细菌过表达产物（无二硫键者）新纯化实验
实验步骤操作程序第 1 天今天的目的是试验 T7 RNA 聚合酶表达的诱导条件，确定其在上清/沉淀中的分布情况，并为第二天的分离纯化步骤作出初步评估。1) 取一份 50-ml 经低密度培养过夜的大肠杆菌细胞培养物，开始工作。2) 于 A600nm 为 0.3~0.7 时，用 0.8 mmol/L IPTG 诱导 T7 RNA 聚合酶表达，将培养物分成两份。3)30 min 后，对一份培养物加利福平至终浓度为 150pg/ml。4) 诱导过程中，于各时间点取样作 SDSPAGE 分析：取 1 ml 培养物离心后，按每单位 A600nm 加 100ul 的 2xSDS 样品缓冲液溶解沉淀，踉踪诱导时间 2~4 h。5) 取完最后一个样品，合并培养物，用超声处理/DOC 法（见 P.146) 破碎细胞，此时应能回答该蛋白是可溶的还是在沉淀中的这个问题。6) 若该蛋白存在于沉淀，可初步用 SKL 溶解法（见 pp.148~14......阅读全文
细菌过表达产物（无二硫键者）新纯化实验
实验步骤 操作程序第 1 天今天的目的是试验 T7 RNA 聚合酶表达的诱导条件，确定其在上清/沉淀中的分布情况，并为第二天的分离纯化步骤作出初步评估。1) 取一份 50-ml 经低密度培养过夜的大肠杆菌细胞培养物，开始工作。2) 于 A600n
细菌过表达产物（无二硫键者）新纯化实验
实验步骤操作程序第 1 天今天的目的是试验 T7 RNA 聚合酶表达的诱导条件，确定其在上清/沉淀中的分布情况，并为第二天的分离纯化步骤作出初步评估。1) 取一份 50-ml 经低密度培养过夜的大肠杆菌细胞培养物，开始工作。2) 于 A600nm 为 0.3~0.7 时，用 0.8 mmol/L I
细菌过表达产物（无二硫键者）新纯化实验
实验步骤 操作程序第 1 天今天的目的是试验 T7 RNA 聚合酶表达的诱导条件，确定其在上清/沉淀中的分布情况，并为第二天的分离纯化步骤作出初步评估。1) 取一份 50-ml 经低密度培养过夜的大肠杆菌细胞培养物，开始工作。2) 于 A600nm 为 0.3~0.7 时，用 0.8 mmol/L
PCR－产物纯化实验
试剂、试剂盒 TE 或去离子水PCR 产物仪器、耗材 离心机和转子PCR 滤 件微量离心管实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去离子水2. 核酸和寡核苷酸待测序的 PCR 产物3. 离心机和转子带有固定倾角转子的小型
PCR－产物纯化实验
试剂、试剂盒 TE 或去离子水 PCR 产物 仪器、耗材 离心机和转子 PCR 滤 件
PCR－产物纯化实验
介绍一个采用 AmiconMicrocon-PCR 滤件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法纯化 PCR 产物。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒TE 或去离子水PCR 产物仪器、耗材离心机和转子PCR 滤 件微量离心管实验步骤
纯化测序反应产物实验
电泳之前纯化测序反应产物以去除多余的、尚未结合的染料终止子是非常必要的。离心柱可以是快速、有效地去除未结合的染料终止子。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒甲酰胺核酸寡核苷酸仪器、耗材ABI PRISM 3100Genetic Analyzer微量离心管DTR
纯化测序反应产物实验
试剂、试剂盒 甲酰胺核酸寡核苷酸仪器、耗材 ABI PRISM 3100Genetic Analyzer微量离心管DTR Gel Filtration Cartridges (Edge Biosystems)或相应的真空浓缩仪实验步骤 一、材料1.缓冲液和溶液样品上样液所用的样品上样液取决于所用的设
纯化测序反应产物实验
试剂、试剂盒 甲酰胺 核酸 寡核苷酸 仪器、耗材 ABI PRISM 3100Genetic An
Fab片段抗体表达产物的纯化和鉴定
实验概要本实验介绍了三种抗体纯化的方法。实验步骤1. 抗Fab片段抗体亲和层析纯化法 1) 偶联抗人或抗鼠Fab片段抗体到Protein G Sepharose，将纯化的抗人或鼠Fab片段抗体以2mg/ml的比例与Protein G Sepharose凝胶珠溶液混合，室温旋转孵育1h。用
Fab片段抗体表达产物的纯化和鉴定
实验概要本实验介绍了三种抗体纯化的方法。实验步骤1. 抗Fab片段抗体亲和层析纯化法 1) 偶联抗人或抗鼠Fab片段抗体到Protein G Sepharose，将纯化的抗人或鼠Fab片段抗体以2mg/ml的比例与Protein G Sepharose凝胶珠溶液混合，室温旋转孵育1h。用
细菌代谢产物的观察实验
实验方法原理 由于各种细菌具有不同的酶，故分解糖类的能力不同，分解糖类后的终末产物亦不一致，例如肠道非致病菌一般均有乳糖酶，能分解乳糖产酸(乳酸，甲酸，乙酸等)，尚有甲酸脱氢酶。能将甲酸进一步分解产生气体( CO2，H2)，而肠道致病菌一般无乳糖酶，不能分解乳糖，因此，细菌的糖发酵试验，可用于鉴
BIORAD－采用－Profinity－eXactTM融合标签表达系统纯化无标签...
