耐热四膜虫的电穿孔转化实验
实验材料 抗生素抗性细胞试剂、试剂盒 Tris抗生素复合物 HEPES仪器、耗材 烧瓶Cormung 塑料圆锥形试管实验步骤 1. 培养适当的 2 种不同交配型的抗生素抗性细胞到对数期。2. 以约 2X105 细胞/ml，在 10 mmol/L pH 7.5 的 Tris 中洗涤细胞，常规交配使细胞饥饿 6~24 小时。3. 检测每种交配型细胞密度，调为 3X105 细胞/ml。在烧瓶中混合等量的相反交配型的细胞，体积适当，以确保固定时通气量合适。4. 添加抗生素复合物，用铝箔或棉絮塞子盖上烧瓶。5. 开始交配，让细胞在 30℃ 静置。6. 4~6 小时后，检测交配效率。如细胞配对超过 80%，接着进行转化步骤。7. 交配 10 小时后，将细胞转到 50 ml 的 Cormung 塑料圆锥形试管中，用 pH 7.5 的 10 mmol/L HEPES 轻轻洗涤细胞。8. 在 10 mmol/L HE......阅读全文
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
实验材料 抗生素抗性细胞 试剂、试剂盒 Tris 抗生素复合物 HEPES
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
实验材料抗生素抗性细胞试剂、试剂盒Tris抗生素复合物HEPES仪器、耗材烧瓶Cormung 塑料圆锥形试管实验步骤1. 培养适当的 2 种不同交配型的抗生素抗性细胞到对数期。2. 以约 2X105 细胞/ml，在 10 mmol/L pH 7.5 的 Tris 中洗涤细胞，常规交配使细胞饥饿 6~
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
耐热四膜虫的电穿孔转化 实验材料 抗生素抗性细胞 试剂、试剂盒
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
实验材料 抗生素抗性细胞试剂、试剂盒 Tris抗生素复合物 HEPES仪器、耗材 烧瓶Cormung 塑料圆锥形试管实验步骤 1. 培养适当的 2 种不同交配型的抗生素抗性细胞到对数期。2. 以约 2X105 细胞/ml，在 10 mmol/L pH 7.5 的 Tris 中洗涤细胞，常规交配使细胞
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG3350仪器、耗材YPAD 液体培养基涡旋振荡器实验步骤1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒三梨糖醇仪器、耗材PM 或 YE 培养基实验步骤1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞，至滴度到每毫升 1X107 个细胞。2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度
将DNA导入酵母细胞实验_电穿孔转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇（DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪：如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽（
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
四膜虫的保存实验——四膜虫的冷冻
实验材料细胞试剂、试剂盒Tris仪器、耗材培养基实验步骤1. 在培养基中将细胞培养至对数生长中期。如需要，可使用抗生素和/或杀真菌剂。2. 在 pH 7.4 的 10 mmol/L Tris 中低速离心轻洗细胞 1 次，弃上清，低速离心重悬细胞，弃上清。3. 用 10 mmol/L Tris 重悬细
四膜虫的保存实验——四膜虫的短期贮存
实验材料健康细胞试剂、试剂盒蛋白酶胨仪器、耗材培养试管实验步骤1. 将少许健康细胞无菌转入装有 5 ml 无菌的 0.1 mg/ml 蛋白酶胨的带旋帽的培养试管中。2. 将试管帽旋松，在室温下垂直保存细胞。
四膜虫的保存实验—冷冻四膜虫的融解
实验材料细胞仪器、耗材培养基冷冻管实验步骤1. 将 25~50 ml 培养基预热至 30℃。2. 将冷冻管放入 38~40℃ 的热水浴中搅拌，快速温暖细胞，直接加入一些预热的培养基。3. 一旦沉淀层松动，将其倒入装有预热培养基的培养瓶中。4. 30℃ 过夜孵育，中速振摇。5. 次日检测细胞生存力。
电穿孔转染－DNA－实验
