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透射电镜超薄切片和染色实验

实验方法原理 实验步骤 1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小,取材部位要准确:由于用于电镜标本制备的固定液其渗透速度极慢,同时超薄切片的面积又很小,一般取材不超过 0.5-1mm3, 故取材时必须注意取材部位。如取材部位不当,则无法获得预期的结果。(3) 所用的固定液及器材都必须预冷,以尽可能降低离体细胞内水解酶的活性,减少细胞自溶,一般均将固定液保存于 4℃冰箱内,取材用的剪刀或手术刀片及载玻片可置于冰块上预冷。(4) 切割组织的刀、剪必须很锋利,操作时避免拉、扯、锯、压等动作所造成的机械损伤。如果标本是病毒的分离培养物,则必须注意其数量、浓度。这种培养......阅读全文

GS-Smart小型自动凝胶染色摇床在考马斯亮蓝染色的应用

  考马斯亮蓝染色法(CBB染色法)是目前蛋白质染色实验中相当常用的方法,它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制,号称目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一,而又比硝酸银染色等其他方法更简便且更加容易操作,因而得到了广泛应用。   考马斯亮蓝染色法的全实验过程有两个关键且耗时较长的步骤,分别是染色和脱

不同机型全自动凝胶染色仪的比较

凝胶染色是生物实验室内经常会遇到的实验操作,包括硝酸银染色实验和考马斯亮蓝染色脱色实验2大类。传统的凝胶染色实验一般都需要借助脱色摇床来完成,主要操作步骤有加液、换液、排液和清洗等,全程比较依赖人工参与,因此我们常把传统的凝胶染色称为人工或手动凝胶染色。由于使用脱色摇床而带来的非封闭性操作,手动凝胶

不同机型全自动凝胶染色仪的比较

  凝胶染色是生物实验室内经常会遇到的实验操作,包括硝酸银染色实验和考马斯亮蓝染色脱色实验2大类。传统的凝胶染色实验一般都需要借助脱色摇床来完成,主要操作步骤有加液、换液、排液和清洗等,全程比较依赖人工参与,因此我们常把传统的凝胶染色称为人工或手动凝胶染色。由于使用脱色摇床而带来的非封闭性操作,手动

Isotype胞内染色有哪些学问?来看看这篇文章怎么说

  对科研党来说,流式细胞术一点都不陌生,它以自己特有的方式从细胞蛋白水平定量检测目标蛋白的表达,并且能get到目标蛋白在各个细胞亚群中的表达,同时在细胞功能上也有很重要的作用,包括细胞凋亡,细胞周期,细胞增殖等等。  流式细胞术以细胞为研究对象,在流式细胞仪的作用下定量检测样品细胞的物理化学特征,

自动凝胶染色摇床在考马斯亮蓝染色实验中的应用

考马斯亮蓝染色法(CBB染色法)是目前蛋白质染色实验中相当常用的方法,它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制,号称目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一,而又比硝酸银染色等其他方法更简便且更加容易操作,因而得到了广泛应用。 考马斯亮蓝染色法的全实验过程有两个关键且耗时较长的步骤,分别是染色和脱色。通常,为了

单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

蛋白质的SDS-PAGE实验 传统的考马斯亮蓝染色实验 快速考马斯亮蓝染色实验 InstaStain Blue 凝胶纸染色实验 InstaStain Blue 凝胶纸染色实验 SYPRO Ruby 荧光染色实验 SYPR

小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中...

小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中的应用对比台式水平脱色摇床是生物学实验室常见的仪器设备,常用于普通凝胶电泳条带固定、考马斯亮蓝(CBB)染色脱色、硝酸银染色、蛋白质免疫印迹(Western Blot)、细胞培养和放射自显影等实验中。一般的台式水平脱色摇床主要是通过调节定幅载具的摆

免疫组化技术规范(二)

三、免疫组化实验中的抗原修复1.酶消化:如胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白水解酶2.抗原热修复:高压法、微波法、水煮法众所周知,免疫组化染色中最关键的莫过于抗原修复,而绝大多数常用抗体的修复是通过加热来完成的,热抗原修复优于酶消化,更有效,染色结果更易一致,操作单一。3.修复时间:既要获得最强的染色结果,又

几种常见的微生物基础实验

  本文介绍几种常见的微生物基础试验的目的、原理、内容等,以便刚刚接触微生物的同志们对试验有个基本的认识. 实验一 常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的    1、掌握配制培养基的一般方法和步骤;掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法; 

水平脱色振荡器使用倍感方便

  水平脱色振荡器使用倍感方便    水平脱色振荡器造型新颖,采用上下摇摆结构,适用于电泳凝胶分离谱带的固定,考马斯蓝染色和脱色时的振荡晃动,硝酸银染色时的固定、染色、显影等,放射自显影实验中X光底片的显影、定影,电泳转移后钎维素膜的进一步处理,如分子杂交、抗原--抗体的反应和染色,分子杂交,血

实验动物分组和标记编号方法

一、分组(一)   分组原则实验动物分组应严格按照随机分组的原则进行,使每只动物都有同等机会被分配到各个实验组中去,尽量避免人为因素对实验造成的影响。(二)   建立对照组实验动物分组时应特别注意建立对照组。对照组可分自身对照组和平行对照组。1.自身对照组自身

