HLA分型技术(一)
HLA分型并不只是一种应用性的临床检测指标,免疫遗传学研究的发展,很大程度上依赖于以分型为主要手段的HLA多态性分析。60年代建立的并不断完善的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性;80年代起建立的DNA分型方法则侧重于基因的分型。 一、血清学分型技术 (一)HLA-Ⅰ类抗原的检测 HLA-A、B、C抗原型别鉴定均借助微量淋巴细胞毒试验(microlymphocytotoxicitytest)或称补体依赖的细胞毒试验(complement dependent cytotoxicity test)。原理为取已知HLA抗血清加入待测外周血淋巴细胞,作用后加入免补体,充分作用后加入染料,在倒置显微镜下判断结果,着染的细胞为死亡细胞,表示待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原。标准抗原清取自多次经产妇或计划免疫志愿者。 (二)HLA-DR、DQ抗原检测 该二抗原分型方法同HLA-Ⅰ类抗......阅读全文
HLA基因分型方法:PCR-指纹图法
PCR-指纹图法1)提取DNA同前RFLP法 2)PCR扩增同前PCR-RFLP法 3)凝胶电泳取PCR产物10μl,加2μl的6×上样缓冲液,经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳,200V,2~3h。再用溴化乙锭染色30min,照相分析结果。
HLA基因分型方法:PCR-SSO(ASO)探针法
PCR-SSO(ASO)探针法1)常规提取DNA参见RFLP法 2)PCR扩增参见PCR-RFLP法 3)斑点杂交1.将5~20μl扩增产物,加变性液100~200μl室温处理5~15min。2.在尼龙滤膜(预先用2×SSC浸湿2min)上真空点样,每孔以10×SSPE 200μl冲洗,抽干,80℃
HLA的分型方法淋巴细胞毒试验培养试验
1.淋巴细胞毒试验:为HLA抗原分型常用方法。原理:淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后,在补体作用下,细胞膜损伤,细胞溶解破裂被染色,计算显微镜下观察着色细胞的百分率(>20%为阳性反应)。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞;进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。 2.混合淋巴细胞培养
HLA配型的关系
HLA配型 多用血清学方法作HLA-A、HLA-B、HLA-DR配型,然而需要MLC确定的HLA-Ⅱ类分子是否匹配,是关系到移植物能否长期存活更有用的指标。配型的关系是:①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多,移植物存活几率越高;②供、受者HLA-DR位点相配更重要,因为HLA-DR和HL
HLA配型的关系
HLA配型 多用血清学方法作HLA-A、HLA-B、HLA-DR配型,然而需要MLC确定的HLA-Ⅱ类分子是否匹配,是关系到移植物能否长期存活更有用的指标。配型的关系是:①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多,移植物存活几率越高;②供、受者HLA-DR位点相配更重要,因为HLA-DR和HL
DNA分型技术的技术应用
20世纪80年代中期,DNA分型技术开始应用于法医鉴定,一滴血,一抹唾液,一根毛发,只要是人体细胞,都可用于DNA分析、鉴定。1985年首次应用DNA分型技术,对一起英国移民纠纷案成功地进行了亲子鉴定,并于1986年又首次用于一起强奸杀人的刑事案件中,从数千人中查找并认定犯罪嫌疑人。DNA分型技
STR分型检测技术介绍
STR(short tandem repeat,短片段重复序列)广泛存在于人类及哺乳动物的基因组中,具有高度多态性,它们一般由2-6个碱基构成一个核心序列,核心序列串联重复排列,由核心序列重复数目的变化产生长度多态性。对于一个特定的个体,染色体上某个特定位置的重复序列的重复次数是固定的,而对于不同的
华大基因新技术实现一次性达到HLA分型最高分辨率
骨髓和其他器官移植时,供者和受者之间人类白细胞抗原(HLA)相容程度越高,排斥反应的发生率就越低,移植成功率和移植器官长期存活率就越高。反之,就越容易发生排斥反应。7月开始,深圳华大基因应用新一代测序技术,只需通过一次实验就能够读取数千份样本的HLA序列数据,并一次性达到HLA分型的最
DNA分型技术的工作原理
1.将送检的各种生物学检样,如毛发、血痕、精斑、人体组织或白骨等,把其中所含的DNA 提取出来。 2.选用与探针配对的限制性核酸内切酶,在长链DNA 位置上加以切割,将相对分子质量很大的DNA 长链切短成许多长度不同的小片段。 3.在胶板尺寸较长的凝胶电泳仪中,对完全酶解后的DNA 片段进
DNA分型技术的发展历程
我国法医DNA技术的发展道路不是很长,但却取得了突出的成果,在侦查破案中发挥了巨大的作用。 在“七五”后期,从1987年起,我国正式立项对DNA指纹技术进行研究,经过两年的努力,至1989年我国首次把DNA指纹技术应用于办案,开始了我国 法医DNA检验的新时代。随着DNA指纹技术的不断应用,技
基因分型定量检测技术的技术特点
基因芯片技术突出特点是集成化、微型化、自动化,代表了未来分子诊断的发展趋势。其优点有以下几个方面:一是高度的灵敏性和准确性;二是快速简便;三是可同时检测多种疾病。因此已广泛应用于DNA序列测定、基因表达谱分析、基因组研究、基因突变检测及多态性分析、疾病的临床诊断和预测、药物研究与开发以及法医鉴定、工
HP分型检测的分型
幽门螺杆菌(Hp)可以分泌毒素损坏人体细胞,引起炎症、溃疡及肿瘤等。依据其分泌毒素的情况不同,可以将其分为产细胞毒素和非产细胞毒素两大类;能产生毒素的为I型,不能产生毒素的是II型。 不同类型的幽门螺杆菌毒力 Ⅰ型HP由于产生细胞毒素,因此有较强的毒性,与胃十二指肠溃疡、MALT淋巴瘤及胃癌
HLA配型与骨髓移植
一、 骨髓移植概述骨髓移植(bone marrow transplantation ,BMT)的实质是造血干细胞移植,干细胞具有能复制并分化为造血和免疫活性细胞的能力。根据干细胞的来源不同可分为自体、同基因(syngeneic)和异基因(allogeneic)BMT。同基因骨髓移植是指同卵孪生同胞
DNA分型技术的工作原理及技术应用
工作原理 1.将送检的各种生物学检样,如毛发、血痕、精斑、人体组织或白骨等,把其中所含的DNA 提取出来。 2.选用与探针配对的限制性核酸内切酶,在长链DNA 位置上加以切割,将相对分子质量很大的DNA 长链切短成许多长度不同的小片段。 3.在胶板尺寸较长的凝胶电泳仪中,对完全酶解后的D
纯合分型细胞技术的定义
中文名称纯合分型细胞技术英文名称homozygous typing cell technique;HTC technique定 义一种HLA细胞学分型技术。即用已知HLA-Dw型别的(灭活)纯合子细胞(刺激细胞)和受检者细胞(反应细胞)进行单向混合淋巴细胞培养,若不发生或仅发生弱的增殖反应,表明受
纯合分型细胞技术的概念
中文名称纯合分型细胞技术英文名称homozygous typing cell technique;HTC technique定 义一种HLA细胞学分型技术。即用已知HLA-Dw型别的(灭活)纯合子细胞(刺激细胞)和受检者细胞(反应细胞)进行单向混合淋巴细胞培养,若不发生或仅发生弱的增殖反应,表明受
基因分型定量检测技术的原理
基因分型定量检测系统的核心是基因芯片技术,基因芯片技术是一种大规模集成的固相杂交,其技术要点主要包括芯片的制备、样品的制备及标记、分子杂交与检测、生物信息学分析四个方面。基本原理是核酸分子杂交,即应用显微光蚀刻技术把大量的DNA片段以可寻址的方式,高密度地固定到一小块载玻片上,利用核酸碱基之间的配对
基因分型定量检测技术的定义
基因分型定量检测系统是国际上在传染病流行病学应用中最广泛的检测诊断系统。主要通过基因芯片对HPV、HSV等DNA病毒进行检测,分析基因表达的类型,了解基因功能,从而指导疾病的诊断、预后、病理分析、治疗等各种研究。基因芯片主要用于DNA 突变分析、基因谱差异分析、基因诊断分析和大规模基因类型分析。 基
高通量SNP分子分型技术(KASP技术)经验分享
