肿瘤细胞学上的常用实验方法
前几期，我们已经了解了肿瘤细胞的基本特征及培养手法等，接下来我们将会陆续为大家介绍各种常用的细胞实验技术。对于任何研究，一套系统的逻辑思路似乎比具体实验方法更重要。所以在介绍之前，我们就从药物研发的角度，和大家一起简单聊聊前人们的研究思路以及肿瘤学研究中一些常用方法与技术，欢迎互相讨论。 第一部分:以NCI为代表的药物筛选模式 该筛选模式即NCI基于NCI-60的抗肿瘤药物筛选模式，自1990年起，业界和学术界利用NCI-60细胞已筛选出10万余种化合物，这一方法也是目前肿瘤药物发现领域的中流砥柱。 首先看看它经历的4个发展阶段： 1955-1985年：体内筛选模型（in vivo）。以移植性肿瘤动物模型为基础，以动物生命延长率和肿瘤生长抑制率为药物基本评价指标； 1985-1990年：体外筛选模型（in vitro）逐渐取代体内模型。即放弃体内小鼠筛选，以人肿瘤细胞株为基础的体外抗肿瘤药物筛......阅读全文
肿瘤细胞学上的常用实验方法
前几期，我们已经了解了肿瘤细胞的基本特征及培养手法等，接下来我们将会陆续为大家介绍各种常用的细胞实验技术。对于任何研究，一套系统的逻辑思路似乎比具体实验方法更重要。所以在介绍之前，我们就从药物研发的角度，和大家一起简单聊聊前人们的研究思路以及肿瘤学研究中一些常用方法与技术，欢迎互相讨论。
分子克隆实验引入寄主细胞的常用方法
常用两种方法：①转化或转染，方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上，待DNA被吸收后铺在平板培养基上，再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子，通常重组分子的转化效率比非重组DNA低，原因是连接效率不高，有许多DNA分子无转化能力，而且重组后的DNA分子比
实验室常用哪些细胞破碎方法
一般用物理或者化学方法来使得细胞裂解物理法：（1）反复冻融：将细胞反复放置于-20℃冷冻以及25-30℃环境下，反复冷冻溶解10次-20次。适用于例如血细胞等大部分哺乳动物细胞。（2）煮沸法：与冻融法相反，将细胞放置于100℃沸水煮沸5-10分钟，适用于大部分微生物细胞。（3）超声法：将细胞放置于超
动物实验的常用方法
在医学教学、科研和医学工作中，不论是从事基础医学的还是临床医学、预防医学，都需要用实验动物来进行各种实验。通过对动物的实验的观察和分析，来研究和解决医学上存在的许多问题，动物实验方法已成为医学科学研究和教学工作中必不可少的重要手段。动物实验方法是多种多样的，在医学的各个领域内都有其不同的应用，其中一
肿瘤细胞侵袭实验
Matrigel 基质膜模型 实验方法原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯
肿瘤细胞侵袭实验
Matrigel 基质膜模型 实验方法原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯
普通实验室最常用的细胞计数的方法
细胞计数板法。步骤1.将计数板及盖玻片擦拭干净，并将盖玻片盖在计数板上；2.轻轻吹打细胞悬液，使细胞均匀分布；吸出少许细胞悬液滴在细胞入口，使细胞悬液充满盖玻片和计数板之间，静置1-2min，使细胞沉降；注意盖玻片下不要有气泡，也避免细胞悬液进入旁边的槽中；3.在显微镜下对A/B/C/D四个大格内的
常用的细胞转染方法
转染是将外源性基因导入细胞内的一种技术，是实验室工作中经常涉及的基本方法。常规转染技术可分为两大类：瞬时转染和稳定转染（永久转染）。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析；后者外源DNA
肿瘤细胞的培养方法
肿瘤细胞培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面，肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。1．取材：人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避
肿瘤细胞培养实验
肿瘤细胞培养实验可用于：（1）研究肿瘤的发生机理；（2）研究生物学行为；（3）研究抗肿瘤药物。实验方法原理肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃至繁殖、为研究癌变机理、抗癌药检测、肿瘤分子生物学提供大量的实验材料。实验材料肿瘤组织试剂、试剂盒培养液Hanks胰
肿瘤细胞培养实验
肿瘤细胞培养实验 提高肿瘤细胞培养存活率和生长率的实验 实验方法原理 肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃
肿瘤细胞培养实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 培养液Hanks胰蛋白酶EDTA胶原酶仪器、耗材 培养瓶离心管实验步骤 一、成纤维细胞排除法1. 机械刮除法 是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝），或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为（1）标记镜下
细胞凋亡试验常用的方法
细胞凋亡试验常用的方法（MTT法、荧光法、DNA琼脂糖凝胶电泳法与流式细胞仪检测法）（一）药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法：用培养基将肿瘤细胞调整至2 X108个/L，在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液于37℃、5% CO2下培养过夜。次日每孔加入不同浓度的药物100mg/L作为试验组，设加完
血细胞常用的染色方法
血细胞常用的染色方法是检验技师需要了解的知识，医学教育网搜索整理如下： 细胞涂片，在用普通光学显微镜观察之前需要固定和染色。固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持其原有结构不发生变化。染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞质、细胞核、细胞器等染上不同的颜色，便于显微镜下观察。各种细胞涂片
