斑马鱼基因敲除是怎么做的
一、基因敲除的设计方案 1.1 基因的基本信息 确认斑马鱼基因的基本信息，包括名称ID号等，一般会在NCBI等查询。 1.2 分析基因结构、氨基酸序列等做生物学信息的分析 1.3分析蛋白质的保守结构功能域 通过综合考虑，设计最佳的KO靶点。 1.4 分析并设计CRISPR，分析其效率及脱靶的情况 一般使用CCTOP，少数物种如没有可找其它专业网站。 二、CRISPR活性验证 2.1 分析并确认基因组序列 设计Genotyping引物，确认实际基因组序列与理论匹配情况，如CRISPR靶点验证与理论序列存在出入，需回到1.4重做。 该步骤还需要确认引物扩增条件，以备后用，如不能正常扩增需要重新设计，并且不能进行下一步操作。 2.2 合成sgRNA 使用Thermo转录试剂盒转录，完成后需测定浓度（不得低于400 ng/μl） 和OD......阅读全文
分支杆菌WhiB6－通过调控ESX1和Dos调节子肉芽肿形成和毒力
分支杆菌WhiB6可以通过调控ESX-1和Dos 调节子进而调节肉芽肿的形成和毒力 研究背景 结核分枝杆菌是最成功的胞内病原体之一。其在感染宿主时能够被巨噬细胞所吞噬，进而形成吞噬体。吞噬体可以进一步的破坏入侵的病原体。但是结核分枝杆菌可以通过一系列的过程来避免吞噬体的消灭，进而来破
分支杆菌WhiB6调控ESX1和Dos调节子调节肉芽肿－形成和毒力
分支杆菌WhiB6可以通过调控ESX-1和Dos 调节子进而调节肉芽肿的形成和毒力 研究背景 结核分枝杆菌是最成功的胞内病原体之一。其在感染宿主时能够被巨噬细胞所吞噬，进而形成吞噬体。吞噬体可以进一步的破坏入侵的病原体。但是结核分枝杆菌可以通过一系列的过程来避免吞噬体的消灭，进而来破
Nature子刊发表新标记系统－追踪造血干细胞的“彩虹”
波士顿儿童医院的研究人员开发了一种能够追踪造血干细胞的彩色标记系统。他们用这一工具追踪了斑马鱼的造血干细胞，及其生成的克隆和特化血细胞（红细胞、白细胞和血小板）。这项研究最近发表在Nature Cell Biology杂志上，可以帮助人们更好的理解血液疾病和血癌。 人类生来就带有一定数量的造血
内源DHA合成新发现：鱼类健康的秘密
在水产养殖领域，由于脂肪肝引发的肝胆综合征已成为发病率高且危害严重的一类脂质代谢障碍性疾病。在哺乳动物和养殖鱼类中的研究均表明，摄食omega-3多不饱和脂肪酸，特别是二十二碳六烯酸，对于预防和减轻脂肪肝具有重要作用，但是内源合成的DHA对肝脏脂质稳态的作用和机制尚不明晰。近日，中国科学院水生生物研
sbt做hla基因分型分析怎么做
sbt做hla基因分型分析怎么做HLA系统研究从70年代到80年代末期主要是血清学研究；90年代以来，HLA进入了分子水平研究阶段。HLA分型技术同样走过了这一历程。建立于60年代的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性。1991年第11届国际HLA专题讨论上提出了HLA的DNA分型方
新发现：脑内有游离的淋巴细胞
清除有害物质、扫荡毒害细胞的废物，大脑有自己的内在程序，这些程序也能为中风和痴呆等疾病提供保护措施。 澳大利亚昆士兰大学（UQ）的科学家们通过研究热带淡水斑马鱼（拥有着许多与人相同的细胞和器官），发现了一种新型的大脑“清道夫”淋巴细胞——脑膜壁淋巴管内皮细胞（meningeal mural l
我国科学家发现遗传性眼病“夜盲症”新致病基因
浙江温州医科大学科研团队通过对248例散发或隐性遗传视网膜色素变性患者的DNA样本进行基因测序，首次发现了引起常染色体隐性视网膜色素变性的高发致病基因——SLC7A14。日前，该研究成果发表在《自然》子刊《自然-通讯》上。 视网膜色素变性俗称“夜盲症”、“鸡盲眼”，是眼科中最常见的遗传性眼
科学家发现胚胎干细胞向血管细胞分化的开关分子
近日，来自美国的科学家发现了驱动胚胎干细胞向内皮细胞成熟分化的一条分子机制，内皮细胞是可以形成血管的一类细胞，通过这一机制了解该分化过程对于帮助科学家们有效地将干细胞诱导为内皮细胞用于组织修复具有重要意义。相关研究成果发表在国际学术期刊stem cell reports上。 这项研究发现了两个
激光跟踪仪的定位测量更精准！是怎么做到的？
2020年11月23日消息，与2010年建立的主要调查网络相同，为土木工程工作和建筑物的定位提供了全球坐标系一样，ITER计量团队现在已经建立了广泛的参考“目标”或固定点矩阵，在Tokamak综合楼内部，用于测量和校准Tokamak组件和系统。 这些点是由欧洲承包商在建筑物内安装的称为基准巢的
