蛋白质分析技术(AnalyticalTechniquesforProtein)1
第一节 蛋白质分离纯化与鉴定的基本原理一、蛋白质的理化性质（一）蛋白质的两性电离 pI：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为0，此时的溶液的pH称为~。 体内大多数蛋白质：pI≈pH 5.0。在pH 7.4，大多数蛋白质解离成阴离子。少数蛋白质为碱性蛋白质（如鱼精蛋白、组蛋白）和酸性蛋白（如胃蛋白酶和丝蛋白等）。 （二）蛋白质的胶体性质 1.蛋白质：生物大分子，MW：1~100万，大小：1~100nm 2.维持蛋白质胶体稳定因素 蛋白质亲水基团→吸收水分→水化膜 →防止蛋白质沉淀析出 蛋白质表面带有电荷→稳定胶体→防止蛋白质沉淀析出 （三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 1.蛋白质变性（denaturation） 2.蛋白质沉淀 （1）疏水测链暴露→蛋白质聚集→沉淀（变性） （2）等电点或去水化膜→蛋白质沉淀（非变性） 3.复性（re......阅读全文
核酸和蛋白质序列分析2
（2）输出：除了以文本形式外，还可以通过JalView显示和编辑结果。此外，还可以另外使用GeneDoc（常见于文献）及DNAStar软件等显示结果。多序列比对的结果还用于进一步绘制进化树。3、ORF(Open Reading Frame)分析从核酸序列翻译得到蛋白质序列，需要进行ORF分析，每个生
蛋白质的微量测序分析实验
本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质序列分析和结构预测
【实验目的】 1、掌握蛋白质序列检索的操作方法； 2、熟悉蛋白质基本性质分析； 3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白质功能预测，了解基于motif、结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测； 4、了解蛋白质结构预测。【实验内容】 1、使用Entrez或SRS信息查询系统检索人脂联素（ad
关于蛋白质组的研究分析
主要有两方面，一是结构蛋白质组学，二是功能蛋白质组学。其研究前沿大致分为三个方面： ① 针对有关基因组或转录组数据库的生物体或组织细胞，建立其蛋白质组或亚蛋白质组及其蛋白质组连锁群，即组成性蛋白质组学。 ② 以重要生命过程或人类重大疾病为对象，进行重要生理病理体系或过程的局部蛋白质组或比较蛋
蛋白质的Western－blot印迹分析
一、原理 一个基因表达的最终产物是产生相应的蛋白，因此检测蛋白是测定基因表达的主要标志。 原理：Western Blotting 是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离；并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物上，用抗靶蛋白的非标记抗体（
蛋白质质谱分析具体流程
肽指纹图谱：每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段，这些肽段的质量（分子量）就是这个蛋白的肽指纹图。当一个未知蛋白被酶解，用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量。然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配。匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白。步骤：2DE 切
蛋白质的微量测序分析实验
基本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质
蛋白质序列分析和结构预测
【实验目的】1、掌握蛋白质序列检索的操作方法；2、熟悉蛋白质基本性质分析；3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白质功能预测，了解基于motif、 结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测；4、了解蛋白质结构预测。【实验内容】1、使用Entrez或SRS信息查询系统检索人脂联素 (adiponectin)
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料Sf细胞试剂、试剂盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤1. 接种2.5x108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml 病毒贮液中取0.5
蛋白质测定仪对鸡蛋粉蛋白质含量的分析
将鸡蛋进行特殊的工艺加工而成的鸡蛋粉，有着易贮藏，易运输的特点，并且可以制备特殊用途的产品。鸡蛋粉中的蛋白质含量十分丰富，在此就几种经常使用的方法和两种溶剂,对蛋粉中可溶性蛋白质含量进行了测定比较,以找到用于测定蛋粉中蛋白质含量的适宜方法和溶剂。 称取0.5g蛋粉分别用水和质量浓度为50g/LNaC
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪蛋白激酶
试剂、试剂盒酪蛋白激酶分析缓冲液β-酪蛋白β-酪蛋白储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：5X 酪蛋白激酶分析缓冲液 4 μl β-酪蛋白
蛋白质定量实验_考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法
实验方法原理蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基，其化学结构中的共轭双键，具有吸收紫外光的特性，吸收高峰在280 nm处，蛋白质溶液的吸光度(A280)与蛋白质含量成正比关系，可作为样品中蛋白质定量测定。该方法简便、灵敏、快速，且样品用量少且可回收，低浓度的盐类也不干扰测定，但测定
蛋白质测定仪分析土壤环境对于小麦蛋白质影响
蛋白质是小麦籽粒中zui重要的营养成分，其含量是衡量小麦营养品质的重要指标。蛋白质含量的测定可以使用蛋白质测定仪进行简单的测定分析，实验表明小麦籽粒蛋白质含量不仅受基因型控制，同时还受环境的影响。土壤是影响小麦品质的重要因素之一，土壤类型、质地、营养元素以及盐分含量、pH值对小麦籽粒蛋白含量都有影响