流式细胞术荧光那些事儿

自上世纪70年代问世以来,流式细胞术(FCM)在基础科研和临床诊断和治疗上得到了越来越广泛的应用。但是,做FCM往往会遇到荧光信号太弱的情况。好不容易搞了一管细胞去做流式,却做不出荧光信号。真的是急死个人。其实,毛博也是到米国做博士猴以后才开始做流式的。时间不算长。但是做得非常非常多。每天都要做好几

西瓜注水根本不可能

 近日,一则声称在市区买到注水西瓜的视频在网上流传。视频中,一男子称今年5月25日在市区下吕浦花27元买了个西瓜,用手掰开后看到里面都是水,怀疑是注水西瓜。得知该情况后,昨天下午5点多,市市场监管局工作人员实地前往市区下吕浦的南浦农贸市场和吕浦农贸市场,从市场内、外的水果摊位上购买了11个

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——检测

实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测,对于不同的目的,应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性,所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大

自动凝胶染色工作站和传统脱色摇床的操作对比

鼎昊源凝胶染色工作站在2012年中推出以来,受到了来自大学院校,科研机构和生物科技公司的广泛关注。在全国各地的高校和科研机构的试用和购买中都取得了良好的结果,包括:中国农科院、辽宁省农科院、江苏省农科院、天津农科院、中科院油料所、中国农业大学、华中农业大学、华南农业大学等多家单位。 DHS凝胶染色工

免疫组化技术规范(一)

欧美国家相继开展了免疫组化质量控制工作,建立了一套比较完善的质量控制方法和程序。中国病理工作者委员会(CCP)免疫组化研究中心借鉴国外的先进经验并结合我国当前的实际情况开始探索一种适合我国免疫组化质控的方法,同时,发现和推广标准化的染色程序,改善和提高免疫组化实验的可靠性,使免疫组化技术更具标准化,

固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验

方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备实验 方案2 双向凝胶电泳真核生物细胞裂解物的制备实验 方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验 方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验 方案5 第一向:蛋白质的等电聚焦电泳实验

免疫酶细胞化学实验技术-3

一、对照实验  1.吸收实验  应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时,需用相应的抗原吸收抗血清后,再孵育标本,判断结果的可信性(结果应为阴性)。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种(见本书第一章 ),对于不能形成沉淀,难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原,以固相吸收为佳

细菌的芽孢革孔雀绿染色和鞭毛染色

Ⅰ 细菌  芽孢染色 某些细菌在其发育的一定阶段可以形成一个内生孢子,即为芽孢。芽孢形成后并不脱离原细菌菌体,它的形状、大小和在菌体的位置都是一定的。老熟的芽孢可自菌体中脱落出来。芽孢结构上的特点是壁厚和细胞质浓厚,所以不易着色,通常多采用着色力强的染色剂和用加热等手段促使芽孢着色

细菌染色技术(单染技术与革兰氏染色)

细菌  个体微小,普通光学显微镜下不易直接观察,故常用染色技术使细菌细胞着色。包括细菌单染技术、细菌的革兰氏染色技术、细菌的芽孢染色技术、细菌的荚膜染色技术和细菌的鞭毛染色技术 Ⅰ、细菌的单染技术 简单染色通常只用一种染色剂,使细菌整个细胞染上颜色。但看不清结构。所以只便于检查

染色质免疫沉淀技术的应用

随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域,要想提供蛋白因子直接调控的证据,需要直接检测蛋白质-DNA的相互作用,而染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一种研

原位杂交组织化学技术的基本方法

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,核酸自动

原位杂交组织化学概述

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,核酸自动

蛋白质技术专题:聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度

  由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不相同。在

染色质免疫沉淀(ChIP)技术的难点

染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体的特异性反应,可以真实地反映体内蛋白分子与基因组DNA结合的状况。下面我们就最基本的实验步骤,实验中的小技巧以及需要注意的问题简单介绍一下。1.

原位杂交组织化学实验技术2

 DNA合成仪的诞生使制造寡核苷酸探针成为可能,与上述探针不同的是寡核苷酸探针不是克隆性DNA探针,它是由DNA合成仪依照所需杂交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便,价格低廉的优点,也可进行放射性与非放射性标记,但其特异性不如克隆性探针强,亦不如其杂交信号高。  原位杂交组织化学技术在近20年的发展

细菌鞭毛染色

许多细菌自细胞内长出一至许多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛细长透明,其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观察.但是在不染色情况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在.【实验目的】学习并掌握鞭毛染色的原理和方法.【实验原理】细菌的鞭毛非常纤细,直径一

细菌的芽孢革孔雀绿染色和鞭毛染色

Ⅰ 细菌  芽孢染色 某些细菌  在其发育的一定阶段可以形成一个内生孢子,即为芽孢。芽孢形成后并不脱离原细菌菌体,它的形状、大小和在菌体的位置都是一定的。老熟的芽孢可自菌体中脱落出来。芽孢结构上的特点是壁厚和细胞质浓厚,所以不易着色,通常多采用着色力强的染色剂和用加热等手

电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验

方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验 方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化:大规模方法 方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化:微量方法 方案4 用Ellman 试剂测定自由巯基和二硫键实验 方案5 蛋白质的胰酶消化实验 方案6 用溴化氰切割 M

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度

(一)原理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不