原位PCR和原位RTPCR操作规程
(一)、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30min; (5)梯度酒精脱水,室温干燥。 2)原位扩增: (1)切片滴加特异性序列引物30μLPCR扩增反应液,覆盖硅化盖玻片,石蜡油封边; (2)PCR热循环:94℃,1min;55℃,1min;72℃,1.5min,共25~30个循环,72℃延伸10min; (3)氯仿洗去盖玻片,4%多聚甲醛后固定10min,梯度酒精脱水,干燥。 3) 原位杂交: (1)加地高辛标记探针的杂交液,98℃变性10min,-20℃退火5min,42℃杂交过夜。 ......阅读全文
原位杂交仪—原位杂交实验(二)
原位杂交第二天 1. 1)将探针回收,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。 2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。 3)置换2XSSCT1ml,60℃,放置15分钟。 4)置换0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。
普通PCR仪/梯度PCR仪/实时荧光定量PCR仪/原位PCR仪应用对比
PCR:聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。 PCR原理示意图: 1589863475231958.jpg PCR仪的种类有:常规的普通PCR仪,梯度P
普通PCR仪/梯度PCR仪/实时荧光定量PCR仪/原位PCR仪应用对比
PCR:聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。PCR原理示意图:PCR仪的种类有:常规的普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类!1、普通PCR仪一般把一次PCR
原位聚合酶链式反应原位反转录聚合酶链式反应操作规程
(一)、 仪器 设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30min; (5)梯度酒
原位聚合酶链式反应原位反转录聚合酶链式反应操作规程
(一)、仪器设备 英国 Thermo Hybaid 原位 PCR 仪。 (二)、操作流程 1 、原位 PCR 步骤 1 )预处理: ( 1 )切片常规脱蜡; ( 2 ) 0.2mol/L HCl 处理 10min ; ( 3 ) 5 μ
原位分离技术
近几年来,原位分离技术(in situ product removal,简称ISPR)在乳酸发酵中的应用引起了世界范围内的广泛关注,溶剂萃取发酵法(油酸、叔胺等为萃取剂)、吸附法(离子交换树脂、活性炭、高分子树脂等)、膜法发酵(渗析、电渗析、中空纤维超滤膜、反渗透膜等)等,这些方法的使用都是基于在发
原位杂交的定义和应用
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
原位杂交技术原理和应用
原理: 荧光,又作“萤光”,是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光(通常是紫外线或X射线)照射,吸收光能后进入激发态,并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光(通常波长在可见光波段);而且一旦停止入射光,发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。
原位合成的概念和应用介绍
原位合成是一种制作基因芯片的方法,是原来用于电子芯片制作的光刻法转为核酸序列的合成技术。利用光罩控制反应位置,将核苷酸分子依序列一个一个接上去;可大量生产超高密度的芯片。由于制程与光罩成本等因素,这种方法做出的探针长度约在25-mer以下;因此同一个基因需要多个探针对应,以避免误判。
FISH荧光原位杂交实验(原位杂交)
1. 实验目的 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和在生物学、医学领域的应用。掌握原位杂交技术的操作方法,熟练掌握荧光显微镜的使用方法。2. 实验原理 荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一门新兴的分子细胞遗
荧光原位杂交实验——荧光原位杂交技术
荧光原位杂交可应用于:(1)动植物基因组结构研究;(2)染色体精细结构变异分析;(3)病毒感染分析;(4)肿瘤遗传学和基因组进化研究。实验方法原理用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵
原位杂交仪—荧光原位杂交相关解释
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule
用非同位素探针进行原位杂交和检测实验——荧光原位杂交
实验方法原理实验材料载有样本的载玻片试剂、试剂盒 20〜150 ng非同位素标记的DNA探针去离子的甲酰胺l0 mg mL经超声处理的鲑精DNA主杂交混合液50% (V V)甲酰胺(未去离子)SSCpH 7.0生物素检测液或地高辛检测液或生物素 地高辛检测液0.1% (V V) Triton ×-1
-荧光原位杂交的原理和意义
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术,是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。
原位杂交的技术原理和意义
原位杂交:在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应用带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DNA或RNA
原位杂交技术的原理和特点
原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞
半定量RTPCR-(SemiQuantitative-RTPCR-)
RT-PCR AnalysisSolutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5 mMLysis Solutio
原位型冻干机简介
冻干腔和冷阱为两个独立的腔体,冻干腔中的搁板带制冷功能,物料置入冻干腔后,物料的预冻、干燥过程无需人工操作。该类型冻干机的制作工艺复杂,制造成本高,但原位型冻干机是冻干机发展方向,是进行冻干工艺摸索的理想选择,特别适用于医药、生物制品及其他特殊产品的冻干。
原位杂交简介
原位杂交是在分子生物学领域应用极为广泛的实验技术之一,是在研究生物体发育过程中的一种极为重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为in situ hybridization,其中in situ为拉丁文,原义是"in its natural position". 字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处
什么是原位检测?