BIORAD 采用 Profinity eXactTM融合标签表达系统纯化无标签的重组蛋白亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性，就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合，从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方法不同之处在于
PCR产物纯化方法
Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid
简述PCR－产物纯化
PCR 反应完成目标 DNA 的扩增后，PCR 产物可以用于进一步的研究，例如用于 DNA 测序、克隆、分析基因的功能和表达等。然而，通过 PCR 反应后体系中仍然存在具有活性的 DNA 聚合酶，剩余的 dNTP、引物以及反应缓冲体系中的各种金属离子等。因此，我们必须通过一定的方法从反应体系中提纯
蛋白质的表达、分离、纯化实验
实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程
蛋白质的表达、分离、纯化实验
基因重组—层析法 实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转
pcr产物的纯化与回收实验报告
PCR产物的直接纯化： 一、原理 PCR产物一般都含有过量的引物、 Taq DNA酶及dNTP，这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程,因此有必要除去。目前核酸纯化的方法有很多,商用化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变得更加简便快捷。本实验中, Buffer PCR
以磁性顆粒为基础纯化－PCR－产物实验
试剂、试剂盒 乙醇 PCR 样品 仪器、耗材 自动定位器 吸头 液体处理自动机械
以磁性顆粒为基础纯化－PCR－产物实验
试剂、试剂盒 乙醇PCR 样品仪器、耗材 自动定位器吸头液体处理自动机械分离装置平板密封条PCR 纯化系统实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇，80%2. 核酸和寡核苷酸在 96 孔板中的 PCR 样品（不多于100ul/孔）3. 特殊设备3 台单位置的实验用自动定位器（BeckmanCo
以磁性顆粒为基础纯化－PCR－产物实验
MagneSil 是一种顺磁性硅质顆粒，能够充当可移动的固相物质而用于捕获双链 DNA 片段。通过洗涤黏附于硅质顆粒上的靶复合物来去除残留污染，从而纯化的目的 DNA。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒乙醇PCR 样品仪器、耗材自动定位器吸头液体处理自动机械分
PCR扩增产物鉴定与纯化实验原理及实验过程
实验原理琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。（原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验）本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统，结合DNA制备膜技
PCR扩增产物鉴定与纯化实验原理及实验过程
实验原理琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。（原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验）本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），该试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收并纯化DNA片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统，结合DNA制
重组的果蝇－ACF－的表达和纯化实验
实验方法原理 实验材料 高滴度的 Acf1－FLAG 和 ISWI 杆状病毒储液晚对数期的悬浮培养的 Sf9 细胞试剂、试剂盒 公磷酸缓冲盐溶液（PBS）裂解缓冲液 FFLAG-M2 树脂 1：1（V V）悬浮液（Sigma－Aldrich）稀释缓冲液 F洗涤缓冲液 F洗脱缓冲液 F液氮牛血清白蛋白
重组的果蝇－ACF－的表达和纯化实验
实验材料高滴度的 Acf1－FLAG 和 ISWI 杆状病毒储液晚对数期的悬浮培养的 Sf9 细胞试剂、试剂盒公磷酸缓冲盐溶液（PBS）裂解缓冲液 FFLAG-M2 树脂 1：1（V V）悬浮液（Sigma－Aldrich）稀释缓冲液 F洗涤缓冲液 F洗脱缓冲液 F液氮牛血清白蛋白 （BSA） 标准
PCR产物的回收纯化
PCR产物的回收纯化的目的是：高质量DNA；除去蛋白（如酶等），RNA，无机盐（NaCl超过150 mM对T4连接酶有抑制作用），小于100 bp的短片段（如引物DNA），有机小分子（如dNTP、Agrose、EB、甘油、矿物油）。
PCR产物常规纯化方法
大批量、廉价、用于测序的PCR产物纯化方法--PEG沉淀 最近，摸索了一下PEG沉淀PCR产物的方法，贴出来，与大家共享。 目的：探索一种方法，能将PCR产物大批量地、廉价地、纯度比较高地纯化出来，并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA，用于DNA测序。 有文献和方法说，不同浓度的PEG能沉淀不
PCR产物的直接纯化
实验概要本实验介绍了PCR产物直接纯化的原理及操作步骤。实验原理PCR产物一般都含有过量的引物、Taq DNA酶及dNTP，这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程，因此有必要除去。目前核酸纯化的方法有很多，商用化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变得更加简便快捷。本实验中
细菌代谢产物的观察实验_糖发酵试验
细菌的代谢产物大致可分为三类：一为可供鉴别细菌的产物；二为与细菌致病性有关的产物；三为可供治疗用的代谢产物。实验方法原理由于各种细菌具有不同的酶，故分解糖类的能力不同，分解糖类后的终末产物亦不一致，例如肠道非致病菌一般均有乳糖酶，能分解乳糖产酸(乳酸，甲酸，乙酸等)，尚有甲酸脱氢酶。能将甲酸进一步分
细菌代谢产物的观察实验——色素产生试验
实验方法原理有些细菌能产生色素，可作为鉴别某些细菌的根据。实验步骤将金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌分别划线接种于琼脂平板上，置37 ℃温箱培养24 小时后，取出观察两菌所产生的色素。金黄色葡萄球菌的色素仅使菌落呈金黄色，属脂溶性色素；绿脓杆菌的色素则弥散至培养基中，使整个培养物呈现绿色，属水溶性色素。