核酸免疫实验
基 本 方 案 1 小 鼠 注 射 接 种DNA在免疫前应先阅读动物处理(附 录 2C) 和 接 种 的(附 录 2E) 指导说明。在正式实验之前需先进行肌肉和皮下注射练习; D N A 的精准注射对于免疫成功起关键作用。可以 用 India ink (或相同的染料)来定位注射的部位是否正确。材料2 mg纯化的表达质粒DNA (见实验策略和CPI 单 元 10. 3)无 菌 0.9% (m/V) 氯化钠100 mg/m l盐酸氯胺酮20 mg/ml 盐 酸 甲 苯 噻 曉(xylazine.HCl)合适品系的小鼠0.5 ml或 Im l的 2 7 号 或 3 0 号针头的注射器解剖刀,仅用于肌肉内接种(可选)外科手术用钉或缝合线,仅用于肌肉内接种小鼠固定板,仅 用 于皮下接种(可选)1.在 I.5m l的微量离心管中用乙醇沉淀2 mg纯化的表达质粒DNA (单 元 10. 1 中基本方案部分,步 骤 4〜8)。用 Iml无 ......阅读全文
小鼠免疫实验
实验方法原理 实验材料 任意品系小鼠(6~8 周)试剂、试剂盒 PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材 22-G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤 1. 准备等体积 PBS 含 25~100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液(200~40
肽核酸共组装及免疫激活研究获进展
近日,松山湖材料实验室副研究员魏裕双、研究员元冰团队与苏州大学教授杨恺团队合作,系统地阐明了抗菌肽LL37增强胞嘧啶-鸟嘌呤(CpG)免疫活性的新机制:即通过电荷比调控的自组装形成纳米结构,并激活多种细胞内化途径,从而实现CpG的高效递送和免疫应答的显著增强。相关成果发表于《今日材料生物》(Ma
免疫学实验免疫学实验细胞免疫检查介绍介绍
隐球菌病胶乳凝集试验介绍: 胶乳凝集试验检测新生隐球菌荚膜多糖抗原,是一种简便、快速、有效诊断隐球菌感染的实验室方法。它以胶乳颗粒为载体,表面连接有抗新生隐球菌抗体,形成致敏胶乳悬液, 如标本(血清、胸腔积液、支气管肺泡灌洗液或脑脊液)中含有一定量的隐球菌荚膜多糖抗原,则可产生肉眼可见的凝
免疫电泳实验_免疫电泳
实验材料待检抗原试剂、试剂盒抗体琼脂巴比妥缓冲液仪器、耗材电泳仪载物玻片打孔器玻璃铸型微量进样器实验步骤1. 取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板。2. 按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔。3.
核酸透射电镜样品制备实验
实验方法原理很多球状蛋白均能在水溶液或盐溶液的表面形成不溶的变性薄膜,在适当的条件下这一薄膜可以成为单分子层,由伸展的肽链构成为一个分子网。当核酸分子与该蛋白质单分子膜作用时会由于蛋白质的氨基酸碱性侧链基团的作用,使得核酸从三维空间结构的溶液构型吸附于肽链网而转化为二维空间的构型,并从形态到结构均能
琼脂糖核酸电泳标准实验步骤
琼脂糖核酸电泳1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子;2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液(一般20~30 ml);3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻,加入一滴荧光染
核酸透射电镜样品制备实验
核酸样品 实验方法原理 很多球状蛋白均能在水溶液或盐溶液的表面形成不溶的变性薄膜,在适当的条件下这一薄膜可以成为单分子层,由伸展的肽链构成为一个分子网。当核酸
核酸的定量测定实验——二苯胺法
实验方法原理DNA 分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解, 产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊醛, 后者与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物, 其反应为: 蓝色化合物在595 nm 处有最大吸收峰, 且DNA 在40~400 μg 范围内时, 光密度与DNA 浓度呈正比。在反应液中加入少量乙
