刀豆球蛋白A(ConA)凝集实验

实验方法原理 刀豆球蛋白属凝集素:凝集素(Lectin)是一类可结合特定糖基的蛋白质。每个凝集素分子有两个以上的结合位点。癌细胞和转化细胞所需凝集素的浓度比正常细胞低,这可能与细胞表面凝集素受体分布有关;正常细胞分散,癌细胞较集中,结合性增强。实验材料 细胞试剂、试剂盒 PBSConA仪器、耗材 振荡器玻璃板实验步骤 1. 细胞悬液制备用pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)制成每毫升含10×104 个细胞的悬液;2. ConA PBS用PBS配制成0.59 %的ConA液;3. 凝集试验向若干凹孔玻璃板凹中加细胞悬液,每凹加0.1 ml,再分别加入ConAPBS 0.1 ml,使ConA的最终浓度依次为:100、50、25、12.5 和零(对照) μg;4. 置微型振荡器上振荡5~10 分钟后,观察凝集现象。5. 结果如细胞悬液变成絮状物,说明已发生凝集;细胞凝集反应是测试......阅读全文

关于植物凝集素对昆虫的作用

  植物凝集素对昆虫如同翅目昆虫及动物产生毒害的机理还不清楚,一般认为植物凝集素可能通过和糖蛋白,如和昆虫围食膜表面、消化道上皮细胞的糖缀合物、或糖基化的消化酶等结合,从而影响昆虫、动物对营养吸收,促进消化道中细菌的繁殖和诱发病灶,抑制昆虫的生长发育和繁殖,最终达到杀虫、或对动物产生毒害的作用。  

刀豆的介绍

  刀豆(学名:Canavalia gladiata(Jacq.) DC. ),豆科刀豆属植物。[1]  刀豆属缠绕草本,长可达数米,羽状复叶,小叶卵形,基部宽楔形,侧生小叶偏斜,叶柄常较小叶片为短,小叶柄被毛,花梗极短,小苞片卵形,早落,花冠白色或粉红,旗瓣宽椭圆形,顶端凹入,子房线形,被毛。荚果

间接凝集抑制实验

若使可溶性抗原与相应抗体先混合,充分作用后再加入有关的免疫微球,因抗体已被可溶性抗原结合,不再出现免疫微球的被动凝集现象,叫间接凝集抑制实验,临床化验检查中常用的免疫妊娠实验就是一种间接凝集抑制实验。妊娠实验孕妇尿中绒毛膜促性腺激素的含量比正常尿高。因此当往尿中加入抗绒毛膜促性腺激素抗体时,由于发生

凝集反应实验

实验方法原理 玻片凝集法可利用已知抗血淸鉴定未知细菌,优点是极端快速,为诊断肠道传染病时鉴定病入标本中肠道细菌的重要手段。血清学反应的基本组成成分除抗原与相对应的抗体外,尚需加入电解质(一般用生理盐水)。电解质的作用主要是消除抗原抗体结合物表面上的电荷,使其失去同电相斥的作用而转变为互相吸引,否则即

亲和层析实验:常规方法(二)

二、配基的选择选择合适的配基,需要对配基和靶分子之间的天然相互作用有一定的认知及理解。靶分子与配基的相互作用必须是特异性结合,并且在不同的结合和洗脱条件下均应该稳定。此外,制订亲和纯化的方案时,需着重考虑能否购买到商品化配基,还是需要从头研制配基和介质。后者的成功在很大程度上取决于对蛋白质结构和相互

T细胞表面受体主要种类介绍

⑴T细胞受体(TcellreceptorTCR) 为T细胞特异性识别抗原的受体。成熟T细胞功能性的TCR大多由α和β两条肽链所组成,称为TCRαβ,少部分为TCRγδ。与免疫球蛋白轻链和重链的结构相类似,TCR的α和β链各有一个靠近N端和可变区(V区)和靠近胞膜的恒定区(C区)。由于α和β链是由V-

什么是受体介导的内吞作用

目的 观察刀豆素A(ConA)与小鼠腹腔巨噬细胞表面ConA受体结合、内吞、转运及巨噬细胞自噬、凋亡的形态学变化,以探讨受体介导内吞与自噬体形成和细胞凋亡之间的关系.方法 用辣根过氧化物酶(HRP)标记ConA(ConA-HRP)与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,不同时间取出部分巨噬细胞,制备电镜标本,观察

