聚丙烯酰胺凝胶电泳实验试剂和操作步骤
实验试剂：试剂贮备液：1、 1mol/L HCl48ml，Tris36.6g，TEMED0.23ml，加蒸馏水配成100ml，pH8.9。2、 1mol/L HCl48ml，Tris5.98g，TEMED0.46ml，加蒸馏水配成100ml，pH6.7。3、 Acr28g，Bis0.735g，加蒸馏水配成100ml。4、 Acr10g，Bis2.5g，加蒸馏水配成100ml。5、 核黄素4mg，溶于100ml蒸馏水中。6、 蔗糖40g，加蒸馏水配成100ml。7、 电极缓冲液：Tris6.06g，甘氨酸28.52g，加蒸馏水配成1000ml，pH8.3，用时稀释10倍。8、 过硫酸铵0.14g，加蒸馏水配成100ml。9、 溴酚蓝1mg溶于100ml蒸馏水中。10、 脱色溶液：甲醇5ml，冰醋酸9ml，加蒸馏水配成100ml。11、 蛋白质染色液：考玛斯蓝G─250 200mg，甲醇100ml，冰醋酸20ml，蒸馏水80ml，溶......阅读全文
聚丙烯酰胺凝胶电泳实验试剂和操作步骤
实验试剂：试剂贮备液：1、 1mol/L HCl48ml，Tris36.6g，TEMED0.23ml，加蒸馏水配成100ml，pH8.9。2、 1mol/L HCl48ml，Tris5.98g，TEMED0.46ml，加蒸馏水配成100ml，pH6.7。3、 Acr28g，Bis0.735g，加蒸馏
免疫沉淀实验原理、仪器试剂和操作步骤
（一）原理免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白 A／G（Protein A／G）或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子－蛋白A／G或二抗－抗体－目的蛋白复合物，沉淀经洗涤后，重悬于电泳上
酵母RNA的提制实验原理、仪器试剂和操作步骤
一、目的：学习和掌握从酵母中提制RNA 的原理和方法，从而加深对核酸性质的认识。二、原理：提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是RNA（2.67～10.0%），DNA 很少（0.03～0.51
免疫印迹（Western－blotting）实验原理、试剂和操作步骤
(一)原理Western blot是一种在PVDF或硝酸纤维素（NC）膜上进行的抗原抗体反应。蛋白电泳后，将蛋白转移至膜上，再与特异性抗体孵育，洗去游离的抗体，然后和酶标记的二抗孵育，再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好，亲合力高，Western blot检测的灵敏度较高，尤其是采用
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理和操作步骤
实验目的：测定蛋白质亚基的分子量及纯度 实验原理：在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的点泳迁移率主要取决于亚及分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。当蛋白质的分子量在15KD到200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系，可以用来测定蛋白质亚基的分子量。
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）
Western印迹法（试剂配制和操作步骤） 这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）5
（三） SDS－PAGE电泳（1） 清洗玻璃板：一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。（2） 灌胶与上样1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。）2、按前面方法配10％分离胶，加入
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）3
10X丽春红染液丽春红S 2g三氯乙酸 30g磺基水杨酸 30g蒸馏水至 100ml使用时将其稀释10倍。TBS缓冲液（100mmol/ L Tris?HCl pH7.5,150mmol/L NaCl）1 mol/ LTris•HCl（pH7.5） 10mlNaCl 8.8g蒸馏水至 1000ml
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）（上）
这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、电动匀
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）1
这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、玻
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）（下）
（二）使用液单去污剂裂解液（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％SDS，1mmol/L PMSF）： 1mol/L Tris•HCl（pH8.0）2.5mlNaCl 0.438g10%
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）4
操作步骤： （一） 蛋白样品制备 （1） 单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。 2、每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1m
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）6
（五）免疫反应（1）将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭1h。（2）将一抗用TBST稀释至适当浓度（在1.5ml离心管中）；撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整；将抗体溶液加到保鲜膜上；从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）2
