植物过氧化物酶同工酶测定
凡能催化同一种化学反应,但其分子结构和带电性质不同的一组酶称同工酶(isoenzyme)。同工酶谱的差异是基因表达的差异造成的,所以在研究植物基因调控与生长发育及其与环境条件的关系以及许多生理生化和遗传问题时,常常要分析同工酶谱的差异。因此,同工酶研究在理论和实践中都有非常重要的意义。一、原理聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而成,具有三维网状结构,其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼有电荷效应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数量、分子大小和形状的差异,因此在电泳时产生不同的泳动速率而相互分离。利用特异性的颜色反应使待测酶着色,这样就可在凝胶中展现出酶谱。过氧化物酶是植物体内常见的氧化酶。植物体内许多生理代谢过程常与它的活性及其同工酶的种类有关。利用过氧化物酶能催化H2O2把联苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物的原理,将经过电泳后的凝胶置于有H2O2及联苯胺的溶液染色,出现蓝色或棕褐色部位......阅读全文
植物过氧化物酶同工酶测定
凡能催化同一种化学反应,但其分子结构和带电性质不同的一组酶称同工酶(isoenzyme)。同工酶谱的差异是基因表达的差异造成的,所以在研究植物基因调控与生长发育及其与环境条件的关系以及许多生理生化和遗传问题时,常常要分析同工酶谱的差异。因此,同工酶研究在理论和实践中都有非常重要的意义。一、原理聚丙烯
植物过氧化物酶测定
实验概要本文介绍了植物过氧化物酶同工酶测定的基本原理及操作步骤等。实验原理聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而成,具有三维网状结构,其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼有电荷效应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数量、分子大小和形状的差异,因此在电泳时产
植物同工酶技术
一、实验原理 同工酶(isozymes)是指作用于底物相似或完全相同的酶的不同分子形式,即催化同一种反应而结构不同的一族酶。它们是受遗传体系决定的酶的不同分子形式。利用凝胶电泳技术可以将它们分开,用专一的作用底物和特殊染料,把需要分析的酶染色,在胶柱上呈现同工酶谱。 二、
植物同工酶实验
一、实验原理 同工酶(isozymes)是指作用于底物相似或完全相同的酶的不同分子 形式,即催化同一种反应而结构不同的一族酶。它们是受遗传体系决定的酶的不同分子 形式。利用凝胶电泳 技术可以将它们分开,用专一的作用底物和特殊染料,把需要分析的酶染色,在胶柱上呈现同工酶谱。
药用植物过氧化物酶同工酶分析及活性比较实验
聚丙烯酰胺凝胶电泳法实验方法原理不同种乃至不同变种的生物不但外部形态有变异,由于结构基因的差别,其表达产物酶和蛋白质也必然存在着一定的差别。所以同工酶分析作为一种遗传分析手段已广泛应用于品种资源调查、杂交子代测定、种子纯度鉴定等农林业各个领域,在指导生产方面发挥了很大的作用。此外,同工酶分析对研究不
药用植物过氧化物酶同工酶分析及活性比较实验
聚丙烯酰胺凝胶电泳法 实验方法原理 不同种乃至不同变种的生物不但外部形态有变异,由于结构基因的差别,其表达产物酶和蛋白质也必然存在着一定的差别。所以同工酶分析
药用植物过氧化物酶同工酶分析及活性比较实验
实验方法原理 不同种乃至不同变种的生物不但外部形态有变异,由于结构基因的差别,其表达产物酶和蛋白质也必然存在着一定的差别。所以同工酶分析作为一种遗传分析手段已广泛应用于品种资源调查、杂交子代测定、种子纯度鉴定等农林业各个领域,在指导生产方面发挥了很大的作用。此外,同工酶分析对研究不同产地、不同种属生
植物体内过氧化物酶活性的测定实验
实验方法原理在过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶竭色4-邻甲氧基苯酚,在470nm波长处测定生成物的吸光度(A)值,即可求出该酶活性。实验材料植物叶片试剂、试剂盒磷酸缓冲液愈创木酚仪器、耗材分光光度计离心机离心管研钵移液管移液管架试管试管架洗耳球实验步骤一、材料、仪器设备及试剂1.
