protocol:小鼠胚胎干细胞培养实验方法和操作步骤2

体外向心肌细胞方向分化胚胎干细胞在体外去除LIF情况下会自然向心肌细胞方向分化,小鼠的R1系一般在第7-8天自然出现搏动的心肌细胞,与胚胎发育时间线是完全一致的。培养基:EB 配制一20×不含DMEM,FBS,LIF的溶液(该溶液也能用于ES培养基--见前述)。分装在50ml 离心管中,(稀释为2×,每管42ml),贮存在-20℃。将21ml该溶液和50ml FBS加入450mlDMEM中制备培养基,0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。贮存液DMEM(高糖)胎牛血清L-谷氨酰胺(200mM)MEM NEAA(10mM)HEPES(1M)β-巯基乙醇(55Mm)PEST(P104U/mlS104μg /mlITSFn and N3(分化培养基)配制一20×不含DMEM/F12的溶液。分装在15ml 离心管中,(稀释为1×,ITSFn 7.05ml,N3 12.55ml),0.2μm滤膜过滤,贮存在-20℃。将该溶液加入DMEM......阅读全文

蛋白质的性质实验原理和操作步骤12

2. 不可逆的沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质的分子内部结构,空间构象遭到破坏,失去其天然蛋白质的性质,这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中,这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超生波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。重

RTPCR原理与实验操作步骤2

二、实验器具的处理与准备1、塑料制品:(包括枪头、EP管、匀浆管等)先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中小枪头需要吸管打入DEPC水,过夜,然后高压,再烤干备用,实验前将枪头等放入吸头台,再高压一次(EP管)2、玻璃制品:泡酸过夜,冲洗干净,蒙锡纸烤干备用(DEPC水泡)

水套式CO2培养箱操作步骤

水套式CO2培养箱操作步骤1、水套式CO2 箱必须先进行加水操作,步骤如下所述:打开水,缓慢给水箱加水,随水位逐渐升高,当低水位指示灯灭后,此时再等待3-5秒后停止加水,此时水位在低、高水位之间,水位灯均应不亮,设备可投入运行。在未加水至高于低水位时,低水位指示灯亮并有蜂鸣报警声。如进水过多,高水位

2C5细胞小鼠杂交瘤细胞培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mL2C5细胞小鼠杂交瘤细胞。悬液的冻存管在  37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL  培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 250px 皿中

Western印迹法(试剂配制和操作步骤)2

(二)使用液单去污剂裂解液(50mmol/L Tris•HCl pH8.0,150mmol/L NaCl,1%TritonX-100,100?g/ml PMSF):1mol/L Tris•HCl(pH8.0) 2.5mlNaCl 0.438gTritonX-100 0.5ml蒸馏水至 50ml混匀后

DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤2

【操作步骤】1.PCR测序反应(1) 取0.2ml的PCR管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂: 所加试剂测定模板管标准对照管 BigDye Mix 1μl 1μl 待测的质粒DNA 1μl- pGEM-3Zf (+) 双链DNA-1μl 待测

线虫unc22突变基因的克隆实验原理和操作步骤2

(四)目的基因片段与克隆载体的连接PCR产物经试剂盒纯化回收后,通过T/A克隆的方法,直接与pMD18-T载体连接,连接反应体系如下:纯化回收的PCR产物 4μlLigation SolutionⅠ 5μlpMD18-T Vector DNA 1μl混匀后16℃连接过夜。产物可于-20℃保存。(五)

实验小鼠给药和采血方法

 (一)给药方法1.灌胃给药小鼠专用灌胃针由注射器和喂管组成,喂管长约1nm,喂管尖端焊有一金属小圆球,金属球中空,用途是防止喂管插入时造成损伤。金属球弯成20度角,以适应口腔与食道之间弯曲。将喂管插头紧紧连接在注射器的接口上,吸入定量的药液;左手捉住小鼠,右手拿起准备好的注射器。将喂管针头尖端防放

类器官培养的方法和步骤

类器官培养是一种在体外利用细胞培养技术构建具有类似于体内器官结构和功能的微型组织的方法。类器官培养通常涉及以下几个关键步骤:细胞来源选择:可以是多能干细胞(如胚胎干细胞、诱导多能干细胞)、成体干细胞(如肠道干细胞、肝干细胞等),也可以是肿瘤组织中的细胞。培养基准备:根据所培养的类器官类型,配制含有特

酵母菌的培养和观察实验方法与步骤

目的 认识酵母菌 的形态特征,了解培养酵母菌的方法。实验前的思考 人类认识和利用酵母菌的历史悠久,早在史前时期,先人们就学会酿酒。约在6000年前,就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜 ,人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯,他是为寻求酿造高品质啤

RtPCR实验准备及与操作步骤2

六、需购置的Rt-PCR材料:(生工. Tel. 2236106.)Taq酶(含MgCl2 Buffer) 200u 70.00dNTP: 1支oligo(dT)15: 1 OD 40.00 promegaM-MLV: 1支 250.00 promega (Buffer)RNasin: 1支 110

实验的过程中植物培养箱操作步骤和如何选用实验仪器

  培养基配制的操作程序:        1、加琼脂和无离子水至定容量的70%左右,加热使琼脂溶解;        2、琼脂溶解后,加入培养基母液、激素、糖等,稍加热使糖溶解;        3、糖溶解,加无离子水至定容量;        4、充分搅拌后,测pH值至要求值;        5、培养基