PCR核酸检测实验室建设标准
能将微量的DNA大幅增加,是分子生物学研究和实验的常规方法,PCR实验室广泛应用于生物医学各个领域,例如:艾滋病检测,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的检测和诊断,DNA指纹,个体识别,亲子鉴定及法医物证等等。 标准的PCR 实验室分为四个区域,分别为: n1.试剂配制区; n2.样品
PCR核酸检测实验室建设标准
能将微量的DNA大幅增加,是分子生物学研究和实验的常规方法,PCR实验室广泛应用于生物医学各个领域,例如:艾滋病检测,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的检测和诊断,DNA指纹,个体识别,亲子鉴定及法医物证等等。标准的PCR 实验室分为四个区域,分别为:n1.试剂配制区;n2.样品处理区;n3.核酸扩增区;n
PCR核酸检测实验室建设标准
能将微量的DNA大幅增加,是分子生物学研究和实验的常规方法,PCR实验室广泛应用于生物医学各个领域,例如:艾滋病检测,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的检测和诊断,DNA指纹,个体识别,亲子鉴定及法医物证等等。 标准的PCR 实验室分为四个区域,分别为: n1.试剂配制区; n2.样品
免疫筛选实验
根据抗原-抗体相互作用的原理从群体中选出目的物的技术。如用抗体检测表达型的基因文库所合成的蛋白质,从而筛选出目的基因的克隆。实验方法基本方案 实验材料 cDNA 试剂、试剂盒 BHI 氯霉素 NaOH SSC 氯仿 异戊醇 TES SDS mRNA 甲硫氨酸 乙醇 乙酸钠 免疫沉淀缓冲液 仪器、
免疫筛选实验
根据抗原-抗体相互作用的原理从群体中选出目的物的技术。如用抗体检测表达型的基因文库所合成的蛋白质,从而筛选出目的基因的克隆。实验材料cDNA试剂、试剂盒BHI氯霉素NaOHSSC氯仿异戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸钠免疫沉淀缓冲液仪器、耗材转子硝酸纤维滤膜离心管微量多孔洗涤仪实验步骤1.
实验动物免疫方案
实验动物免疫方案1、抗原: 蛋白质、多肽、细胞器、细胞、组织等。2、免疫方式:皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射等。3、不同动物免疫所需抗原量(以蛋白免疫为例)>18-20kDa
免疫沉淀实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 裂解缓冲液稀释缓冲液SDSTrisTSA仪器、耗材 转子离心机实验步骤 1. 表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后,再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核,然后将所得上清在10000 g 离心1 min。 2. 一次性对上清进
免疫电泳实验
实验方法原理 免疫电泳的基本原理是将电泳和琼脂免疫扩散结合起来应用,即先将蛋白质抗原在琼脂内进行电泳,使分离成不同的电泳区带,然后在一定距离的抗体槽内加入抗血清,使进行免疫扩散沉淀反应,这样,每一电泳区带又可能产生一个以上的沉淀线条。因而此法克服了单纯琼脂扩散方法中的沉淀线重叠成束,不易鉴别的缺点,
免疫电泳实验
试剂、试剂盒 Tris-巴比妥缓冲液贮液电极缓冲液琼脂糖溶液实验步骤 1. Tris-巴比妥缓冲液贮液2.24 g 二乙基巴比妥酸,4.43 g Tris,0.053 g 乳酸钙,0.065 g 叠氮钠,用双蒸水溶解后,在容量瓶中定容至 100 ml。2. 电极缓冲液用双蒸水稀释 4 倍。3. 1%
免疫电泳实验
