大肠杆菌转化子有大有小原因分析
近日，我司实验室经常接到客户这样的疑问，他们在测试大肠杆菌转化子时，大肠杆菌转化子有大有小，结果诡异，想咨询一下具体原因。 这情况我遇到过，尤其菌液PCR时候，有的强有的弱，有的带大小还不一样。我没有具体研究过啥愿意，但把大小一样的那个送去测序，一般都是正确的。 关于你的这个情况，我分析【我自己的我也分析过】 1、可能酶产物碎了一些，这样连进去就有大有小。如果你引物用的是在载体上的，那很可能扩出大小不同的。如果你引物就是在基因上的，这个好解决，你把退火温度逐渐提高，看看是不是那个不同片段就没了。 2、有的时候发生了片段自连【这个看起来好像很可笑，但其实我发现只要末端有一个碱基配对，时间长的话，片段是可以连接到一起的，这个就跟TA连接实际一样】。 &nb......阅读全文
大肠杆菌转化子有大有小原因分析
近日，我司实验室经常接到客户这样的疑问，他们在测试大肠杆菌转化子时，大肠杆菌转化子有大有小，结果诡异，想咨询一下具体原因。 这情况我遇到过，尤其菌液PCR时候，有的强有的弱，有的带大小还不一样。我没有具体研究过啥愿意，但把大小一样的那个送去测序，一般都是正确的。 关于你的这个情况，
弱化子的定义
弱化子(attenuator)是指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列,该区域转录产物能形成不同的二级结构,利用原核微生物转录与翻译的偶联机制对转录进行调节。
大肠杆菌转化实验——CaCl2转化法
实验方法原理细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA，然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒CaCl2氨苄青霉素LB
弱化子的功能介绍
弱化子(attenuator)是指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列，该区域转录产物能形成不同的二级结构，利用原核微生物转录与翻译的偶联机制对转录进行调节。
弱化子的功能特点
弱化子(attenuator)是指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列，该区域转录产物能形成不同的二级结构，利用原核微生物转录与翻译的偶联机制对转录进行调节。
分子遗传学词汇弱化子
中文名称：弱化子外文名称：attenuator定义：弱化子(attenuator)是指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列，该区域转录产物能形成不同的二级结构，利用原核微生物转录与翻译的偶联机制对转录进行调节。
基因的转移与重组体的筛选和鉴定1
第一节 转化基因片段在体外只是一段核酸分子，是化学物质，无法表现出遗传物质的生命活性。只有当其存在于活细胞后，生命的特征才能充分展示出来。在分子克隆实践中，在体外操作的核酸分子只有进入细胞以后才能达到克隆的目的。一、重组DNA分子转入原核生物细胞1. 重组质粒DNA分子转化大肠杆菌转化（transf
分子遗传学词汇转录弱化子
中文名称：转录弱化子英文名称：transcriptional attenuator定 义：DNA中与转录提前终止有关的一段核苷酸序列。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
宫颈未分化子宫肉瘤病例报告
宫颈肉瘤发病率低，预后不良，文献少有报道，而原发于宫颈的未分化子宫肉瘤更是罕见报道。该病临床表现主要是异常阴道流血、宫颈肿物、盆腹腔包块及其引起的压迫症状。病理诊断是确诊的金标准。手术治疗是主要的治疗方式，术后可辅助放化疗。青岛市市立医院近期诊治1例宫颈原发未分化子宫肉瘤合并骶前肿块患者，本文对其临
关于弱化子的基本信息介绍
弱化子(attenuator)是指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列，该区域转录产物能形成不同的二级结构，利用原核微生物转录与翻译的偶联机制对转录进行调节。 是在研究大肠杆菌的色氨酸操纵子表达弱化现象中发现的。在trp mRNA 5，端trp正基因的起始密码前有一个长1
企业为何“不想转”“不敢转”“不会转”？
企业“不想转”“不敢转”“不会转”，资源要素支撑相对不足，高端化、智能化、绿色化、融合化水平参差不齐，转型升级环境尚待优化……7月4日，在“粤商·省长面对面协商座谈会”上，关于传统产业转型升级的讨论热火朝天。 习近平总书记在二十届中央财经委员会第一次会议上强调，“坚持推动传统产业转型升级，不能
质粒的转化及转化子的鉴定实验
实验方法原理 热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表
恒温循环器助力DNA转化
生物学实验室日夜奋斗的小伙伴们，IKA为您们带来好消息啦！热激法转化大肠杆菌，大家一定不陌生：大肠杆菌在0℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小
细菌人工染色体的应用
实验方法原理 细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome, RAC ) 是以大肠杆菌致育因子 (fertility, F)为基础的合成载体。实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌培养物电转感受态大肠杆菌细胞试剂、试剂盒 LB 冷冻缓冲液仪器、耗材 脉冲场凝胶电泳仪LB
细菌人工染色体的应用
实验方法原理 细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome, RAC ) 是以大肠杆菌致育因子 (fertility, F)为基础的合成载体。 实验材料
细菌人工染色体的应用
细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome, RAC ) 是以大肠杆菌致育因子 (fertility, F)为基础的合成载体。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome
转化子DNA的快速鉴定—快速细胞破碎法
目的：1、掌握用细胞破碎液裂解菌体细胞，并通过电泳的方法细胞中不同分子量质粒的方法；2、从实验六的氨苄青霉素抗性转化子中筛选仅含一个拷贝目的基因的重组载体。原理：挑选8～10个白菌落接于平板过夜培养。利用破碎细胞缓冲液中的十二烷基硫酸纳（SDS）在37℃溶解膜蛋白，使细胞破裂，然后高速离心，将含有质
毕赤酵母遗传霉素抗性转化子的筛选
实验概要本实验介绍了毕赤酵母遗传霉素抗性转化子的3种筛选方法。实验步骤1. (去壁细胞)方法：从含HIS 转化子的平板开始 1) 用灭菌刮片将含有HIS 转化子的顶层琼脂最上层刮下，放入无菌的50ml 离心管中。 2) 加入10-20ml灭菌水，量应为琼脂的两倍，剧烈振荡1-2min。
大肠杆菌感受态细胞的制备与重组质粒转化
一、目的1.了解感受态细胞生理特性及制备条件，掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。2.掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法，了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理。二、原理（一）大肠杆菌感受态细胞制备的原理所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的
克隆化酵母DNA的操作实验——质粒缺口修复
实验材料酵母实验步骤1. 将目的基因亚克隆到YRp质粒，通过基因内的两个限制性位点在基因中创造一个缺口区，在缺口两侧留下≥100~250 bp 的同源区，凝胶电泳纯化质粒骨架大片段。 2. 用1~10 μg 缺口质粒DNA转化待拯救的含突变等位基因的酵母菌株，通过YRp质粒上的选择基因进行选择，
农杆菌感受态细胞的制备和转化子的验证
一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L Mannitol,2 g
湿转和干转，哪个方法更好？
对于一个完美的westernblot实验，蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离，蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上，然后通过特异性的抗体进行免疫检测。对于转印来说，使用湿转的方法是比较好的，因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中，在半干转的条件下，转印是在两个电极板之间发生，这种类型
转管培养法与转瓶培养
转管培养法（roller tube culture）是Gey 提出的，实验室常用，为了扩大细胞产量，将试管改用转瓶，故称转瓶培养，其培养方法是一样的，试管或转瓶固定在支加上，倾斜度为5°～10°左右，或将转瓶放在一排排转轴之间，使转瓶随着转轴以每小时6～12 转缓慢转动。细胞贴附于玻璃壁
湿转和干转，哪个方法更好
对于一个完美的westernblot实验，蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离，蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上，然后通过特异性的抗体进行免疫检测。 对于转印来说，使用湿转的方法是比较好的，因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中，在半干转的条件下，转印是在两个电极板之间发
重组DNA的转化实验原理和操作步骤
实验目的制备出感受态细胞，把体外重组的DNA引入受体细胞，使受体菌具有新遗传性，并从中选择出转化子。实验原理感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。pUC18的LacZ基因区域当有DNA片段插入时，LacZ基因失活，转化进入大肠杆菌并在含有IPTG和
Western－转膜时用干转还是湿转效果比较好？
关键看效果怎么细分，干转，速度快，效率稍低，湿转，速度比较慢，转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主，干转就挺好的，效率非常高，几分钟就做完了。分子量特别大，又没有其他人的方案做参考，可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话，真是等到花儿也谢了。至于说效果，不是
做western转膜，用湿转电泳，还是半干转电泳好
半干转要用专门的半干转膜仪，而湿转用电泳仪配附件即可；半干转所需时间较短，但控制不好，中间发热比较大容易把膜和胶烘坏；而湿转耗时较长，尤其对大分子量的蛋白转膜效果较好。相对来讲，还是湿法转膜的实验室多一些。
Western－转膜时用干转还是湿转效果比较好
关键看效果怎么细分，干转，速度快，效率稍低，湿转，速度比较慢，转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主，干转就挺好的，效率非常高，几分钟就做完了。分子量特别大，又没有其他人的方案做参考，可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话，真是等到花儿也谢了。至于说效果，不是
大肠杆菌
大肠细菌(E. coli)为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称病致病大肠杆菌。一、生物学性状(一)形态与染色大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。有
上海微系统所在半金属极化子研究中取得进展
原文地址：http://www.cas.cn/syky/202103/t20210318_4781439.shtml 上世纪60年代，有学者从理论上预测了固体材料中一种新的复合粒子，由空穴与等离激元的强耦合而产生的等离激元极化子，为凝聚态领域的复杂多体理论拓展了一个重要的研究分支。但是，普通金属中