KASP技术经验分享 KASP技术经验分享 KASP技术经验分享 重要的事情说三遍,终于可以开始实验了,但在实验前或实验中乃在实验后,根据小编多年的经验,您可能会遇到以下问题,不用担心,待小编为您一一解答. 1.引物设计提交序列时的注意事项有哪些? 我们要求所提交的
高通量SNP分子分型技术(KASP技术)经验分享
重要的事情说三遍,终于可以开始实验了,但在实验前或实验中乃在实验后,根据小编多年的经验,您可能会遇到以下问题,不用担心,待小编为您一一解答.1.引物设计提交序列时的注意事项有哪些?我们要求所提交的序列长度至少为目标位点上下游各50bp。请注意序列来源,尽量保证序列准确,多态性位点BLAST结果证明为
高通量SNP分子分型技术(KASP技术)经验分享
重要的事情说三遍,终于可以开始实验了,但在实验前或实验中乃在实验后,根据小编多年的经验,您可能会遇到以下问题,不用担心,待小编为您一一解答. 1.引物设计提交序列时的注意事项有哪些? 我们要求所提交的序列长度至少为目标位点上下游各50bp。请注意序列来源,尽量保证序列准确,多态性位点
HLAHLA定型
HLA定型介绍: HLA即人类白细胞抗原(Human leucocyteantigen),是人类的组织相容性系统。这是一组广泛分布于人体有核细胞表面的抗原,受控于人类第6号染色体短臂。HLA基因位点至少有五个,即HLA-A、B、C、D和DR位点。近年又确定了DP和DQ两个位点。HLA有高度多态性,每
fab分型
国内疫情在大家的努力下,已经慢慢好转了,我们能不戴口罩出去赏花的日子估计也不远了。但是在心情愉悦的同时,大家在完成本职工作的同时,还需要记得咱们的考试也不远了,大家一定要加把劲哦。 最近,有同学说白血病这一章很难,很多要记的。的确是很多要记的,但是学了忘,忘了学,不也是学习的一种常态么。当然,
纯合分型细胞技术特点和应用
中文名称纯合分型细胞技术英文名称homozygous typing cell technique;HTC technique定 义一种HLA细胞学分型技术。即用已知HLA-Dw型别的(灭活)纯合子细胞(刺激细胞)和受检者细胞(反应细胞)进行单向混合淋巴细胞培养,若不发生或仅发生弱的增殖反应,表明受
基因分型定量检测技术的操作流程
基因分型定量检测系统的操作流程包括:寡核苷酸探针的合成、固定、杂交和检测等四个步骤。该系统对于疾病的诊断、预后、病理分析、治疗等具有重大意义。
基因分型定量检测技术的应用介绍
【1】传染病的快速诊断及监测:未来的传染病爆发后的检测主要依靠基因芯片的快速初筛及诊断,做到24 h内明确病因,为防疫工作者提供可靠的数据,是指导控制疫情的必要手段。【2】分子流行病学资料分析:对于一些病因机制不清、病原体相关资料缺乏的传染病可以用基因芯片进行研究,为历史上爆发的传染病之间的联系提供
DNA分型技术的法医学应用
刑事侦查 DNA分型技术一种新的侦查手段,在侦查的旧技术时代,不完整或不清晰的指纹无法分辨指纹所有者的确切身份而失去作用,而通过DNA分型技术则可以通过分析指纹所留的油脂,汗液,皮屑等物的DNA以确定指纹所有者的确切身份,从而帮助分析案情。 亲子鉴定 自从杰弗里斯等人于1985年首次对一起
分子分型技术促进个体化诊疗
中国工程院院士程书钧在作报告第八届全国“体外诊断学新技术、新方法、新概念、新进展”学术研讨暨第二届“阳普医疗杯”临床检验诊断学硕博论坛于9月14日在京召开,研讨会由首都医科大学临床检验诊断学系和首都医科大学附属北京天坛医院主办,与会者围绕“分子分型技术以及促进个体化诊断”的主题进行了
关于HLA细胞学分型方法的介绍
HLA-D座位上的抗原称之为LD抗原,采用细胞学分型方法检测。常用检测方法有三种:混合淋巴细胞培养(MLC)技术;纯合细胞分型技术;预处理淋巴细胞分型方法。MLC又可分单向MLC和双向MLC。 (1)单向MLC:刺激细胞不再增殖,未处理的应答细胞能够识别外来刺激细胞的HLA-D抗原,发生增殖。
单精子分型实验——--精子分型数据分析
实验步骤一、须考虑的样本含量0.5 cM 的遗传学距离转变为 0.005 的重组率,表明要发生 5 起重组事件,平均需要观察 1000 例 scoreable 减数分裂。根据泊松分布(假定重组事件间相互独立、互不干扰),那么在上述事例中,有约 56% 的可能性观察到至少 5 起重组事件,有约 88%