WB实验小问答
WB又称免疫印记法.是将生物大分子物质通过不同途径转移到固相载体的过程。其灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。今天给大家分析的是western blot实验中那些常见的问题，这份干货内容，请收好啦！ western blot 常见问题有那些？ 1.为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？ 答：原因有很多，①你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；②你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMST，抑制蛋白酶活性；③你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。 2.我的细胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？ 答：①有沉淀可能是因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长。②也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量sam......阅读全文
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
wb背景黑是因为什么
背景黑可能有以下几个原因:1.没有封闭好,但这个可能很小2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长
WB－抗体能用什么稀释呢
wb抗体用5%的脱脂奶粉（1‰TBST溶液）或者1%的BSA（1‰TBST溶液）配置，可以先让抗体与奶粉或BSA蛋白非特异结合，就不会与PVDF膜上的蛋白结合了。
做WB需要多长时间
做WB如果从组织/细胞开始提取蛋白来计算，起码需要三个工作日。如果已有蛋白质样品，从做胶开始算，则为两个工作日。每张膜的样品数与所使用的跑胶系统有关，最常见的是10-15个上样孔的型号，一个孔放marker，剩下可以测n-1个样品。我用过最多的是25个孔。能够在一张膜上测几种不同蛋白，跟目标蛋白分子
如何正确选择WB检测的抗体？
WB免疫印迹法，也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting)，是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便，主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定，同时也用于未知抗体的
WB电泳槽不能漏水吗
不能漏水。玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损，这样玻璃板受损处则不再平整，液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板，而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的，这种情况则需要一起更换。有时由于清洗不到位，边条压片表面会有污物凸起，也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。电泳槽是凝胶电泳系统的核心部分，其
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
WB上层胶怎么算跑好了
检测器检测。理论上，从普通培养基中收集分泌蛋白，此时对细胞生长条件的影响最小，是最佳的实验条件：但是这存在隐忧。因为含血清的培养基中含有非常丰富的BSA（牛血清白蛋白）之类的蛋白质，除非你进一步分离纯化，否则直接用这种样品去WB会有非常大的麻烦，尤其当你的蛋白在60-46kDa之间的时候：用“任何”
如何正确选择WB检测的抗体？
WB免疫印迹法，也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting)，是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便，主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定，同时也用于未知抗体的检测和单
WB生物样本总蛋白抽提
一、贴壁细胞蛋白提取A1..将水浴锅的温度调至100℃，等水浴锅达到100℃温度后，取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。2.将缓冲液（1Xloading buffer）置于100℃水浴锅中预热10min。（loding buffer： 是5Xloding buffer用纯水稀释到1Xlodingbu
WB－上样前如何制样
WB 是实验室常见实验之一，蛋白定量后，上样之前，还需要哪些步骤制样呢？1. 蛋白含量测定后，Invent 建议大家把各个样品稀释到某一固定浓度（稀释可使用 PBS，水或裂解液），等体积等质量上样，计算上样体积时需包含 loading buffer 的体积。例如：把所有蛋白浓度都稀释到 2ug/ul
wb电泳什么时候换电压
SDS-PAGE跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的.具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严.我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测..
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测到？人血浆中的蛋白是有上万种的，而一般质谱只能检测到五六百种，也就是说只占了其中的百分之几，这是普遍现象，说明咱们的方法是不存在问题的；其次，ELISA/WB与质谱相对来说灵敏度不一样，前者具有放大效应，因为其间会用到相应的抗体，所以
wb条带反白可以洗了重新孵吗
可以洗了重新孵。孵育抗体要低速，洗膜可以相对快一点。将抗体洗掉，再用内参抗体重新杂交，结果显示信号一致，就可以认为上样量一致。条带中间出现白色反白原因是中心部位高浓度HRP将底物消耗过快，中间部位底物消耗完后无法发光。
WB结果总有杂带怎么办
1、更换一抗，换单克隆的。2、不换一抗，降低一抗稀释比，这样目的条带会变弱，不过杂带也会，有时候就可以去掉杂带了。3、多封闭一下。4、洗膜的时候多洗几次。
wb胶堵孔是什么原因
wb胶堵孔原因如下：1、胶的水分过分蒸发。2、浓缩胶凝胶太快。3、错用梳子。4、梳子不干净。
你的－WB－内参选对了么？
你的 WB 内参选对了么？ 关键词： 科研 WB 内参 2019-08-14 17:00 来源：CST 点击次数：19 要想底气十足地秀
WB检测中二抗的选择方法
WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。二抗选择要考虑的问
WB－PVDF膜为什么要用甲醇泡
SDS-PAGE蛋白跑胶过的蛋白质带负电荷，用甲醇处理PVDF膜的目的是活化膜上的正电基团，这样其就更容易与带负电荷的蛋白质结合
wb跑出双条带可以用吗
wb跑出双条带可以用。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
wb下层胶不平整会有什么影响
v是有较大影响的，胶体薄的位置防水性能与防潮性能较差，其他性能也会随之降低。胶体略厚的位置，很难用针探测元器件，零部件在出现故障后，不容易找出来。胶体固化后高低不平，还会导致电器性能不稳定，在运作过程中，零部件即使用螺丝紧固，胶液层厚的位置依然会出现轻度倾斜，长期使用会增加电器出现故障几率。
wb条带反白可以洗了重新孵吗
可以洗了重新孵。孵育抗体要低速，洗膜可以相对快一点。将抗体洗掉，再用内参抗体重新杂交，结果显示信号一致，就可以认为上样量一致。条带中间出现白色反白原因是中心部位高浓度HRP将底物消耗过快，中间部位底物消耗完后无法发光。
WB检测中二抗的选择方法
WB检测之二抗 二抗选择 二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二
wb牛奶封闭太久会怎么样
不可以。一是有的保温瓶的内胆不适合装出了水以外的任何液体,容易起反应二是牛奶入锅装在保温瓶里超出一定的时间就会发酵变质。
磷酸化蛋白做WB小妙招
1、一定要在Lysis Buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂；2、加一抗后最好4度过夜，保证抗体有充分的结合时间，因为磷酸化的蛋白只占总蛋白量的极少部分；3、选择优质的磷酸化抗体，所以要选好的厂商，Novus为全球高端抗体品牌，其磷酸化抗体效果不错；4、抗体的稀释倍数要优化，
怎样做低分子量蛋白的wb
分子量较大的蛋白做wb实验和其他蛋白并没有什么特别的不同主要注意几个地方合适的内参印染，一般用的比较多的几种内参分子量都比较小（30~50KD）合适的凝胶，胶浓度要配制的稀一些，一般选择3%~10%的凝胶增加转膜时间，分子量较大的蛋白要完全转到膜上需要更长的时间
WB结果中有Marker是怎么做到的
可能可以通过下面几个方法实现（仅供参考）：1. 使用预染 Marker，不过分子量不是特别准；2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位，比如都带有 His 融合标签；3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色，然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置。
蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）
蛋白质免疫印迹（Western Blot ） 可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。实验方法原理： Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白
wb封闭液用水溶解对结果影响
WB实验的注意事项一、蛋白样品的制备按组织净重(g)：裂解液体积(ml)=1：10的比例加入相应体积的裂解液(加入终浓度为1mM的PMSF、适当浓度的蛋白酶抑制剂和磷酸化酶抑制剂，以避免内源性酶分解蛋白，影响蛋白质的抽提)进行匀浆。蛋白质的样品制备是westemblotting的第一步，也是关键步骤