（二）使用液单去污剂裂解液（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX－100，100?g/ml PMSF）：1mol/L Tris•HCl（pH8.0） 2.5mlNaCl 0.438gTritonX－100 0.5ml蒸馏水至 50ml混匀后
不连续SDSPAGE试剂和操作步骤
试剂1、30%丙烯酰胺贮存液：29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于100ml热水中，验证其pH值不大于7.0。置棕色瓶中，4℃保存。2、1.5mol/L Tris（pH8.8）溶液3、10% SDS溶液4、10%过硫酸铵：新鲜配制5、 TEMED溶液：4℃保存6、1.0 mol/L T
DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤1
DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最
DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤2
【操作步骤】1．PCR测序反应(1) 取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂： 所加试剂测定模板管标准对照管 BigDye Mix 1μl 1μl 待测的质粒DNA 1μl－ pGEM-3Zf (+) 双链DNA－1μl 待测
DNA酶切及凝胶电泳实验原理、仪器试剂和操作步骤
【实验原理】DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖－磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以相同的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下，DNA 分子的迁移速度取决于分子
免疫组化试剂盒实验操作步骤
仪器、设备：移液器、免疫组化笔、微波炉或高压锅、计时器、孵育湿盒、染色架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶等。溶液配制：PBS溶液配制；EDTA组织抗原修复液及DAB显色液使用详见免疫组化试剂盒产品说明书操作步骤。实验温度：15-28℃ 实验步骤：1. 脱蜡水化1) 石蜡切片置于新鲜的二甲苯中，浸泡15 m
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理、仪器试剂和操作步骤
一、原理DNA在碱性的溶液中带有负电荷，因此，在电场作用下朝正极移动。在琼脂糖凝胶中电泳时，由于琼脂糖凝胶具有一定孔径，长度不同的DNA分子由于所受凝胶的阻遏作用大小不一，迁移的速度不同，从而可以按照分子量大小得到有效分离。溴化乙锭可插入到DNA分子的双链中。在紫外光的照射下，插入溴化乙锭的DNA呈
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)实验原理和操作步骤
实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶
PCRDGGE实验原理和操作步骤
【实验目的】 1．了解PCR-DGGE技术的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技术的步骤。 【实验原理】 变性梯度凝胶电泳（DGGE）是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度（Tm
PCRSSCP实验原理和操作步骤
【实验目的】1．了解PCR-SSCP技术的原理。2．了解并熟悉PCR-SSCP技术的步骤。 【实验原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查突变的新技术。它是一种简单、快速、经济的点突变筛查手段。PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA，
过滤所需实验仪器和操作步骤
实验仪器漏斗、烧杯、玻璃棒、铁架台（含铁圈）、滤纸。操作要领过滤布袋要做到“一贴、二低、三靠”。（见图）一贴即使滤纸润湿，紧贴漏斗内壁，不残留气泡。（防止气泡减慢过滤速度。）二低1．滤纸边缘略低于漏斗边缘。2．液面低于滤纸边缘。（防止液体过滤不净。）三靠1．倾倒时烧杯杯口要紧靠玻璃棒上。过滤海绵2．
Southern－blot实验方法和操作步骤
第一天 (restriction enzyme digestion)1.取待測的genomic DNA，用二次水稀釋10倍(30μl的DNA 加270μlddH2O→ 300μl)2.換算genomic DNA濃度(OD260)，再換算取10μg所需的體積。3.取10μg DNA，用限制酵素EcoR
cDNA的合成实验原理和操作步骤
一、实验目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、实验原理反转录酶主要用于体外cDNA的合成。目前最常用的反转录酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它们具有依赖于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性，可以以RNA分子
Western－blotting－Protocol(试剂配方和实验操作)
一、 试剂配方：1X TBS: Tris-base 12.11gNacl 8.775g用HCl 调pH7.4，用纯水稀释至1L5X Transfer buffer: Tris-base 15.1gGlycine 72.0gTo 1 L10X碱性磷酸酶缓冲液： 1 mol/L Tris-HCl pH
细胞传代培养原理、仪器试剂和操作步骤
一、原理细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。二、材料和试剂1、细胞：贴壁细胞株2、试剂
IHC－实验操作步骤
免疫组化方法（石蜡切片）*重要提示：参考抗体说明书选用合适的抗体稀释液和抗原修复处理方法。IHC 方法：抗原修复缓冲液/抗体稀释液A. 所需溶液和试剂1. 二甲苯2. 无水乙醇（100% 和 95%，变性无水乙醇，组织学级）3. 去离
Northern－Blot实验仪器试剂和方法步骤（1）
[仪器、试剂、材料]（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。（二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂No