蛋白质分析技术(AnalyticalTechniquesforProtein)1
第一节 蛋白质分离纯化与鉴定的基本原理一、蛋白质的理化性质（一）蛋白质的两性电离 pI：当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为0，此时的溶液的pH称为~。 体内大多数蛋白质：pI≈pH 5.0。在pH 7.4，大多数蛋白质解离成阴离子。少数蛋白质为碱性蛋白质（如鱼精蛋白、组蛋白）和酸性蛋白（如胃蛋白酶和丝蛋白等）。 （二）蛋白质的胶体性质 1.蛋白质：生物大分子，MW：1~100万，大小：1~100nm 2.维持蛋白质胶体稳定因素 蛋白质亲水基团→吸收水分→水化膜 →防止蛋白质沉淀析出 蛋白质表面带有电荷→稳定胶体→防止蛋白质沉淀析出 （三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 1.蛋白质变性（denaturation） 2.蛋白质沉淀 （1）疏水测链暴露→蛋白质聚集→沉淀（变性） （2）等电点或去水化膜→蛋白质沉淀（非变性） 3.复性（re......阅读全文
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析—凝胶蛋白质激酶分析
试剂、试剂盒Tris-HClDTT盐酸胍尿素激酶分析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤1. 准备下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有试剂50 mmol/L Tris-HCl，室温（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 盐酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室温（p
蛋白质组和蛋白质组学分析
随着人类基因 组计划研究成果的公布，人们对基因的认识逐渐清晰，但基因数量的有限性和基因结构的相对稳定性，与生命现象的复杂性和多样性之间存在巨大反差。如何了解众多的基因与危害人类身心健康的疾病之间的关系，对生命科学研究者来说仍是一项长期而艰巨的任务。因此，作为生命活动的直接承担者――蛋白质，成为后基
蛋白质分离和分析——凝胶蛋白质染色
实验步骤 基 本 方 案 1 考马斯亮蓝染色检测范围为〇.3〜lMg 每蛋白质条带。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)聚丙烯酰胺凝胶（单 元 12. 3)考马斯亮蓝、银染用固定液考马斯亮蓝染液甲醇/乙酸脱色液7 % (V /V ) 水乙酸Whatman 3M M 滤 纸（可选）干 胶 仪（可选
蛋白质分离和分析
基 本 方 案 可 溶 性 或 膜 结 合 抗 原 的 分 离材 料抗 体（Ab)-Sepharose (单兀 12. 2)活 化 的（对照）Sepharose填料，用于制 备 A b -Sepharose填 料（单 元 12. 2)，但去除了抗体或偶联时用无关抗体替代细胞或匀浆的组织T S A 溶
蛋白质定量分析
实验概要Bradford 的dye-binding method 是利用Coomassie brilliant blue G-250 (CBG) 可与蛋白质结合而变色的特性来定量；若试样中的蛋白质量较多，则结合到蛋白质而变色的CBG 也多，因而呈色较深。本实验是以一组标准蛋白质为对象，制作一条
蛋白质浓度分析实验
BRADFORD分析（BIORAD) BCA分析(PIERCE) 三氯乙醇沉淀 实验材料 标准蛋白质
蛋白质浓度分析实验
BRADFORD分析（BIORAD)BCA分析(PIERCE)三氯乙醇沉淀实验材料标准蛋白质 试剂、试剂盒BSA
蛋白质浓度分析实验——BCA分析(PIERCE)
实验材料标准品仪器、耗材试管实验步骤1. 按标准 Bradford 法制备标准品。2. 取 50 份试剂 A 与 1 份试剂 B 混匀（在室温下至少稳定一天）。3. 分別吸取 100 μl 样品和标准品置各自试管。每个试管加 2 ml 试剂，混匀，在 37℃ 保温 30 分钟。4. 样品冷至室温，在
蛋白质浓度分析实验——BRADFORD分析（BIORAD)
实验材料标准蛋白质试剂、试剂盒BSA仪器、耗材干燥试管实验步骤一、标准 Bradford 分析1. 准备 3 份标准品（用水稀释），BSA 浓度为 0.2~0.9 mg/ml，IgG 浓度为 0.2~1.5 mg/ml。一般设定 4 个或 5 个浓度比较合适。如果样品中蛋白质浓度可能超过分析范围，那
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
试剂、试剂盒 ATP储存液实验步骤 一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合这两种溶液，测 pH 值。慢慢将
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
ATP储存液的配制 依赖环核苷酸的蛋白质激酶 蛋白质激酶C 酪蛋白激酶 酪氨酸激酶 凝胶蛋白质激酶分析
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
ATP储存液的配制依赖环核苷酸的蛋白质激酶蛋白质激酶C酪蛋白激酶酪氨酸激酶凝胶蛋白质激酶分析试剂、试剂盒ATP储存液 实验步骤一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—蛋白质激酶C
试剂、试剂盒PKC 分析缓冲液组蛋白 HI 储存液磷脂酰丝氨酸甘油二油酸脂实验步骤1. 在冰浴的离心管内配制如下 20 μl 反应混合物：5X PKC 分析缓冲液 4 μl10 mg/ml 组蛋白 HI 储存液
蛋白质分析的电子舌
