RNAi制备小分子干扰RNA(smallinterferingRNAs,siRNAs)的方法1
最适用于:快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型不适用于:长时间的研究项目,或者是需要一个特定的siRNA进行研究,特别是基因治疗体内表达前面的3种方法主要都是体外制备siRNAs,并且需要专门的RNA转染试剂将siRNAs转到细胞内。而采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架则属于:从转染到细胞的DNA模版中在体内转录得到siRNAs。这两种方法的优点在于不需要直接操作RNA。4. siRNA表达载体多数的siRNA表达载体依赖3种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹siRNA在哺乳动物细胞中的表达(1–4)。这3类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA,而且它是通过添加一串(3到6个)U来终止转录的。要使用这类载体,需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火,克......阅读全文
RNAi制备小分子干扰RNA(small-interfering-RNAs,siRNAs)的方法1
最适用于:快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型不适用于:长时间的研究项目,或者是需要一个特定的siRNA进行研究,特别是基因治疗体内表达前面的3种方法主要都是体外制备siRNAs,并且需要专门的RNA转染试剂将siRNAs转到细胞内。而采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架则属于:从转染到细
RNAi制备小分子干扰RNA(small-interfering-RNAs,siRNAs)的方法2
越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子,能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的 mRNA,这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference
RNA干扰相关知识Small-interfering-RNA(siRNA)
Small interfering RNA(siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
Small-interfering-RNA(siRNA)的概念
Small interfering RNA(siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
RNAi表达载体构建
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)。siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够
Small-interfering-RNA(siRNA)是什么意思?
Small interfering RNA(siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
RNAi的分子机制
通过生化和遗传学研究表明,RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段,加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明;一个称为Dicer的酶
RNAi(RNA干扰)的分子机制
通过生化和遗传学研究表明,RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段,加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明;一个称为Dic
RNAi表达载体构建(一)
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分
RNA干扰实验技术介绍(一)
通过生化和遗传学研究表明,RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段,加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明;一个称为Dic
RNA干扰(RNAi)实验原理与方法(1)
近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。一、R
RNAi:制备siRNAs的方法
越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子,能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA,这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference p
RNAi术语表
RNAi GlossaryDicer - Dicer is a member of the RNase III family of nucleases that specifically cleave double-stranded RNAs. Dicer processes long dsRNA
RNAi原理图解
The Mechanism of RNA Interference (RNAi)Long double-stranded RNAs (dsRNAs; typically >200 nt) can be used to silence the expression of target genes in
RNAi实验原理与方法(一)
通过生化和遗传学研究表明,RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段,加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明;一个称为Dic
RNAi实验原理与制备方法(一)
实验原理通过生化和遗传学研究表明,RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段,加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明;一个称
RNAi实验原理与方法选择(一)
一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明,RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段,加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证
RNAi的作用机制及siRNA的合成方法(二)
2.3 倍增阶段 siRNA在RNA依赖性RNA聚合酶(RdRP)的作用下,以mRNA为模板,siRNA为引物,扩增产生足够数量的dsRNA作为底物提供给Dicer酶,产生更多的siRNA, 可再次形成RISC,并继续降解mRNA,从而产生级联放大效应。并作用于靶mRNA。如此反复
RNAi相关的名词解释[英文]
Argonaute - A family of proteins containing multiple domains and involved in RNA interference (RNAi). Argonatue is the main component of RNAi effector
RNA干扰制备方法
化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高,定制周期长,特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高,为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了,比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于:已经找到最有效的siRNA的情况
RNAi技术
DNA芯片检测siRNA专一性 长片断的双链RNA (dsRNA) 导入例如植物,真菌,果蝇,线虫等生物的细胞中会引发同源mRNA的降解——这就是所谓的RNA interference (RNAi)。RNAi分两个步骤,首先是长片断双链dsRNAs被核酶Dicer切割成21—25个碱基的sm
RNAi的实验原理和操作实用技术(1)
几十年来生物学上最重要的进展,也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象,是在线虫中发现的,在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。此后,科学家们明白,RNAi还有其他形式,它既是一种了解基因功能的强大工具,又是很多生物的基因组所
通过RNAi使基因特异性沉默
RNA interference (RNAi) is a phenomenon in which the introduction of double-stranded RNA (dsRNA) into a diverse range of organisms and cell types caus
RNAi表达载体构建
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够
RNAi技术专有名词(1)
1.RNAi:(RNA interference)RNA干扰 一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi,也译作RNA干预或者干涉)。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机
Cloning-of-small-RNAs-with-5’-phosphate-and-3’-OH-ends01
IntroductionThe following protocol describes a procedure for the purification and cloning of miRNAs and other small RNAs in the 20-30 nucleotide size
RNAi技术突破:siRNA体内传递机制
小RNAs如何进入哺乳动物细胞? 一切开始于花:上个世纪90年代挪威的研究人员发现在矮牵牛(petunias)中有一种特殊的基因的额外拷贝可以抑制其活性,而不是如之前假想的增强其活性。几年之后这种基因研究发现其机制基于细胞中mRNA的降解,最终在90年代末期诺贝尔获得者Andrew Fire和C
RNAi:制备siRNAs的方法
越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子,能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA,这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference pat
《自然—生物技术》:研究发现siRNA体内传递机制
小RNAs如何进入哺乳动物细胞? 上个世纪90年代挪威的研究人员发现在矮牵牛(petunias)中有一种特殊基因的额外拷贝可以抑制其活性,而不是如之前假想的增强其活性。几年之后这种基因研究发现其机制基于细胞中mRNA的降解,最终在90年代末期诺贝尔获得者Andrew Fire和Craig Mello
小分子RNA——microRNA综述(1)
RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”,但越来越多的证据清楚的表明,RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA 干扰(RNA interference)的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识,更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有