elife：心脏再生领域新突破
冠心病成为致命性疾病的原因之一是心脏组织中会积聚液体并形成疤痕，从而阻止心脏的正常收缩以及心脏向身体提供新鲜血液的能力。如果疤痕产生的过多，则会导致心力衰竭的发生。 对此，来自CHLA Saban研究所的研究员Michael Harrison博士希望通过对斑马鱼的研究来找到心脏再生的秘密。
牛津大学发现墨西哥鱼心脏自愈基因－人体内同样存在
据英国《每日邮报》报道，牛津大学科学家近日在墨西哥脂鲤体内发现一种可以修复自身心脏的基因Irrc10，在人体中也存在同样的基因，因此有望为人类的心脏病治疗提供希望。 资助这项研究的英国心脏基金会表示，英国有50多万人患有心力衰竭，通常是心脏病发作造成的。患有心力衰竭的人无法使受损的心脏再生，心
CRISPRCas9基因治疗法基础知识ABC
CRISPR-Cas9，一种基因治疗法，这种方法能够通过DNA剪切技术治疗多种疾病。 研制经过 盖茨投资了生物医药公司Editas Medicine，这家公司开发出了一种名为CRISPR-Cas9的基因治疗法，这种方法能够通过DNA剪切技术治疗多种疾病，不过尚未进入人体试验阶段。[1] 2
上海生科院实现清醒小动物大脑多巴胺调质释放的实时检测
11月18日的《神经科学杂志》报道了中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所的最新科研成果。该成果揭示在小巧透明的幼年斑马鱼上，奖赏性嗅觉刺激诱发脑中多巴胺的释放，所释放的多巴胺可以用电化学方法实时记录并能追溯其上游的神经环路。这是首次在清醒的小动物脑中记录到感觉刺激引起的多巴胺释放。对其上游
倚天屠龙，谁与争锋——且看基因敲除与RNA干扰的关系
研究历史 20世纪80年代初，胚胎干细胞分离和体外培养的成功为基因敲除奠定了技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组(homology recombination, HR)的存在为基因敲除奠定了理论基础[2]。为了编辑基因，传统的靶向特定等位基因的同源重组技术被使用，但是，这
基因敲除小鼠在药物依赖性研究中的应用（一）
基因敲除(gene knockout ) 是 80年代初出现的一项新的基因工程技术, 是制备转基因动物的重要技术之一。利用该技术可以培育先天缺陷某一特定基因的动物, 以此研究该特定基因的生理功能或在疾病发生发展中的意义。近年来基因敲除小鼠在药物依赖性研究中也得到广泛的应用。在传统的药物依赖性
基因敲除小鼠在药物依赖性研究中的应用（二）
3. 2 D2 受体在阿片类诱导的运动增强效应实验中, D2 受体KO 小鼠对内源性和外源性阿片类物质诱导的运动增强效应与 WT 小鼠无显著性差异, 表明 D2 受体缺失未影响阿片诱导的运动增强效应。在药物身体依赖性实验中,D2 受体 KO 小鼠和 WT 小鼠的戒断症状没有明显差别,说明 D2
条件性基因敲除的基本原理Cre／loxP重组系统
条件性基因敲除的基本原理 Cre ／ loxP 重组系统条件性基因 敲除主要是通过Cre／10xP或者Ftp／FRT重组系统来实现的。这两个系统都是位点特异性重组酶系统，已发展成为在体内、外进行遗传操作的有力工具。这两个系统的应用，可以使靶基因的表达或缺失发生在试验动物发育的某一阶段或某一特定的组织
CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定方法
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了PCR胶浓度、电泳电压及时间的选择，今天我们就开始学习CRISPR/Cas9完
高通量研究脊椎动物多维表型的方法（一）
Nature Communications 4, February 12, 2013, Article number:1467, doi:10.1038/ncomms2475 Carlos Pardo-Martin, Amin Allalou, Jaime Medina, Peter M. Eimo
斑马鱼二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)ELISA试剂盒操作说明
