定量PCR常见问题及解决方法
Q1．CT值出现过晚1.扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。2.PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。3.PCR产物太长。一般采用80-150bp的产物长度。Q2．无CT值（信号）出现1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。2.检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。3.引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。4.引物或探针的设计，如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。5.模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。6.模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。Q3．标准曲线的线性关系不佳1.加样存在误差，使得标准品不呈梯度。2.标准品出现降......阅读全文
定量PCR常见问题及解决方法
Q1．CT值出现过晚1.扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。2.PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。3.PCR产物太长。一般采用80-150bp的产物长度。Q2．无CT值（信号）出现1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以
PCR实验操作常见问题及解决方法
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反
PCR实验操作常见问题及解决方法
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与
QPCR常见问题及解决方法
Q-PCR常见问题及解决方法Q1．CT值出现过晚A2.1.扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。2.PCR各种反应成分的降解或加样
定量PCR常见问题(一)
1. 定量PCR仪的开关机顺序是怎样的？ 按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件，进行实验。关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭信号收集
定量PCR常见问题(二)
8. 什么是背景校正？多长时间执行一次背景校正？ 背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60 °C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文
PCR实验操作常见问题及解决方法（一）
cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反应起始
PCR实验操作常见问题及解决方法（二）
二、Generacer如何针对Generacer试剂盒设计基因特异性引物（GSP）？使用5’或3’RACE试剂都需要至少一条基因特异性引物，您在设计引物时需要注意以下几点要求：*50-70％的GC含量，以提高引物熔点（Tm）*23-28个碱基长度，以提高引物特异性*降低3’端GC含量，将引物非特异性
ABI实时定量PCR常见问题
1. 定量PCR仪的开关机顺序是怎样的？ 按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件，进行实验。关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭信号收集
定量PCR技术常见问题交流
1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右，一般有什么方法解决没有 ct值比较靠后，对实验有一定的影响，因为经过那么多次的循环，酶的活性有可能有所下降，这时候扩增效率会有所改变（而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值）。因此最好能够把ct值往前移。 解决办法可以将模
PCR常见问题解决方法
1）出现假阳性的原因是什么？出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。①引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。②靶序列或扩增产物的交叉污染
讲解7500荧光定量PCR仪常见问题
打怪升级的不败经验在于“储备”，储备技能和能量，从容应对每一个遇到的挑战。就像解决荧光定量PCR仪常规问题一样，学几招，也许在某一刻就是你需要的，先储备起来吧！Q ：7500快速定量PCR仪可以使用0.2ml PCR反应管或者96孔板吗？A：不可以，7500 快速定量PCR仪只支持0.1ml PC
电泳常见问题及解决方法
一、颗粒 （1）现象 在烘干后的电泳涂膜表面上有手感粗糙的、较硬的粒子，或肉眼可见的细小痱子，往往被涂物的水平面较垂直面严重，这种漆膜病态称为颗粒。 （2）产生原因 ①CED槽液PH值偏高，碱性物质混入，造成槽液不稳定，树脂析出或凝聚。 ②槽内有沉淀“死角”和裸露金属处。 ③电泳后清洗液
水泵常见问题及解决方法
多曲面搅拌机水泵常见问题及解决方法： 1）污水泵不转动或不出水的原因及排除方法 1、开关断开或保险丝烧断，检查电源电压或使用扬程是否符合规定，如不符合应加以调整。 2、电源断电或缺相，检查电源电压似的断电断相并排除故障。 3、叶轮被杂物卡住，清除叶轮流道内杂物。 4、定子绕组烧
ICPMS－常见问题及解决方法
如遇到仪器有问题，先进入Diagnostics菜单，查看Error log一，Error1203，1218，1219点不着火最常见的原因就是漏气导致氩气不纯。1.首先在仪器维护界面中purge管路，2.检查样品管是否在水中。3.检查与矩管连接的两路气Plasma gas 和 Aux gas 接头是否
PCR常见问题及回答
PCR常见问题及回答 1. cDNA产量的很低 可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 *zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系
PCR常见问题及对策
PCR常见问题及对策（一）没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR
7500荧光定量PCR仪常见问题解答
就像解决荧光定量PCR仪常规问题一样，学几招，也许在某一刻就是你需要的，先储备起来吧！Q ：7500快速定量PCR仪可以使用0.2ml PCR反应管或者96孔板吗？A：不可以，7500 快速定量PCR仪只支持0.1ml PCR反应管或者96孔板Q ：如何监控反应体系是否有蒸发？A：查看Rox信号是否
7500荧光定量PCR仪常见问题解答
Q ：7500快速定量PCR仪可以使用0.2ml PCR反应管或者96孔板吗？A：不可以，7500 快速定量PCR仪只支持0.1ml PCR反应管或者96孔板Q ：如何监控反应体系是否有蒸发？A：查看Rox信号是否在整个PCR过程中保持一致。在多组分图谱界面，选择单孔，如果Rox信号逐渐增高，代表样
解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题
解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题荧光定量pcr仪实时荧光定量pcr仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收
解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题
解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题荧光定量pcr仪实时荧光定量pcr仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集
7500荧光定量PCR仪常见问题解答
打怪升级的不败经验在于“储备”，储备技能和能量，从容应对每一个遇到的挑战。就像解决荧光定量PCR仪常规问题一样，学几招，也许在某一刻就是你需要的，先储备起来吧！Q ：7500快速定量PCR仪可以使用0.2ml PCR反应管或者96孔板吗？A：不可以，7500 快速定量PCR仪只支持0.1ml PCR
定量PCR的过程及原理
原理就是 DNA的复制过程三步 a、DNA变性（90℃-95℃）：目的基因DNA受热变性，解链b、 复性（55℃-65℃）：引物与单链互补结合c、延伸（70℃-75℃）：合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸
ELISA中常见问题及解决方法
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。 下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因
ELISA中常见问题及解决方法
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给
流式实验常见问题及解决方法
1.无染色/弱染色 2.高背景/非特异性染色 3.染色异常情况
ELISA中常见问题及解决方法
ELISA中常见问题及解决方法ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验
ELISA中常见问题及解决方法
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给
PCR仪常见问题及回答
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对
PCR仪常见问题及解答
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行