体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验
实验方法原理 抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性，最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 小牛血清DMEMDOX仪器、耗材 CO2培养箱无菌钢圈实验步骤 一、培养条件用含10%小牛血清的DMEM培养液，5%CO2，37℃培养。二、实验步骤1. 将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中，先用DOX（阿霉素）0.01 ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。2. 然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml，接着进行DOX低浓度的筛选。3. 随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC1作CHO和RC1对DOX的剂量-反应曲线，求CHO和RC1的IC50值。4. 抗性倍数即为RC1的IC50与CHO的IC50。注意事项 1. 要具备培养细胞的实验室条件，谨防污染。2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50......阅读全文
振动筛的模型建立
振动筛筛箱模型建立 利用有限元分析ANSYS软件建立筛箱的有限元模型，有两种方法，一种是直接利用ANSYS软件建立筛箱的实体模型，或在PRO/E软件中建立实体模型然后导入到ANSYS中，这种方法要耗费较长的时间建模、计算，而且有可能计算不出理想结果；第二种方法是利用ANSYS软件中的壳单元和板
基于人类多功能干细胞的微流体体外培养模型
密西根大学傅剑平教授团队设计了一种基于人类多功能干细胞的微流体体外培养模型。在该模型中，人类多功能干细胞可以非常近似的模拟人类胚胎着床早期的若干关键阶段的发育，并且具有高度的可控性及重复性。相关研究结果发表在Nature杂志,论文标题为“Controlled modelling of human
Stem－Cell－Reports：成功构建星形胶质细胞体外仿生模型
红色的是星形胶质细胞，绿色的是神经元，蓝色的是细胞核。 神经元在神经科学中一直很受关注，原因很好解释，它们是神经活动的重要的执行细胞。但是越来越多的证据表明，数量众多的星形细胞又称为星形胶质细胞（astrocytes）可不止是大脑赛场的占位队员。 众所周知，星形细胞以多种方式供养着神经元细胞，为
肿瘤细胞侵袭实验
Matrigel 基质膜模型 实验方法原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯
肿瘤细胞侵袭实验
Matrigel 基质膜模型 实验方法原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯
科研人员在体外建立并解析人8细胞期胚胎样细胞
3月22日，中国科学院广州生物医药与健康研究院Miguel A. Esteban研究组开发了一种非转基因、快速且可控的重编程方法，将人多能干细胞（PSC）诱导为全能性的8细胞期胚胎样细胞（8CLC），相关论文成果发表在《自然》（Nature）杂志上。研究人员运用单细胞测序技术，分析确定了
科研人员在体外建立并解析人8细胞期胚胎样细胞
3月22日，中国科学院广州生物医药与健康研究院Miguel A. Esteban研究组开发了一种非转基因、快速且可控的重编程方法，将人多能干细胞（PSC）诱导为全能性的8细胞期胚胎样细胞（8CLC），相关论文成果发表在《自然》（Nature）杂志上。研究人员运用单细胞测序技术，分析确定了
肿瘤模型的复制方法
肿瘤模型的复制方法 复制动物肿瘤的方法很多，如将实验动物用放射线照射或静脉、局部注射放射性同位素；使用各种化学致癌剂（烷化剂、多环芳香烃类、芳香胺类、氨基偶氮染料、亚硝胺类）；使用植物毒素（如苏铁素、黄樟素等）；使用金属（如铬、镍、砷、镉等）；使用RNA和DNA肿瘤病毒；使用多种致癌性霉菌毒素（其
动物肿瘤模型的选择
如上已述，不同种属、品系和类型的实验动物其肿瘤学方面的性状各不相同，肿瘤学研究工作应当熟悉实验动物科学的开发研究成果，对有关的资料有比较全面的了解，才能为自己的课题选到合适的实验动物肿瘤模型。 实验动物的肿瘤模型可以概括地区分为下面四类： （一）自发性肿瘤模型 实验动物种群中不经有意识的人工
体内耐药细胞株的建立实验
实验方法原理 细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受程度逐渐加强。实验材料 小鼠瘤株试剂、试剂盒 肝素生理盐水仪器、耗材 离心机实验步骤 一、材料准备1. 动物选择：根据欲建立的耐药细胞株，选择合适的动
体内耐药细胞株的建立实验
体内耐药细胞株的建立实验是通过细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身生物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp（或P-170）糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受。实验方法原理细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受
细胞培养实验室的建立
与其他一般实验技术的主要区别在于，细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无菌和不受其他有害因素的影响。因此，必须建立一个为细胞体外培养提供无菌环境的细胞培养实验室。一、实验室设计原则与要求细胞培养实验室的工作环境必须清洁、空气清新，干燥，无烟尘，无微生物污染，不受其他有害因素影响，便
上海巴斯德所建立新型丙型肝炎病毒细胞感染模型
12月，国际著名病毒学期刊Journal of Virology在线发表了中科院上海巴斯德研究所钟劲研究组的最新成果，该研究主要阐明了一种新型的丙型肝炎病毒细胞感染模型的建立。 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)主要经过血液传播，能导致急性和慢性肝炎，肝硬
多药抗药基因的表达实验