电子鼻用于嗅出排放的废弃，帮助食物质量控制。少为人知的是相等的仪器电子舌可以识别溶解的物质。在《应用化学》（Angewandte Chemie）杂志上，来自法国的研究人员现在提交了一种新的特别简单的方法生成了一种能够区分蛋白质的电子舌。
蛋白质预测分析资料大全
蛋白质预测分析:物理性质预测：Compute PI/MW http://expaxy.hcuge.ch/ch2d/pi-tool.html Peptidemass http://expaxy.hcuge.ch/sprot/peptide-mass.html TGREASE ftp://ftp.vir
蛋白质纯度分析方法介绍
在评价样品纯度之前，首-先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。纯化过
蛋白质洗脱曲线的分析
从曲线中可以看出，几个蛋白质的峰值出现在11管、30管、37管、41管、76管，其中76管的峰值最大，而这几个峰值对应的NaCl的浓度在0.6-0.8之间，76管对应的是0.8.所谓出峰，就是蛋白含量相对较高。这个曲线告诉你，在NaCl的浓度在0.6-0.8时，蛋白质的含量较高，你可在对应的试管数收
蛋白质组学牛人利用新技术分析蛋白质图谱
蛋白质组(proteomics)分析是针对不同条件下细胞中蛋白的功能和特性进行研究的统称，这一领域的研究一直以来都落后于基因组研究，后者在技术创新方面取得了不少成果，一些令人眼花缭乱的快速基因组图谱绘制技术，还有无需借助核心实验室设备就能完成实验的技术，都令我们印象深刻。 但是与基因组研究
重组病毒的蛋白质分析实验
实验材料 Sf细胞试剂、试剂盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材 培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤 1. 接种2.5×108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中，27℃温育≥ 2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑的1 ml
细胞总蛋白质含量分析
实验步骤 展开
关于蛋白质组的研究分析
主要有两方面，一是结构蛋白质组学，二是功能蛋白质组学。其研究前沿大致分为三个方面： ① 针对有关基因组或转录组数据库的生物体或组织细胞，建立其蛋白质组或亚蛋白质组及其蛋白质组连锁群，即组成性蛋白质组学。 ② 以重要生命过程或人类重大疾病为对象，进行重要生理病理体系或过程的局部蛋白质组或比较蛋
蛋白质的微量测序分析实验
本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质的微量测序分析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 凝胶缓冲液谷胱甘肽疏基乙酸考马斯亮蓝仪器、耗材 电泳仪微量注射器实验步骤 1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。4.
蛋白质质谱分析具体流程
肽指纹图谱：每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段，这些肽段的质量（分子量）就是这个蛋白的肽指纹图。当一个未知蛋白被酶解，用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量。然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配。匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白。步骤：2DE 切
蛋白质组学质谱分析
Proteomics Primer1. Proteomics2. 2-D PAGE3. Immobilised pH gradients (IPGs)4. Mass spectrometry5. Principles of mass spectrometry6. Matrix assisted la
蛋白质序列分析和结构预测
【实验目的】1、掌握蛋白质序列检索的操作方法；2、熟悉蛋白质基本性质分析；3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白质功能预测，了解基于motif、 结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测；4、了解蛋白质结构预测。【实验内容】1、使用Entrez或SRS信息查询系统检索人脂联素 (adiponectin)
蛋白质序列分析和结构预测
【实验目的】 1、掌握蛋白质序列检索的操作方法； 2、熟悉蛋白质基本性质分析； 3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白质功能预测，了解基于motif、结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测； 4、了解蛋白质结构预测。【实验内容】 1、使用Entrez或SRS信息查询系统检索人脂联素（ad
蛋白质质谱分析具体流程
肽指纹图谱：每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段，这些肽段的质量（分子量）就是这个蛋白的肽指纹图。当一个未知蛋白被酶解，用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量。然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配。匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白。步骤：2DE 切
蛋白质的微量测序分析实验
基本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质
细胞总蛋白质含量分析
实验步骤 展开