酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG3350仪器、耗材YPAD 液体培养基涡旋振荡器实验步骤1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，加 200 μl 灭菌水重悬细胞沉淀。3. 加 100 μl 细胞悬液到 50 μl 含有 100~150 ng 需转化的 DNA 和 20 μg 单链载体 DNA 的溶液中，充分混匀。4. 加 200 μl 50% 的 PEG3350，用涡旋振荡器快速混匀。5. 将混合物置于 42℃ 水浴孵育 15 分钟。6. 将混合物转移到冰冷的 0.2 cm BioRad 电穿孔杯中，用带有脉冲控制器或其他相应设备的 BioRad 基因脉冲器进行电穿孔，条件：1.5 kV、25 μFD、200 Ω。7. 立即加入 600 μ......阅读全文
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG3350仪器、耗材YPAD 液体培养基涡旋振荡器实验步骤1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_材料的准备
实验材料高分子量 DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液仪器、耗材微量离心管实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml TE 缓冲液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力搅拌器于 4℃ 搅拌过夜。2. 用大直径探头以最大功率超声处理 30 秒；应将探头在溶液中持续移动，以保证超声处理的均一
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒三梨糖醇仪器、耗材PM 或 YE 培养基实验步骤1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞，至滴度到每毫升 1X107 个细胞。2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_高效转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒LiAc仪器、耗材YPAD 平板YPAD 液体培养基实验步骤1. 取 10 μl 细胞在 YPAD 平板上涂布 2 cm2，培养过夜；或者接种 5 ml 的 YPAD 液体培养基，于 30℃ 震荡培养过夜。2. 将一瓶 YPAD 培养基于 30℃ 平衡过夜。3. 去 50 m
将DNA导入酵母细胞实验_电穿孔转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇（DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪：如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽（
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验
转化材料的制备 高效转化法 转化含有质粒的菌株 快速简便的转化法 实验材料 DNA
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验
转化材料的制备 高效转化法 转化含有质粒的菌株 快速简便的转化法 实验材料 DNA
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE 缓冲液双蒸水仪器、耗材 磁力搅拌器玻璃烧杯实验步骤 一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml 灭菌 TE 缓冲液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力搅拌器上剧烈搅拌 2~3 个小时以混匀。2. 将载体 DNA 溶液分装成 9 个 10 ml
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_快速简便的转化法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒LiAc仪器、耗材YPAD 平板YPAD 液体培养基实验步骤1. 将 10 μl 接种物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2，培养过夜。2. 对一个转化来说，在微量离心管中用 1.0 ml 灭菌水悬浮一接种环酵母菌。3. 离心沉淀细胞，将水去掉。4. 用 500 μl
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_转化材料的制备
实验材料DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液双蒸水仪器、耗材磁力搅拌器玻璃烧杯实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml 灭菌 TE 缓冲液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力搅拌器上剧烈搅拌 2~3 个小时以混匀。2. 将载体 DNA 溶液分装成 9 个 10 ml 和 10
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_转化含有质粒菌株
实验材料细胞试剂、试剂盒YPAD仪器、耗材培养瓶SC 减样选择培养基实验步骤1. 在一个 250 ml 的培养瓶中，接种该菌株到 25 ml 相应的 SC 减样选择培养基中，200 r/min 培养过夜。2. 检测每毫升细胞数，按 2.5X108 个细胞计算所需培养物体积。3. 将该体积的培养物加到
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
实验材料 抗生素抗性细胞 试剂、试剂盒 Tris 抗生素复合物 HEPES
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
耐热四膜虫的电穿孔转化 实验材料 抗生素抗性细胞 试剂、试剂盒
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
实验材料 抗生素抗性细胞试剂、试剂盒 Tris抗生素复合物 HEPES仪器、耗材 烧瓶Cormung 塑料圆锥形试管实验步骤 1. 培养适当的 2 种不同交配型的抗生素抗性细胞到对数期。2. 以约 2X105 细胞/ml，在 10 mmol/L pH 7.5 的 Tris 中洗涤细胞，常规交配使细胞
耐热四膜虫的电穿孔转化实验
实验材料抗生素抗性细胞试剂、试剂盒Tris抗生素复合物HEPES仪器、耗材烧瓶Cormung 塑料圆锥形试管实验步骤1. 培养适当的 2 种不同交配型的抗生素抗性细胞到对数期。2. 以约 2X105 细胞/ml，在 10 mmol/L pH 7.5 的 Tris 中洗涤细胞，常规交配使细胞饥饿 6~
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_LiAc转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒腺嘌呤亮氨酸LiAc仪器、耗材YEA 平板实验步骤1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等营养缺陷互补物的 YEA 或 PM 培养基中，于允许温度以 200 r/min 振荡培养防止酵母菌沉积
活体电穿孔法介绍
1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通
电穿孔法稳定转染
实验材料L8057-Y10细胞D-PBSA仪器、耗材培养瓶培养板F12 FB培养基G418(Invitrogen)选择性培养基电穿孔电穿孔专用杯电穿孔仪II电穿孔仪-II配套的效能扩增器-Plus实验步骤表达载体与 DNA 制备：pSVTKGH，线性化 [ Selden et al.，1986]此载
活体电穿孔法介绍
1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115
电穿孔法稳定转染
方案27.12 脂质体介导的瞬时转染 实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA
活体电穿孔法介绍
1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法（in vivo electroporation）是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115
电穿孔法稳定转染
实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA 仪器、耗材 培养瓶 培养板
活体电穿孔法介绍（一）
1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～1
活体电穿孔法介绍3
肝 脏由于肝脏的生理代谢十分旺盛，因此外源基因在肝脏中的表达时间往往很短暂，而且表达产物的水平也较低。为减少出血，可从小静脉注入，然后在肝脏上施加电场，能显著增强基因的表达。睾 丸相对于其他的转基因方法，活体电穿孔法可使外源基因在睾丸中产生大量和持久的表达。此外，很多研究人员希望利用活体电穿孔法将外
活体电穿孔法介绍1
1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～1
活体电穿孔法介绍2
电 压电穿孔时在能量导入一定的情况下设计施加电压的值。电压过低或过高都会影响外源基因的表达。电压过低时，无法造成细胞膜表面状态的改变，因而外源D 不能进入细胞内。电压过高时，局部组织积聚过多热量，造成细胞的死亡或组织失去功能，即使外源基因导入细胞，也无法进行正常的表达。哺乳动物常用的活体电压大多