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪氨酸激酶
试剂、试剂盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析缓冲液实验步骤1. 制备酸变性的烯醇化酶从兔肌肉中纯化的烯醇化酶通常以硫酸铵沉淀或者悬液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速离心 5 分钟。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES
蛋白质的微量测序分析实验2
测定N-末端封闭蛋白质的内部序列实验材料蛋白质试剂、试剂盒乙酸NaOH丽春红染料三氟乙酸仪器、耗材纤维素膜离心管滤膜实验步骤1. 电泳分离目标蛋白并转移到硝酸纤维素膜。 2. 将硝酸纤维素膜放入盛有50 ml 含0.1%丽春红S料的1%乙酸水溶液的经酸洗的petri 玻璃培养皿。轻轻摇动1 mi
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒HEPES-KOH 山梨醇
分析型蛋白质色谱仪类型
分析型蛋白质色谱仪类型有多种。1、按分离目的可分：分析型蛋白质化验室色谱仪和分析型蛋白质工业色谱仪。2、按分离原理可分：分析型蛋白质分配色谱仪、分析型蛋白质离子交换色谱仪和分析型蛋白质凝胶色谱仪。3、按色谱柱形状可分：填充柱分析型蛋白质色谱仪和毛细管柱分析型蛋白质色谱仪。4、按进样自动性可分：自动进
蛋白质的微量测序分析实验1
验材料蛋白质试剂、试剂盒凝胶缓冲液谷胱甘肽疏基乙酸考马斯亮蓝仪器、耗材电泳仪微量注射器实验步骤1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。4. 剩余的1×
关于蛋白质工程的结构分析
蛋白质工程的核心内容之一就是收集大量的蛋白质分子结构的信息，以便建立结构与功能之间关系的数据库，为蛋白质结构与功能之间关系的理论研究奠定基础。三维空间结构的测定是验证蛋白质设计的假设即证明是新结构改变了原有生物功能的必需手段。晶体学的技术在确定蛋白质结构方面有了很大发展，但是最明显的不足是需要分
质谱检测法与蛋白质分析
质谱分析法是蛋白质研究领域和生物大分子研究领域中最重要的分析技术。由于我们对蛋白质鉴定、定量和分析的要求越来越高，希望检测技术的灵敏度也越来越高，同时能够对更为复杂的样品进行分析处理，因此推动了质谱检测技术的发展，出现了一大批新兴的质谱分析方法和仪器。 在生命科学研究工作中有一个重要问
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒 HEPES-KOH山梨醇抗坏血酸维生素 C半胱氨酸PF-Percoll仪器、耗材 浓缩离心设备实验步骤 建议在短日照条件下培养材料以诱导营养生长，并在照光的早期收取材料以提高获得完整叶绿体的产率。所以试剂应在收集材料之前准备好，并连同其他一些设备，如离心机转头及离心管等在冰箱或冰上冷却
常规饲料分析测定粗蛋白质含量
常规饲料分析测定粗蛋白质，是用凯氏定氮法测出饲料样品中的氮含量后，用N×6.25计算粗蛋白质含量。6.25称为蛋白质的换算系数，代表饲料样品中粗蛋白质的平均含氮量为16%（100/16=6.25）。因此，一般测定粗蛋白质都用6.25进行计算。
lowry法测蛋白质含量误差分析
可能存在干扰物质，如还原物质、酚类、枸橼酸、硫酸铵等，详见药典四部0731蛋白质含量测定Lowry法中第二种方法，通过将蛋白质沉淀来去除干扰。
蛋白质如何通过电泳分析
将氨基酸样品和缓冲溶液置于凝胶上。然后电压施加到凝胶上。如果氨基酸的等电点低于缓冲液的pH值，它将变成带负电的。氨基酸会移向带相反电荷的电极，它们会根据分子量分离。氨基酸的位置可以通过染色来检测。然后测量氨基酸行进的距离并在标准中比较。 电泳仪电源KEEBIO-600N性能参数：1、 输出类型：恒压
蛋白质分析技术(Analytical－Techniques－for－Protein)2
二、透析和超滤1.透析（Dialysis）：就是利用蛋白质分子不能通过半透膜（Semipermeable membrane）而小分子可以自由透过的性质，使蛋白质与小分子物质分开。作用：脱盐、无机离子和小分子物质等。透析膜：动物膜、羊皮纸、火棉胶、赛璐玢或其他材料等。2.超滤（ultrafiltrat
分析型蛋白质色谱仪类型
分析型蛋白质色谱仪类型有多种。1、按分离目的可分：分析型蛋白质化验室色谱仪和分析型蛋白质工业色谱仪。2、按分离原理可分：分析型蛋白质分配色谱仪、分析型蛋白质离子交换色谱仪和分析型蛋白质凝胶色谱仪。3、按色谱柱形状可分：填充柱分析型蛋白质色谱仪和毛细管柱分析型蛋白质色谱仪。4、按进样自动性可分：自动进
蛋白质印迹法的结果分析
可能出现的问题如下。1．背景过高①封闭不充分，应更换封闭液或延长封闭时间；②抗体浓度过高，应适当增加抗体稀释倍数；③洗膜不充分，应增加洗涤次数或洗涤时间；④膜质量较差，应选择高质量的NC膜，并且整个实验过程中保持膜的湿润。1．背景高可能原因验证或解决办法膜没有完全均匀湿透使用100%甲醇浸膜5~10
蛋白质序列分析和结构预测实验
实验步骤 1. 人脂联素蛋白质序列的检索（1）调用Internet浏览器并在其地址栏输入Entrez网址（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez）；（2）在Search后的选择栏中选择protein；（3）在输入栏输入homo sapiens adiponectin；
蛋白质分析技术(Analytical－Techniques－for－Protein)1
第一节 蛋白质分离纯化与鉴定的基本原理一、蛋白质的理化性质（一）蛋白质的两性电离 pI：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为0，此时的溶液的pH称为~。 体内大多数蛋白质：pI≈pH 5.0。在pH 7.4，大多数蛋白质解离成阴离子。少数蛋白
蛋白质分析技术(Analytical－Techniques－for－Protein)3
六、SDS-PAGE1.SDS及SDS-PAGE（1）SDS：十二烷基硫酸钠（sodium decyl sulfate，SDS），一种阴离子去污剂，它能以一定的比例和蛋白质结合，形成一种SDS—protein的复合物。（2）SDS- PAGE：具有SDS的PAGE，分离SDS—protein复合物，