ32 标准品纯化的 σ32 样品核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物样品[α-32P]UTP终止液
酶测定法实验
酶测定法实验 试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶 纯σ32 标准品 纯化的 σ32 样品
酶测定法实验
试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶纯σ32 标准品纯化的 σ32 样品核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物样品[α-32P]UTP终止液DEAE-纤维素（DE81) 纸片P04 清洗缓冲液乙醇反应液仪器、耗材 水浴锅实验步骤 材料与设备核心 RNA 聚合酶 (2.3 mg/ml)纯σ32 标准品 (