植物蛋白质组学和糖基化实验(二)

刀豆球蛋白 A (ConA)- 过氧化物酶方法(根据参考文献 20 修改的方法)。( 1 ) 通过 1D 或 2D 电泳分离,并转移到硝酸纤维素膜上。( 2 ) 用 TTBS 缓冲液浸泡印迹膜 1 h。( 3 ) 将印迹膜在含有 ConA ( 25 μg/ml)的 TTBS 缓冲液中,室温下温育 2

血球凝集和血球凝集抑制实验——血凝抑制

实验材料新城鸡瘟病毒试剂、试剂盒抗鸡瘟病毒血清生理盐水仪器、耗材大孔塑料板小孔塑料板注射器实验步骤1.  依下表加入各种品(单位:ml) 2.  最高稀释孔仍呈完全抑制凝集,该血清稀释度即为血凝抑制效价。展

直接凝集反应实验——玻片凝集反应

实验材料诊断血清试剂、试剂盒生理盐水仪器、耗材载玻片毛细吸管显微镜实验步骤1.  取清洁玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。无菌操作下,用接种环于1、2格内加1:10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴,第三格加1~2滴生理盐水。2.  无菌操作下,用接种环取伤寒杆菌培养物少许,混于第三格中,再混于第一格

直接凝集反应实验——试管凝集反应

实验材料诊断血清试剂、试剂盒生理盐水仪器、耗材试管吸管实验步骤一、操作步骤1.  取洁净小试管14只分两排排列于试管架上,每排7只依次用蜡笔注明号码,于每管中分别加入0.5毫升生理盐水。2.  在第1排1管中加入1:10稀释伤寒H血清0.5毫升,于管内连续吹吸3次,使血清与盐水充分混合,而后吸出0.

断裂标记免疫电镜技术(2)

)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸,室温固定2h,系列酒精或丙酮脱水,常规电镜包埋。⑦切半薄片,光镜定位合适的断裂部位,再切超薄切片,铀铅染色,透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术,常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C

淋巴细胞转化试验有哪些不同的检测方法

  工具/原料  RPMI1640 培养液  Hank's 液  刀豆蛋白A(Concanvalin A, ConA),用RPMI1640 液配成1mg/ml,分装小瓶,冷冻保存  MTT 1mg/ml  2.5%碘酒、75%酒精  方法/步骤  小鼠脾细胞悬液的制备:  取一个灭菌的平皿,

间接凝集反应实验

实验方法原理 间接血球凝集试验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面,此时红血球即称为“致敏红血球”。这种致敏的红血球具有细菌的抗原性,与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的多糖物质浸出,去除类脂以免干扰红血球的吸

直接凝集反应实验

实验材料 诊断血清试剂、试剂盒 生理盐水仪器、耗材 载玻片毛细吸管显微镜实验步骤 1.  取清洁玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。无菌操作下,用接种环于1、2格内加1:10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴,第三格加1~2滴生理盐水。2.  无菌操作下,用接种环取伤寒杆菌培养物少许,混于第三格中,再混

玻片凝集实验的方法

人类ABO 血型鉴定试验(玻片法)1.原理人类ABO血型抗原有A和B两种。A型红细胞膜上有A抗原,B型红细胞上有B抗原,AB型有A和B两种抗原,而O型则不含有A和B抗原。据此,如分别将抗A和抗B血清与待测红细胞混合,抗A和/或抗B血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集,根据其凝集状况便可判

免疫学实验凝集实验介绍

凝集实验介绍:  凝集实验是血清学试验方法中的一种,血清学试验是抗原抗体在体外出现可见反应的总称,故又称抗原抗体反应。它可以用已知抗体(细菌抗血清)检测未知抗原(待检细菌);也可用已知抗原(已知病原菌)检测患者血清中的相应抗体及其效价,是临床诊断、实验室研究和细菌学鉴定的重要手段之一。凝集实验正常值

凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(2)

(一)正向间接血凝试验 将绵羊红细胞或人的“ O”型红细胞用醛类固定(称为醛化,可改变血球表面性质,使其易于吸附蛋白质类抗原,并可长期保存使用),再将可溶性抗原吸附于醛化的血细胞上,制成抗原致敏的红细胞,当与相应的抗体结合,使红细胞被动的聚合在一起,出现肉眼可见的凝集

凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(2)

(一)正向间接血凝试验   将绵羊红细胞或人的“ O”型红细胞用醛类固定(称为醛化,可改变血球表面性质,使其易于吸附蛋白质类抗原,并可长期保存使用),再将可溶性抗原吸附于醛化的血细胞上,制成抗原致敏的红细胞,当与相应的抗体结合,使红细胞被动的聚合在一起,出现肉眼可见的凝集现象

凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(1)

凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合,在适量电解质存在的条件下,形成肉眼可见的凝集现象。一、直接凝集反应 颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)直接与相应特异性抗体结合,在适量电解质存在条件下,出现肉眼可见的凝集现象,称直接凝集反应。参加凝集反应的抗原称为凝集

凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(1)

凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合,在适量电解质存在的条件下,形成肉眼可见的凝集现象。 一、直接凝集反应 颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)直接与相应特异性抗体结合,在适量电解质存在条件下,出现肉眼可见的凝集现象,称直接凝集反应。

淋巴细胞的分离和激化实验

实验试剂1. PBS(Dulbecco):   0.10g/L 无水CaCl2   0.20g/L KCl   0.20g/L KHPO4   0.10g/L MgCl2.6H2O   8.00g/L NaCl   2.16g/L NaH2PO4.7H2O   调pH至7.42. 生长培养基:  

淋巴细胞的分离和激化实验

实验试剂1. PBS(Dulbecco):   0.10g/L 无水CaCl2   0.20g/L KCl   0.20g/L KHPO4   0.10g/L MgCl2.6H2O   8.00g/L NaCl   2.16g/L NaH2PO4.7H2O   调pH至7.42. 生长培养基:  

IL1生物学活性检测

实验方法原理 IL-1与小鼠胸腺细胞共同培养时,IL-1可刺激小鼠胸腺细胞增殖。进一步通过3H-TdR掺入法或染料摄入法判定小鼠胸腺细胞增殖量,推定IL-1的生物学活性。通过检测IL-1的生物学活性,可了解单核-巨噬细胞等的功能。实验材料 小鼠胸腺细胞试剂、试剂盒 FCS-RPMI-1640培养液L

联合免疫缺陷病的临床检查方法

1.实验室检查(1)严重联合免疫缺陷病体液与细胞免疫功能均明显异常。通常:IgG、IgA与IgM很低,但少数患者可能有1~2项Ig正常。部分病例血液和淋巴组织B细胞减少,而有些病例则可能基本正常。细胞免疫试验均异常,外周血T细胞数明显减少。T细胞功能试验亦明显异常。(2)伴有血小板减少及湿疹的免疫缺

关于联合免疫缺陷病的检查试介绍

  1.实验室检查  (1)严重联合免疫缺陷病体液与细胞免疫功能均明显异常。通常:IgG、IgA与IgM很低,但少数患者可能有1~2项Ig正常。部分病例血液和淋巴组织B细胞减少,而有些病例则可能基本正常。细胞免疫试验均异常,外周血T细胞数明显减少。T细胞功能试验亦明显异常。  (2)伴有血小板减少及

淋巴细胞的分离和激化实验

实验概要本实验从全血中收集富含白细胞的血浆,然后通过Ficoll-Hypaque离心,沉淀细胞悬于含不同细胞分裂剂的培养基中,刺激细胞生长。主要试剂1. PBS(Dulbecco):    0.10g/L 无水CaCl2    0.20g/L KCl    0.20g/L KHPO4    0.10

EB病毒转化成淋巴细胞

实验材料全血试剂、试剂盒刀豆凝集素A仪器、耗材RPMI 生长培养基离心管实验步骤1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生长培养基。生长培养基(RPMI1640 800 ml,FBS 200 ml,2 mmol/L-谷氨酰胺,5 μg/ml 两性霉素,50 μg/ml 庆大霉素)2.

EB病毒转化成淋巴细胞

            实验材料 全血 试剂、试剂盒 刀豆凝集素A 仪器、耗材

关于刀豆的繁殖方法

  用种子繁殖。于4月上旬清明前后播种,由于种皮坚硬,吸水慢,要先用水浸泡一昼夜后再播。按行距60厘米,窝距45厘米,深10厘米挖窝,每窝播种子3-4颗,施猪粪水后,盖火灰及细土约厚4厘米。不能使用人粪,因易烂种烂根。