多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测特定基因的过度表达。一、细胞总RNA提取1. 收集约5×107个细胞，冷PBS洗涤。2. 加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的异硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸钠，0.025 mol/l 构橼酸钠pH7.0，0.25 mol/
多药抗药基因的表达实验
PCR扩增法 实验方法原理 大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。 多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测这些特
多药抗药基因的表达实验
实验方法原理 大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。实验材料 RNA试剂、试剂盒 PBS氯仿异丙醇萘酸异硫氰酸肽十二烷基肌酸钠构橼酸钠乙酸钠二疏基乙醇乙醇Taq酶仪器、耗材 离心机紫外分光光度计琼脂糖凝胶电泳PCR仪实验步骤 一、细胞总RNA提取1. 收集约5×107
肿瘤细胞培养实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 培养液Hanks胰蛋白酶EDTA胶原酶仪器、耗材 培养瓶离心管实验步骤 一、成纤维细胞排除法1. 机械刮除法 是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝），或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为（1）标记镜下
肿瘤细胞培养实验
肿瘤细胞培养实验 提高肿瘤细胞培养存活率和生长率的实验 实验方法原理 肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃
肿瘤细胞培养实验
肿瘤细胞培养实验可用于：（1）研究肿瘤的发生机理；（2）研究生物学行为；（3）研究抗肿瘤药物。实验方法原理肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃至繁殖、为研究癌变机理、抗癌药检测、肿瘤分子生物学提供大量的实验材料。实验材料肿瘤组织试剂、试剂盒培养液Hanks胰
表皮角质形成细胞模型构建实验
培养的表皮角质形成细胞可用作：（1）分化模型、器官型培养的理想组织构建物和细胞间相互作用的研究；（2）烧伤或外伤修复的移植物。实验方法原理用酶消化法将表皮与真皮分开，然后分离角质形成细胞，用无血清培养液培养或在生长停止的饲养层细胞上培养。 实验材料皮肤组织试剂、试剂盒热解素胰蛋白酶SKDM角质形成细
表皮角质形成细胞模型构建实验
实验方法原理 用酶消化法将表皮与真皮分开，然后分离角质形成细胞，用无血清培养液培养或在生长停止的饲养层细胞上培养。 实验材料 皮肤组织
转基因小鼠模型的建立(SOP)6
[洗卵管制作]1） 点燃酒精灯，调节火焰到最佳。捏持玻璃毛细吸管或巴氏移液管在火焰上焰旋转过火。2） 当吸管开始变软，快速撤离火焰，向外急剧扯拉使吸管变长，形成口径大约200?l的吸管。注意制备过程中离开火焰的时间以及扯拉的力度，尽量保证制备吸管的一致性。3） 为吸管评分，轻柔地折断吸管，辨别
核小体模型的建立基础和研究
人们接着用化学交联、高盐分离组蛋白，以及X衍射等方法进一步研究组蛋白多聚体的结构、排列以及怎样和DNA结合的，从而建立了核小体模型。1984年Klug和Butler进行了修正。核小体的构造可用图表示：每一个核小体结合的DNA总量为200bp左右，一般在150~250变化范围（micrococcal
转基因小鼠模型的建立(SOP)4
（6） 为保暖包裹小鼠于纱布中或将其放置于热垫内使其苏醒，处于麻醉状态下的小鼠应该严格监护直到其完全苏醒。手术后小鼠饲养2周后确定手术是否成功。（7） 实验性饲养：将1-2只母鼠与输精管切除小鼠合笼饲养，次晨进行阴道栓检查。有阴道栓的母鼠，用磷酸缓冲液处理后24小时，其输卵管潮红。卵细胞应该处于单
转基因小鼠模型的建立(SOP)8
（1） RNA的分离：根据实验者的需要从转基因小鼠组织或细胞中提取总RNA或mRNA。分离总RNA比较简单，且适合做基因做基因转录分析。实验操作参见第一章的第四节。（2） Northern 印迹分析：该技术用于定性检测转基因动物组织或细胞中转基因转录的相对水平。其实验操作参见第一章的第九节。（3
转基因小鼠模型的建立(SOP)7
10） 移卵操作完成后，撤回移卵管，去除器械，按原本位置将各器官重置于腹腔内。10）缝合切口，用小夹夹持皮肤。常用自动小夹代替缝线，这样可以避免小鼠啃嘶缝线，切口裂开。11）若进行双侧手术，则于另一侧子宫角重复上述操作。12）手术完成后，安置小鼠于清洁的笼中。麻醉状态下，小型哺乳动物无法有效维持机
转基因小鼠模型的建立(SOP)3
（2）受体母鼠的准备输卵管转移的受体鼠应该为4-6周龄大小，体重在20-25克左右，严禁用低体重以及超重母鼠，若体重较低，其体能不足以维持妊娠，可能导致受精卵的重新吸收；若体重较重，麻醉剂被吸收入脂肪组织，降低麻醉效果，可能使手术困难，而且脂肪组织的存在意味着静脉的存在，所以手术时切掉脂肪组织可能导
转基因小鼠模型的建立(SOP)1
名称：转基因小鼠模型的建立(SOP)关键词：转基因小鼠目的：在动物体研究转化基因原理：转基因动物是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。整合到动物染色体基因组的外源基因称为转基因。转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉及外源基因的构建、载体和受体的筛选、基因导人技术、供
转基因小鼠模型的建立(SOP)2
[不足之处]（1）外源基因随机整合；（2）个别原核不清晰，需进行特殊处理；（3）需大型精密仪器，费用昂贵；（4）操作周期相对较长。（二）实验器材的准备1．输精管切除术用器材：弯式有齿镊、直式有齿镊、显微镊、手术剪、自动小夹涂药器、自动小夹、带弯针4/0丝线及持针器、直径为10cm塑料 Petri氏培
转基因小鼠模型的建立(SOP)5
4．显微注射（1）导入DNA的制备：显微注射首先涉及导入DNA的制备，显微注射的转入基因通常为去除载体序列的线状DNA，转基因所用载体是真核表达载体，即含有在哺乳动物细胞内表达的真核启动子。所谓组织特异性的实现多是通过组织特异性启动子来实现组织特异性表达的。制备转基因小鼠，必须对待导入DNA进行分离