实验的过程中植物培养箱操作步骤和如何选用实验仪器

实验的过程中植物培养箱操作步骤和如何选用实验仪器培养基配制的操作程序:1、加琼脂和无离子水至定容量的70%左右,加热使琼脂溶解;2、琼脂溶解后,加入培养基母液、激素、糖等,稍加热使糖溶解;3、糖溶解,加无离子水至定容量;4、充分搅拌后,测pH值至要求值;5、培养基分装入瓶后灭菌。组培玻璃器皿的选择和

小鼠ELISA试剂盒的操作步骤

小鼠ELISA试剂盒的操作步骤: 影响反应因素较多,特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致,因此在定量测定中,每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA试剂盒,标准曲线的范围一般较宽,曲线点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,

小鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)ELISA试剂盒操作步骤

我司ELISA试剂盒品质保证,质量优,价格实惠,是您生物实验的首选,如有需要可与我司销售人员联系。本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中小鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)水平。用纯化的小鼠蛋白磷

双脱氧链终止法测定DNA序列实验原理、操作步骤和仪器...2

3.制备电泳凝胶及电泳(1)制备胶模:取双块制胶玻板,先用泡沫海绵沾“洗洁净”液仔细擦洗,用水彻底淋洗,干燥后继用酒精清洗,晾干,再用硅烷剂(repel- silane)将玻板的—面擦一遍,蒸馏水淋洗,干燥 (注意:清洗时应戴一次性手套操作)。将其中一块玻板平置台上(硅烷处理过的—面朝上),两侧各放

PCRDGGE实验原理和操作步骤

【实验目的】 1.了解PCR-DGGE技术的原理。 2.了解并熟悉PCR-DGGE技术的步骤。 【实验原理】 变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm

PCRSSCP实验原理和操作步骤

【实验目的】1.了解PCR-SSCP技术的原理。2.了解并熟悉PCR-SSCP技术的步骤。 【实验原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查突变的新技术。它是一种简单、快速、经济的点突变筛查手段。PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA,

过滤所需实验仪器和操作步骤

实验仪器漏斗、烧杯、玻璃棒、铁架台(含铁圈)、滤纸。操作要领过滤布袋要做到“一贴、二低、三靠”。(见图)一贴即使滤纸润湿,紧贴漏斗内壁,不残留气泡。(防止气泡减慢过滤速度。)二低1.滤纸边缘略低于漏斗边缘。2.液面低于滤纸边缘。(防止液体过滤不净。)三靠1.倾倒时烧杯杯口要紧靠玻璃棒上。过滤海绵2.

cDNA的合成实验原理和操作步骤

一、实验目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、实验原理反转录酶主要用于体外cDNA的合成。目前最常用的反转录酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它们具有依赖于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性,可以以RNA分子

MDCK细胞培养所需材料和操作步骤

MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员,必须按照本文件相关的操作规程进行操作。二、适用范围适用于疾控中心所有技术人员 。三、程序(一)生物安全要求实验室生物安全级别:BSL-1所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。(二)材料1. 生长成片的MDCK

小鼠肝细胞培养实验

细胞培养技术             实验方法原理 直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步,是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基

小鼠肝细胞培养实验

            实验方法原理 直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步,是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同分为组织块培养法和单层细胞培养法。

小鼠肝细胞培养实验

实验方法原理 通过光镜观察细胞形态、电镜观察超微结构及检测培养上清白蛋白水平证实培养细胞为肝细胞,持续培养结果显示原代培养第6~12 d 左右为肝细胞功能最佳观察和实验阶段。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 DMEMDMEM胰酶PBS仪器、耗材 饭盒纱布小剪子小镊子大镊子大烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6 孔

病毒RNA提取实验方法(protocol)

1,用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤,可参考(我提过N次做定量PCR都没问题):1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时,

贫血实验诊断方法和步骤

(1)确定有无贫血:根据RBC、Hb和Hct确定,以Hb和Hct最常用。1)成人诊断标准。2)小儿诊断标准:根据世界卫生组织资料和1986年联合国儿童基金会的建议为:出生10天内新生儿Hb小于l45g/L;1个月以上Hb小于90g/L;4个月以上Hb小于100g/L;6个月~6岁者Hb小于l10g/

常规组织初代消化培养操作方法步骤

1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75% 酒精擦拭手至肘部。2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用 Hanks 液漂洗 2~3 次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中 30~60 分钟。4、剪

实验室光照培养箱详细操作步骤分析

使用方法1、接通电源,打开电源开关,使开关处于“通”的位置,设备进入上电状态。此时即可开始温度湿度和光照时间的设定操作。   1)温度控制仪设定:按一下SET键,进入SV设置状态,下面显示窗中数字闪动,其中末位数不闪动,按<│>将不闪动数位移至需设定位,然后按∨或∧键即可改变温度设定值(小值0.1℃

血细胞分离培养方法和步骤1

以前认为红细胞、粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等血细胞都属终末分化细胞,很难在体外培养生长或仅能短期培养而不能传代,近年来由于细胞培养技术的发展,已有血细胞培养成功的报道,正常血细胞在体外培养生长时间短,只有白血病细胞,血友病细胞、淋巴瘤细胞可培养成功并建立细胞系,但多半为EB病毒等致瘤病毒引起的转化细