目前细胞计数的常用方法
Countstar自动细胞计数仪技术特点：1.宽泛的样本检测范围：测量浓度范围：1×104—3×107/ml；直径范围：5-180µm，可检测各种传代细胞及原代细胞，干细胞，藻类，浮游生物，酵母细胞，白细胞等。2.经济节约的配套耗材成本：每个样品测量盘可检测5个样品，提供实验结果的平行性及可重复性检
原代细胞常用纯化方法
人工纯化是利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件，抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。 1、细胞时间差酶消化法： 酶消化法是比较常用的纯化方法，不仅对贴壁细胞可行，能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，是两者分开，达到纯化的目的；另外对贴壁细胞与半贴壁细胞及黏附细胞
细胞生物基本方法：常用转化细胞
几种常用转化细胞和转化技术1）致癌化学物转化细胞：转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验1．取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入1875p
循环肿瘤细胞的检测方法
近年来随着现代医学研究技术的进步和CTC临床应用价值凸显，许多研究机构和研发团队都在推出不同的CTC检测技术。由于血液中CTC的含量极低，目前主流的检测方法是先捕获（富集）后检测，少量方法是不捕获（富集）直接检测。CTC检测技术包括CTC的富集（分离）和CTC的分析鉴定（识别）。本篇文章将介绍C
实验动物中常用的麻醉方法
(一)全身麻醉：麻醉药经呼吸道吸入或静脉、肌肉注射,产生中枢神经系统抑制,呈现神志消失，全身不感疼痛，肌肉松弛和反射抑制等现象，这种方法称全身麻醉。其特点为抑制深浅与药物在血液内的浓度有关,当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后,动物逐渐清醒，不留后遗症。吸入麻醉法 麻醉药以蒸气或气体状态经呼吸道吸入
实验室常用的消解方法
在化学检验中，消解处理是为了排除有机物和悬浮物干扰，将各种价态的元素氧化成单一高价态或转变成易于分离的无机化合物，从而得到清澈透明无沉淀的浓缩溶液用于检测分析。 消解处理主要应用于钙、镁、钠、锌、铜、铁、磷等微量成分的分析。实验室常用的消解方法主要有：干法消解（灼烧法）、湿法消解和微波消解三种。
常用的几种细胞破碎方法介绍
细胞破碎方法简述 随着重组DNA技术得到广泛应用以来，生物技术发生了质的飞跃。很多基因工程产物都是胞内物质，必须将细胞破壁，使产物得以释放，才能进一步提取，因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤，破碎方法的得当与否，直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将近年来常用的几种细胞破碎方法介绍一
常用的细胞染色方法有哪些
常用的细胞染色方法有：1、简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色；2、革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程；3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成；4、吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；5、细胞免疫荧光染色法，免疫荧
肿瘤细胞原代培养实验
组织块法 酶消化法 脱落细胞法 实验方法原理 肿瘤细胞的原代培养与正常细胞的原代培养的条件基本相似。一般常用原代细胞的基础培养基，10%血
肿瘤细胞原代培养实验
实验方法原理 肿瘤细胞的原代培养与正常细胞的原代培养的条件基本相似。一般常用原代细胞的基础培养基，10%血清浓度即可，在原代培养时需加入原代细胞培养的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利细胞生长。用细胞生长因子如胰岛素、氢化可的松、雌激素等等。也可以考虑动物媒介培养。根据细胞种类不同选用
肿瘤细胞原代培养实验
组织块法 酶消化法 脱落细胞法 实验方法原理 肿瘤细胞的原代培养与正常细胞的原代培养的条件基本相似。一般常用原代细胞的基础培养基，10%血
肿瘤细胞培养方法
肿瘤细胞培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面，肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。1、取材：人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避
实验室常用灭菌方法
实验医学微生物学常用的器材一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器材的处理及消毒措施都有不同。严格的消毒灭菌工作极为重要，直接影响着整个实验能否顺利进行。 (一)消毒灭菌方法 目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀
细胞培养常用设备及实验技巧（一）常用设备
准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气
常用细胞凋亡检测方法（三）
三、线粒体膜势能的检测 线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。 线
常用细胞凋亡检测方法集锦
细胞凋亡的形态学检测1 光学显微镜和倒置显微镜(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体.贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形