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反义技术——RNA干扰(RNAinterference,RNAi)

最近由于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA干扰是由长的双链 RNA分子发动的,该分子可以被Dicer enzyme加工成长度为21-23个核苷酸的RNA(见图)。RNaseIII蛋白被认为是作为一个二聚体发挥作用,它对双链RNA的两个链都进行切割,酶切的产物3’末端互相重叠。然后这种小的干扰RNA分子(small interfering RNAs,siRNAs)掺入RNA诱导的沉默复合物(RNA- induced silencing complex,RISC),引导核酸酶降解靶RNA。 这种保守的生化机制可用于研究多种模式生物的基因功能,但是它在哺乳动物细胞中的应用受到阻碍,因为长的......阅读全文

RNAi表达载体构建

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够

RNAi表达载体构建(一)

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分

RNAi技术研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA,dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现,植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post tran

RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)

1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果

RNAi

1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果是二者都同样

RNAi基因沉默方法

大约在十年前,2006年诺贝尔生理/医学奖得主CraigMello和AndrewFire发现,他们能够将短RNA 分子插入到线虫中并沉默特定基因的表达。今天,研究人员也常常使用这种强大的RNA 干扰方法来研究哺乳动物系统中的特定基因功能。为了进行这种基因沉默实验,研究人员通常需要依赖化学合成的RNA

细胞自噬过程的观察和检测方法

细胞自噬过程的观察和检测可应用于:(1)研究细胞防御和应激调控机制;(2)自噬体膜的来源问题研究。(3)细胞器自噬研究。实验方法原理正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对自噬进行人工干预和调节,包括自噬诱导剂、自噬抑制剂等工具药,以及反义RNA干扰技术(Knockdown)、突变株筛选

细胞自噬过程的观察和检测方法

工具药、融合蛋白等示踪自噬形成             实验方法原理 正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对

细胞自噬过程的观察和检测方法

工具药、融合蛋白等示踪自噬形成             实验方法原理 正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对

价值数十亿美元的生物科技公司

   Moderna Therapeutics公司可谓野心勃勃,但是它也有相配套的巨额资金支持。这家羽翼未丰的新创公司是如何成为有史以来最有价值的私有药物公司之一的呢?  在两年半前的一次早餐会上,制药巨头Astra­Zeneca公司新上任的首席执行官Pascal Soriot签署了一份药物研发协议

冷泉港实验室:划算的基因沉默方法

大约在十年前,2006年诺贝尔生理/医学奖得主Craig Mello和Andrew Fire发现,他们能够将短RNA分子插入到线虫中并沉默特定基因的表达。今天,研究人员也常常使用这种强大的RNA干扰方法来研究哺乳动物系统中的特定基因功能。 为了进行这种基因沉默实验,研究人员通常需要依赖化学合成的

中山大学等开发RNA编辑新工具

  CRISPR-Cas9系统使用一段引导RNA(其与Cas9蛋白结合起来才能发挥作用)来靶定一段DNA,并裂解双链DNA。这一现象提出了一个问题:由一个Dicer结合RNA元件和一段反义RNA组成的一种人造小RNA(asRNA,是否也能用来诱导Dicer处理和降解一段特定的RNA呢?  为此,5月

强生公布RNAi药物JNJ-3989双联疗法和三联疗法临床数据!

  2019年第70届美国肝病研究协会(AASLD)年会于11月8-12日在美国波士顿举行。美国肝病年会(The Liver Meeting)是目前世界上最大、最具权威的肝脏病学会议,每年都有来自世界各地的9000余名肝病学家和从事肝病研究的专业人士前来参会,一起分享探讨肝病学领域的突破性研究成果、

RNAi干扰技术及应用进展研究(二)

1.2 RNAi的作用特点 (1)“共抑制”性。RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默机制,它的启动子相当活跃,外源基因可以转录,但不能正常积累mRNA;RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活,同时诱导与其同源的内源基因沉默。 (2) 高效性。试验证明双链RNA干扰m

Patisiran获批上市 “沉默”的小核酸药物曙光乍现?