植物体内过氧化物酶活性的测定实验
实验方法原理在过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶竭色4-邻甲氧基苯酚,在470nm波长处测定生成物的吸光度(A)值,即可求出该酶活性。实验材料植物叶片 试剂、试剂盒磷酸缓
植物体内过氧化物酶活性的测定实验
实验方法原理 在过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶竭色4-邻甲氧基苯酚,在470nm波长处测定生成物的吸光度(A)值,即可求出该酶活性。实验材料 植物叶片试剂、试剂盒 磷酸缓冲液愈创木酚仪器、耗材 分光光度计离心机离心管研钵移液管移液管架试管试管架洗耳球实验步骤 一、材料、仪器设备及
乳酸脱氢酶同工酶测定
乳酸脱氢酶同工酶的测定方法有电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物同工酶
同工酶是指能催化同一种化学反应,但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。研究表明,植物在发育过程中,所含同工酶的种类和比例都不相同,它们与植物的遗传、生长发育、代谢调节及抗性等都有一定关系,因此作为基因表达的产物,测定同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具,在植物的种群、发育及杂交遗传的研究
植物酯酶同工酶基因的染色体定位
一、原理酶和蛋白质是基因表达的产物,基因位于染色体上。当某一对同源染色体缺失时,位于这对染色体上的基因和它们所编码的酶或蛋白质也就随之丢失。以正常小麦及其缺体系为材料,通过蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和同工酶分析,即可确定编码这些酶或蛋白质的基因在基因组中的定位(位于哪对染色体上)。酯酶是催化酯类化合物
过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳2
3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理系统的不连续性表现在以下几个方面:(1)凝胶板由上、下两层胶组成,两层凝胶的孔径不同。上层为大孔径的浓缩胶,下层为小孔径的分离胶。 浓缩胶:又称堆积胶。凝胶浓度较小,孔径相对较大。把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用二被浓缩在一个狭窄的区带,使样品
不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶的比较分析
一、原理 聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP)和加速剂四甲基乙二胺(简称TEMED)的作用下,聚合而成的具有三维网状结构的凝胶,通过改变聚丙烯酰胺单体的浓度和交联度可以控制凝胶孔径的大小。通过改变催化剂的用量,可以控制凝胶聚合的速度。
同工酶测定的方法与参考值
(1)方法:LD同工酶分离和定量的方法主要为电泳法。心肌损伤时主要是LD1同工酶增高,测定LD1同工酶对AMI诊断有意义。如采用LD1/总LD比值则可进一步提高诊断的特异性。但由于方法繁琐,目前LD同工酶测定在AMI诊断上应用少。(2)参考值:琼脂糖凝胶电泳法LD1:(28.4±5.3)%LD2:(
同工酶和亚型测定的临床意义
概述 同工酶是指其分子组成及理化性质不同但具有相同催化功能的一组酶。同工酶是一个酶族,可以根据同工酶的差异用各种物理、化学方法将其分离测定。同工酶的结构差异可引起酶蛋白抗原性的变化,现在利用免疫原理来测定同工酶的方法有了很大发展。2.分布特点(1)明显的组织器官特异性;(2)细胞内定位不同;(3)有
植物过氧化物酶的简易鉴定实验
实验方法原理过氧化物酶是卟啉环中含有铁的金属蛋白质。过氧化物酶与过氧化氢形成一种化合物,在这种化合物中的过氧化氢被活化,从而能氧化酚类化合物,其作用如同氢的受体一样。实验材料马铃薯块茎试剂、试剂盒邻苯二酚酒精溶液H2O2仪器、耗材试管实验步骤马铃薯块茎,切碎,加到两个试管中,其中一个先煮沸数分钟,然
植物过氧化物酶的简易鉴定实验
实验方法原理 过氧化物酶是卟啉环中含有铁的金属蛋白质。过氧化物酶与过氧化氢形成一种化合物,在这种化合物中的过氧化氢被活化,从而能氧化酚类化合物,其作用如同氢的受体一样。实验材料 马铃薯块茎试剂、试剂盒 邻苯二酚酒精溶液H2O2仪器、耗材 试管实验步骤 马铃薯块茎,切碎,加到两个试管中,其中一个先煮沸
常用血清酶和同工酶测定有哪些?