电穿孔可以有效地转染磷酸钙-DNA 沉淀物等其他方法转染效果不好的细胞系。但是，与其他转染方法一样，未使用过的细胞系进行电穿孔转染的实验条件要经过优化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒Giem
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液 试剂、试剂盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸盐缓冲液
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒 Giemsa 染液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠载体 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿基因脉冲器 II电穿孔设备与电转化池Sorvall H1000B 转子或类似设备实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需
四膜虫的保存实验
四膜虫的短期贮存 四膜虫在保存培养基中的长期贮存 四膜虫在大豆培养基中长期贮存 四膜虫的冷冻 冷冻四膜虫的融解 实验材料
四膜虫的保存实验
四膜虫的短期贮存 四膜虫在保存培养基中的长期贮存 四膜虫在大豆培养基中长期贮存 四膜虫的冷冻 冷冻四膜虫的融解 实验材料
四膜虫的保存实验
实验材料 健康细胞试剂、试剂盒 蛋白酶胨仪器、耗材 培养试管实验步骤 1. 将少许健康细胞无菌转入装有 5 ml 无菌的 0.1 mg/ml 蛋白酶胨的带旋帽的培养试管中。2. 将试管帽旋松，在室温下垂直保存细胞。
电穿孔转染真核细胞实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材 电穿孔仪器电击池实验步骤 1. 在完全培养液中培养特转染细胞至对数生长晚期，4℃ 640 g 离心5 min，收集细胞。 2. 将细胞沉淀用其半量体积的预冷电穿孔缓冲液重悬洗涤，4℃ 640 g 离心5 min。3. 对于稳
电穿孔转染真核细胞实验
电穿孔转染哺乳动物细胞 植物原生质体细胞 实验材料 哺乳动物细胞
电穿孔实验的步骤过程
电穿孔是具有几个不同阶段的多步骤过程。首先，将短的电脉冲，必须应用。典型的参数是300-400 mV，跨越膜的时间小于1 ms（注意：电池实验中使用的电压通常要大得多，因为它们被用于跨越大体积溶液的较大距离，所以横跨实际膜的结果场只是所施加的偏差的一小部分）。在施加这个电位时，膜像电容器一样充电通过
电穿孔实验的物理机制
电穿孔允许细胞引入高度带电荷的分子，例如不会被动地扩散穿过疏水性双层核心的DNA。这一现象表明，该机制是在膜上形成纳米级的充水空穴。虽然电穿孔和介电击穿这两者都是由电场的应用引起的，所涉及的机制是根本不同的。在电介质击穿中，阻挡材料被电离，产生导电通路。材料的变化因此是化学性质的。相比之下，在电穿孔
电穿孔转染真核细胞实验——电穿孔转染哺乳动物细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材电穿孔仪器电击池实验步骤1. 在完全
电穿孔技术实验室实践
电穿孔是用电穿孔器，在细胞溶液中产生静电场的专用器具进行的。将细胞悬浮液被吸取到一具有两个铝玻璃或塑料比色皿电极在其两侧。对于细菌电穿孔，通常使用约50微升的悬浮液。在电穿孔之前，将这种细菌悬液与质粒混合被改变。将混合物移液到比色杯中，设定电压和电容，并将比色杯插入电穿孔仪中。该过程需要电极和悬架之
四膜虫的营养生长实验
实验材料培养物仪器、耗材培养基培养瓶实验步骤1. 准备 1 L 10X 培养基；使用前稀释到 1X，并高压灭菌。2. 将 0.5~2 ml 的保存培养物无菌转入装有 50 ml 培养基的 125 ml 培养瓶中，用铝箔或灭菌的裹有干酪布的棉絮塞子盖上培养瓶。3. 通气培养生长。
四膜虫的营养生长实验
实验材料 培养物仪器、耗材 培养基培养瓶实验步骤 1. 准备 1 L 10X 培养基；使用前稀释到 1X，并高压灭菌。2. 将 0.5~2 ml 的保存培养物无菌转入装有 50 ml 培养基的 125 ml 培养瓶中，用铝箔或灭菌的裹有干酪布的棉絮塞子盖上培养瓶。3. 通气培养生长。
四膜虫细胞核的分离实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 辛醇PMSF仪器、耗材 搅拌机光学显微镜实验步骤 1. 检测所用细胞数量。2. 收获细胞前在冷环境中强力搅拌时，在所有溶液中加入蛋白酶抑制剂。3. 在培养基 A 中加入辛醇，混合均匀。在培养基 A 中加入辛醇和 PMSF，即为培养基 B。4. 用吊桶式转头在 250 ml