斑马鱼二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)ELISA试剂盒本试剂盒仅供研究使用。使用目的：本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。斑马鱼二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)ELISA试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，
孟安明院士信号机制最新研究成果
枯氏囊泡(KV)是硬骨鱼类中所谓的左右组织者。KV是由背侧先驱细胞(DFCs)形成的，并且能够生成不对称的信号，用于打破胚胎的对称性。但是，DFCs或KV细胞是如何被阻止与相邻细胞混合在一起的，目前还不明确。 6月10日，《Development》在线刊登了清华大学孟安明院士带领的一项研究成果
科学家利用鳉鱼研究人类衰老
生理学家Alessandro Cellerino是一名水族馆狂热者，但一开始鱼类并不在他的研究计划中。2000年的一个下午，他和饲养者Stefano Valdesalici一起在意大利北部卡诺萨的一个装满水族箱的室内闲聊，Cellerino一时兴起便问后者哪种鱼的寿命最短。Valdesalic
两篇Nature文章：干细胞命运调控者
一些不同的脊椎动物模型研究表明，造血干细胞至少部分起源于第一功能性胚内血管：背主动脉（DA）。然而，对于在背主动脉中促进造血干细胞生成的细胞类型和信号分子却并不是很清楚。发表在《自然》（Nature）杂志上的两篇新研究论文表明，包括椎骨和骨骼肌在内的许多组织的前体——一种叫做体节（somite）
中国科学家研究显示：父亲的基因更强大
孕妇肚子里胚胎的早期发育主要由卵子决定的认识或要终结了。过去，人们发现卵子的体积很大、富含蛋白质和RNA，而精子的体积很小、几乎仅能携带一半的 DNA，因此推断，决定早期发育的信息几乎都在卵子中，而由中国科学院北京基因组研究所研究员刘江领导团队完成的研究称，DNA甲基化的图谱是来源于精子的，
有机污染物或将突破血脑屏障进入大脑
血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）是存在于血浆与脑细胞之间由单层脑毛细血管内皮细胞及细胞间的紧密连接形成的屏障，对维持中枢神经系统正常生理状态具有重要的生物学意义。研究人员认为，很多持久性有机污染物具有较高的脂溶性，因此推测其可以通过血脑屏障对中枢神经系统造成损伤（ce
Cell子刊：心脏发育的开关
在胚胎发育过程中，转录因子Ajuba负责调控心脏中的干细胞活性。如今，患有先天性心脏病的新生婴儿并不少见。这是因为胚胎发育中心脏发育是一个既复杂又容易出错的过程。德国Max Plank心肺研究所的科学家发现了在心脏干细胞功能调控中起核心作用的一个关键分子。有了这项研究成果的帮助，将来不仅有望
Cas9也可以用来找药靶？（一）
去年10月份季博分享了一篇文章“Cas9与耐药基因研究是啥关系”，介绍的是张锋的两篇文章，2014年的Science，2015年的Nature。讲座中，季博给大家简单分析了这两篇文章，两篇文章用的思路都一样，连细胞和药物都一样。按道理，14年Science收了，15年同档次的Nature是不会再收了
饲料中加沙棘可抗鱼类肠肝炎症
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2022/4/477882.shtm 记者从中国科学院水生生物研究所了解到，该所研究人员基于草鱼 SBMIE 肠肝转录组数据，通过TCMID（Traditional Chinese Medicines Integra
高内涵细胞成像分析技术的优势与应用
高内涵技术优势高内涵细胞成像分析系统由三个部分组成：全自动高速显微成像，全自动图像分析和数据管理。全自动高速显微成像在短时间内生成大量的图像，全自动图像分析从这些图像中提取大量的数据，数据管理软件负责建档存储、注释比较、检索分享这些图像和数据。高内涵，意味着丰富的信息。这些信息包括：单个细胞图像和各
研究揭示洞穴鱼玫瑰高原鳅色素退化分子机制
洞穴鱼类因长期生活在黑暗的地下水域，逐渐演化出眼睛、色素退化、嗅觉增强等特征，是研究适应性演化和趋同演化的理想模型。此前，有研究揭示多个色素相关基因突变与洞穴鱼类色素退化相关，但学界对其分子机制和演化驱动力尚不明晰。近日，中国科学院动物研究所研究员郭宝成和副研究员赵亚辉、孟凡伟团队以中国特有洞穴鱼类