  上周,世界首例免疫艾滋病基因编辑婴儿诞生的消息刷屏网络,随即引起轩然大波,而基因编辑则是利用生物学手段(如CRISPR/Cas9技术)实现对特定的基因片段的敲除或者修复,技术并非创新且已成熟,但风险仍兼而有之(如脱靶效应、收益与风险问题等),故此已遭多方强烈反对。而基因沉默则是另外一项与基因相关

基因技术专题-1

专题一:RNA干扰技术(RNAi)1995年,康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都阻断了基因的表达,他们对这个结果百思不得其解。直到1998年, Andrew Fire的研究证明,在正义RNA也阻断了基因表达的试验中,真正起作用的是双链RNA。这些

前景无法抵挡: RNA药物刺激生物医药公司神经

  RNA药物技术是近年来新兴起的颠覆性的生物医药技术,通过关闭致病基因或者诱导免疫应答行使医药功能,受到了科研人员、投资者、医药和生物技术界的普遍关注,而之前RNA一直被认为是细胞中的垃圾片段,首次引人注目的是2006年Andrew Fire 和Craig Mello教授凭借RNAi干扰技术获

RNA干扰实验技术

实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法,包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法,及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因

RNAi的作用机制及siRNA的合成方法(一)

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strandedRNA, dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达,用特异性的抗体几乎检测不到靶向基因所表达的蛋白质。因此,RNAi技术又

《自然》获得首创性全基因组RNAi库

来自奥地利科学院维也纳分子生物学研究院(Institute of Molecular Biotechnology of the Austrian Academy of Sciences)的研究人员以果蝇为研究对象,利用一套完整的基因组序列数据,从达到了88%覆盖率的蛋白编码基因中获得了全基因组范围内

RNAi治疗新进展: 有望治愈致命遗传病

一种siRNA分子(紫色和绿色部分)可能治疗遗传性肝脏疾病   RNA干扰(RNAi),基因沉默技术的一种,显示了疾病治疗的巨大潜力,但从来没有人能确切证实它对疾病治疗所能发挥的作用。但是现在RNAi已经逐渐获得了研究人员的一致好评。一项新的研究表明,该方法能够显著并安全地削弱导致一种罕见的肝脏疾

抗肿瘤药物研究及新药筛选

  提 纲   一、化疗药物的发展   二、肿瘤的药物治疗   三、抗肿瘤药物筛选及评价   四、体外抗肿瘤活性试验   五、体内抗肿瘤活性试验   一、化疗药物的发展   • 近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。   • 50年代通过动物筛选化疗药物发现了5FU、MTX、CTX等,

抗肿瘤药物研究及新药筛选

  提 纲   一、化疗药物的发展   二、肿瘤的药物治疗   三、抗肿瘤药物筛选及评价   四、体外抗肿瘤活性试验   五、体内抗肿瘤活性试验   一、化疗药物的发展   • 近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。   • 50年代通过动物筛选化疗药物发现了5FU、MTX、CTX等,

RNA干扰(转录后基因沉默)实验

RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。目前主要用于(1)特异性剔除或关闭特定基因的表达 (2)探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗 (3)使

细胞自噬的研究方法

正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对自噬进行人工干预和调节,经报道的工具药有: 一、自噬诱导剂  (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690,330/

Autophagy(自噬)

自噬是近年来很热门的领域,搜了一下园子,发现没有这方面系统的介绍或讨论,但很多战友有这方面的疑问,加上本人最近对此也非常感兴趣,因此,借本版来专门讨论一下自噬(说实在的,自噬属于丁香园哪一个版块的范围我也选不好),与各位同行或有志于研究自噬的战友共同学习,也欢迎大家提出自己的看法,本人的目的就是交流

Autophagy(自噬)

自噬是近年来很热门的领域,搜了一下园子,发现没有这方面系统的介绍或讨论,但很多战友有这方面的疑问,加上本人最近对此也非常感兴趣,因此,借本版来专门讨论一下自噬(说实在的,自噬属于丁香园哪一个版块的范围我也选不好),与各位同行或有志于研究自噬的战友共同学习,也欢迎大家提出自己的看法,本人的目的就是交流

细胞自噬的研究方法介绍

正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对自噬进行人工干预和调节,经报道的工具药有:一、自噬诱导剂(1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chlor

Science医学:推动反义寡核苷酸治疗的逆袭

  来自美国加州洛杉矶分校的研究人员发现了一种可使针对杜氏肌营养不良症(DMD)的反义核苷酸疗法变得更为有效的辅助药物。联合两种治疗方法将有望显著减缓这一肌肉消耗性疾病的进展。相关论文发表在12月12日的《科学转化医学》(Science Translational Medicine)杂志上。

诱导JNK组合促进胃癌发生研究进展分析

  胃癌是恶性肿瘤最常见的类型之一,是全球第二大癌症相关死亡原因。由于早期胃癌具有非特异度症状,患者往往晚期才能确诊。临床数据表明,晚期胃癌患者术后5年生存率仅为30%-40%,而早期胃癌则为70%-90%。因此,早期诊治是提高患者5年生存率和改善患者预后的重要途径。目前,胃癌的诊断依赖于内镜、病理