实验方法原理免疫电泳的基本原理是将电泳和琼脂免疫扩散结合起来应用,即先将蛋白质抗原在琼脂内进行电泳,使分离成不同的电泳区带,然后在一定距离的抗体槽内加入抗血清,使进行免疫扩散沉淀反应,这样,每一电泳区带又可能产生一个以上的沉淀线条。因而此法克服了单纯琼脂扩散方法中的沉淀线重叠成束,不易鉴别的缺点,大
免疫电泳实验
溶液的准备 倒胶 打孔与加样 电泳 检测 试剂、试剂盒 Tris-巴比妥缓冲液
免疫筛选实验
基本方案 实验材料 cDNA 试剂、试剂盒
免疫筛选实验
实验材料 cDNA试剂、试剂盒 BHI氯霉素NaOHSSC氯仿异戊醇TESSDSmRNA甲硫氨酸乙醇乙酸钠免疫沉淀缓冲液仪器、耗材 转子硝酸纤维滤膜离心管微量多孔洗涤仪实验步骤 1. 往微量滴定板的每孔中加入250 μl 含适当抗生素的选择性BHI培养液,并分别接种独立的cDNA克隆,37℃温育过
免疫沉淀实验
基本方案 制备抗体Sepharose 偶联物 抗Ig血清免疫沉淀放射性标记抗原 免疫沉淀放射性标记抗原 实验材料
实验动物免疫方案
1、抗原: 蛋白质、多肽、细胞器、细胞、组织等。2、免疫方式:皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射等。3、不同动物免疫所需抗原量(以蛋白免疫为例)>18-20kDa
实验动物免疫方案
实验材料兔子 小鼠 大鼠 绵羊 母鸡试剂、试剂盒抗原 Elisa试剂盒 消毒酒精 碘酒仪器、耗材注射器 针头 一次性手套 剪刀 镊子 动物固定架 塑料放血管 试管 血管夹 离心机 冰箱 手术器械用免疫学的基本理论和技术来诊断、预防和治疗疾病,并在此基础上开展的采用人工方法向机体输入由他人或动物产生的
免疫器官识别实验
实验材料 胎儿胸腺胸腺组织切片人脾组织切片人淋巴结切片鸡法氏囊实验步骤一、胸腺(Thymus)胸腺位于胸腔纵隔上部,胸骨后方。胸腺在胚胎期及出生后2 岁内生长很快,体积较大;2 岁后到青春期发育仍很快;但青春期后开始萎缩,逐渐由脂肪组织所代替,它在机体免疫功能的建立上占有重要地位。骨髓内有部分淋巴细
免疫PCR实验步骤
免疫PCR实验步骤,主要程序(1) 抗原+生物素化抗体→抗原-生物素化抗体复合物;(2) 加亲合素→抗原-生物素化抗体-亲合素复合物;(3) 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗体-亲合素-生物素化DNA;(4) PCR扩增生物素化DNA部分。免疫PCR实验步骤,实验步骤(1)制备生物素化DNA将噬粒
免疫核糖核酸的适应症和临床应用
适应证 临床适应证与转移因子相似。目前主要用于恶性肿瘤如肾癌、肺癌、消化道癌及神经母细胞瘤和骨肉瘤等的辅助治疗。也试用于慢性乙型肝炎和流行性乙脑,可使细胞免疫功能低下的部分患者恢复正常。 临床应用 1、肿瘤治疗用法尚不统一,一般多采用皮下注射或静脉滴注,剂量仍在探索中。 (1)皮下注射多
接种剂量与次数对核酸疫苗免疫效果的影响
核酸疫苗的特点是在体内的表达量低,但是持续时间长。核酸疫苗在动物或临床试验中的免疫程序一般都是3次,大动物或人体的接种量一般为500~1000ug。多数加强免疫在小动物中可以达到增强免疫应答和获得理想免疫保护效果的目的。Ulmer等报告,给小鼠分别注射1~100ug甲型流感病毒HA或NP DNA疫苗
接种部位的预处理核酸疫苗免疫效果的影响
Davis等报告,试验组小鼠免疫前肌肉注射100ul10mmol/L心肌毒素,对照组注射高渗蔗糖(25%W/V,用PBS溶解),然后两组分别接种等量HBsAgDNA疫苗。结果试验组抗~HBs水平较对照组高10倍以上。Danko等报告,在DNA接种前7天注射0.5%~0.75%丁哌卡可使外源基因的表达
免疫学实验免疫浊度技术介绍
免疫浊度技术介绍: 免疫浊度技术早期主要用于血清、尿和脑脊液中蛋白质含量的测定。免疫浊度技术是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,形成一定大小的抗原抗体复合物,使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时,形成的复合物随抗原量增加而增加,反应液的浊度亦随之增加,与一系列的标准品对照,即可计算出