1.连续监测法测定血清肌酸激酶(CK)2.连续监测法测定乳酸脱氢酶(LD)总活性3.连续监测法测定血清(天)门冬氨酸氨基转移酶(AST)4.连续监测法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)5.连续监测法测定血清碱性磷酸酶(ALP)6.连续监测法测定血清中谷氨酰基转移酶(GGT)7.淀粉酶(AMY)测定8
血清转氨酶及其同工酶测定的临床意义
ALT和AST均属于肝细胞内非特异性功能酶,生理情况下血清转氨酶活性很低。(1)急性病毒性肝炎ALT虽不特异,但是最敏感的指标。在急性肝炎过程中,血清ALT活性高低多与临床病情轻重相平行。肝炎患者血清ALT变化规律一般为三种:1)急性病毒性肝炎早期ALT升高,出现黄疸后ALT急剧升高,高峰可达正常人
精浆乳酸脱氢酶同工酶X测定
1.测定方法及评价:LD-X的电泳位置在LD3-LD4之间。其活性测定多采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联染色及光度计扫描法,求得其相对百分率。国内临床上较为常用。 2.参考值:LD-X相对活性≥42.6%。 3.临床意义:精子发生缺陷时无LD-X形成。少精或无精者可致LD-X活性减低,精液常规检
血清转氨酶及其同工酶测定的方法学评价
血清转氨酶及其同工酶测定氨基转移酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转移的酶。用于检测肝细胞损伤程度的主要是丙氨酸氨基转移酶(ALT,EC2.6.1.2)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。两种酶的检测采用酶动力学方法,诊断酶学一章已作介绍。ALT:按含量多少顺序为肝脏、肾脏、心脏、骨骼肌等。肝细胞的
什么是同工酶?同工酶的作用
同工酶(isozyme,isoenzyme)广义是指生物体内催化相同反应而分子结构不同的酶。按照国际生化联合会(IUB)所属生化命名委员会的建议,则只把其中因编码基因不同而产生的多种分子结构的酶称为同工酶。最典型的同工酶是乳酸脱氢酶(LDH)同工酶。 同工酶的基因先转录成同工酶的信使核糖核酸,后者再
过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳3
四、实验步骤:① 安装制胶模具(教师演示,学生安装)注意事项:a、在整个过程中要轻拿轻放,以免将玻璃板弄碎。②制作分离胶(浓度10%)分离胶配方(浓度10%):pH8.9 Tris-HCl溶液:0.8ml分离胶PAG溶液:1.2ml蒸馏水:1.6ml10%TEMED:40μl%AP: 40μl将上述
过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳1
一、目的 1、了解聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 2、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程 3、了解过氧化物酶同工酶电泳过程 二、实验原理: 1、电泳原理及影响电泳的主要因素 带电离子在电场中的泳动速度(1)和迁移率(泳动度)(2)V=E·q·a(1)6πrηu=q·a(2)6πrη由(2)式可以看出,凡能影响溶液
植物中的过氧化物酶体介绍
在植物中过氧化物酶体主要有:①参与光呼吸作用,将光合作用的副产物乙醇酸氧化为乙醛酸和过氧化氢,②在萌发的种子中,进行脂肪的β-氧化,产生乙酰辅酶A,经乙醛酸循环,由异柠檬酸裂解为乙醛酸和琥珀酸,后者离开过氧化物酶体进一步转变成葡萄糖,这一过程称为乙醛酸循环,因此植物细胞的过氧化物酶体又称乙醛酸循环体
过氧化物酶的测定实验
供体:ABTS 供体:愈创木酚 供体:联二茴香胺 实验方法原理 实验材料
过氧化物酶的测定实验
实验方法原理 实验材料 酶样品试剂、试剂盒 磷酸钾ABTSH2O2 溶液仪器、耗材 分光光度计实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」25℃ 时,在 414 nm 处,ε414=24.6×103 l/(mmol· mm)。必须注意,1 mol H2O2 形成 2 mol 氧化的 ABTS(Szuto
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物酶同工酶
一、目的同工酶是指能催化同一种化学反应,但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。研究表明,植物在发育过程中,所含同工酶的种类和比例都不相同,它们与植物的遗传、生长发育、代谢调节及抗性等都有一定关系,因此作为基因表达的产物,测定同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具,在植物的种群、发育及杂交遗