将DNA导入酵母细胞实验_电穿孔转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇（DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪：如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽（Bio-Rad)或0.15 cm间隙的微量 电穿孔槽（GIBCO BRL)。实验步骤1) 实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 mL YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。2) 转化前1天晚上，在装有500 mL YPD培养基的2 L无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过夜，直到细胞密度达1×lO8细胞/mL (OD6这一细胞密度表明细胞处于对数生长的中后期。如果对特定的菌株不知道其精确的生长期，可以用不同体积的饱和培养液接种3个不同的烧瓶（基本方案步骤2)。3) 于4℃以4000 g离心收获培养细胞，细胞用8......阅读全文
将DNA导入酵母细胞实验_电穿孔转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇（DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪：如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽（
将DNA导入酵母细胞实验_乙酸锂转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DNA50% (m V) PE
将DNA导入酵母细胞实验
乙酸锂转化 电穿孔转化 单链高分子质量载体DNA的制备 实验方法原理 实验材料
将DNA导入酵母细胞实验
实验方法原理 实验材料 待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DN
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG3350仪器、耗材YPAD 液体培养基涡旋振荡器实验步骤1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
质粒DNA导入细菌细胞实验——电转化法
实验方法原理高压电转化简单，快捷可靠，而且是目前效率最高的质粒DNA转化大肠杆菌方法。不过该方法需要电转化装置。实验材料菌落试剂、试剂盒LB甘油SOC仪器、耗材平板离心瓶聚丙烯管电阻器电转化池实验步骤1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液，37°C温和振摇培养5 h或过夜。2. 将2.5 m
将DNA导入酵母细胞实验_单链高分子质量载体DNA的制备
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 DNA (从鲑鱼精巢制备的DNA III型钠盐 Sigma #D1626)l×TE缓冲液 pH 8.0 缓冲液平衡酚1: 1 (W)酚 氯仿氯仿3 mol L 乙酸钠 pH 5.2100%乙醇 冰冷仪器、耗材超声波发生器实验步骤1) 将DNA溶于pH 8.0的1
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒三梨糖醇仪器、耗材PM 或 YE 培养基实验步骤1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞，至滴度到每毫升 1X107 个细胞。2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
质粒DNA导入细菌细胞实验
CaCl2转化法 一步法制备和转化感受态细菌实验 电转化法 实验材料 菌落 质粒DNA
质粒DNA导入细菌细胞实验
实验材料 菌落质粒DNA试剂、试剂盒 CaCl2仪器、耗材 培养基平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）
质粒DNA导入细菌细胞实验——CaCl2转化法
实验材料菌落质粒DNA试剂、试剂盒CaCl2仪器、耗材培养基平板实验步骤1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）培养至
如何选择BTX转基因仪（电转仪）？
1、确定目标对象：也就是你所有转的目的物是什么东西？ 细胞系和细胞类型 细胞类型包括人类、哺乳动物、细菌、植物、藻类、霉菌、寄生虫等 细胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyces Tobacco, Corn, Rice, Tomato，Tr
如何选择BTX转基因仪（电转仪）？（一）
1、确定目标对象：也就是你所有转的目的物是什么东西？ 细胞系和细胞类型 细胞类型包括人类、哺乳动物、细菌、植物、藻类、霉菌、寄生虫等 细胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyces Tobacco, Corn, Rice, Tomato
磷酸钙沉淀法将DNA导入细胞
实验概要本实验利用磷酸钙沉淀法将DNA导入细胞。有助于了解细胞转染技术原理和基本方法及磷酸钙沉淀法的基本技术要点。实验原理磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA 与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
将大片段插入－DNA－导入哺乳动物细胞和胚胎实验
基本方案1 通过质体融合将完整的 YAC 导入哺乳动物细胞 基本方案2 将细菌人工染色体（BAC或PAC)引入到哺乳动物细胞和小鼠胚胎中
电穿孔转染－DNA－实验
电穿孔可以有效地转染磷酸钙-DNA 沉淀物等其他方法转染效果不好的细胞系。但是，与其他转染方法一样，未使用过的细胞系进行电穿孔转染的实验条件要经过优化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒Giem
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒 Giemsa 染液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠载体 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿基因脉冲器 II电穿孔设备与电转化池Sorvall H1000B 转子或类似设备实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需
电穿孔转染－DNA－实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养液 试剂、试剂盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸盐缓冲液
将大片段插入－DNA－导入哺乳动物细胞和胚胎实验1
基本方案1 通过质体融合将完整的 YAC 导入哺乳动物细胞实验材料靶细胞：培养的贴壁生长的哺乳动物细胞带有以neo（G418-resistance)为筛选标记的 YAC 的酵母菌株试剂、试剂盒山梨糖醇SCE 溶液ST 溶液EDTA小鼠 Cot-1 DNA仪器、耗材SD dropout 培养基和培养板
将大片段插入－DNA－导入哺乳动物细胞和胚胎实验2
基本方案2 将细菌人工染色体（BAC或PAC)引入到哺乳动物细胞和小鼠胚胎中实验材料纯化的 BAC DNA试剂、试剂盒RNase A原核的注射缓冲液透析缓冲液I乙醇小鼠胚胎哺乳动物细胞灭菌素仪器、耗材含有合适的抗生素的LB培养基Qiagen Midi-prep 试剂盒培养箱高速离心机高速离心管玻璃离
酵母转化实验_乙酸锂转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基，然后
克隆化酵母DNA的操作实验——整合性转化
实验材料酵母实验步骤1. 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。 2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。 3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。2. 转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养