在检测中,经常听到原位检测,常见于岩土工程其实就是:在实地尽量对土体少的扰动,现场进行的一项检测,以尽可能的取得较为准确的测量数据。
原位杂交技术
导语我们常说,科学家也是艺术家,在明确真理探索科学的道路上,往往会创造出很多极具美感的艺术作品。所以今天小编为大家介绍的就是能做出美美图的新技能。先欣赏一下美美的实验结果图~---Olson, B. D. and Downes, G. B. ---in situ Hybridization of w
原位芯片的应用
原位芯片作为基础材料,它就像一个支点,可撬动多领域的应用,且与我们生活息息相关。比如,在原位芯片的“助攻”下,电子显微镜观测能力将大幅度提高,能全程高清拍摄每个原子的变化和运动轨迹,借由这项技术,可以研究汽车尾气、废水等。由于原位芯片高通量、少样本量的特性,可满足超快速体外诊断(如用尿液检测
原位电性能测试
聚焦离子束(Focused Ion beam, FIB)的系统是利用电透镜将离子束聚焦成非常小尺寸的显微切割仪器。目前商用系统的离子束为液相金属离子源,金属材质为镓(Ga),因为镓元素具有低熔点、低蒸气压及良好的抗氧化力;典型的离子束显微镜包括液相金属离子源、电透镜、扫描电极、二次粒子侦测器、5
什么是原位红外
原位红外是指测试反应过程中在原位不动下用红外线扫描机记录微观的反应变化。原位红外主要是测试反应过程中,官能团结构的变化,可以更好的模拟实验过程,对解释反应机理很有帮助。在催化剂表征方面,可以模拟出催化剂催化原理。
原位进样原理
原位测序技术的原理和应用点击次数:664 发布日期:2022-3-23 来源:苏州阿尔法生物实验器材有限公司原位测序 (ISS) 是一种新方法,通过该方法直接在固定组织或细胞样品的切片中对 mRNA 进行测序。原位测序原理关键是测序信息与其位置之间的联系—在一些情况下,是亚细胞位置。这与传统测序不
DRIFT原位光谱
散射反射傅立叶变换红外光谱(Diffuse Reflaxions Infrared Fourier Transformations Spectroscopy, DRIFTS)为化学家提供了研究接近真实反应条件的非均相气相反应的可能性。借助这种方法可以获取反应物与催化剂表面相互作用和吸附
RTPCR引物设计原则和方法
在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5,点击File-New-DNA sequence,出现输入序列窗口,Copy目的序列在输入框内(选择As),此窗
RTPCR引物设计原则和方法
在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5,点击File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口,Copy目的序列在输入框内(选择As),此
原位杂交(In-Situ-Hybridization,ISH)与荧光原位杂交(三)
(1)DAN斑点杂交①先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上。每个样品一般点50μl(2~10μg DNA)。④将膜烘干,密封保存备用。(2)RNA斑点杂交:与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(
原位杂交(In-Situ-Hybridization,ISH)与荧光原位杂交(五)
⑦60伏电泳过夜。 ⑧取出凝胶,水中浸泡2次,每次5min。 ⑨室温下将胶浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min,水解高分子RNA,以增强转印。 ⑩室温下将胶浸到0.1mol/L Tris·HCl (Ph7.5)中45min,使胶中和。