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辐射法分离细胞集落

实验方法原理 将培养瓶倒置放于 X 射线机或 60Co 源下,用铅块遮蔽需要的集落。实验材料 D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材 生长培养基X射线或钴源铅块实验步骤 1. 选择想要的集落,用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔做记号。2. 选出一块大小适当的铅块。3. 将培养瓶拿至放射源处。4. 将培养瓶倒置放于放射源下方。5. 用 2 mm 厚的铅块(用 2 mm 厚的铅条切出的直径约 2~5 mm 大小的铅块)遮蔽需要的集落。6. 用 30 Gy 的辐射强度照射培养瓶。7. 将培养瓶重新放回无菌环境,撤去培养基,胰蛋内酶消化,使细胞在原培养瓶中重新生长。接受辐射的细胞可作为饲养层细胞。注意事项 X 射线机或 60Co 源一定要在严格监控下使用, 正确检查以确保自己及他人暴露部位的安全。做此类试验前, 应与地方放射性保护官员取得联系。......阅读全文

原代细胞的培养与建系-4

4.软琼脂克隆分离法   本法仅适用于悬浮培养的类淋巴细胞或恶性程度高的贴壁细胞,而正常贴壁细胞在软琼脂中不能形成克隆。   (1)将对数生长期的细胞制成单个细胞悬液(贴壁细胞用0.25%胰蛋白酶消化使之分散成单个细胞)作活细胞计数。调整细