Folin酚试剂法测定蛋白质含量
一、 目的 掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法,熟悉分光光度计的操作。 二、原理 Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin 试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便,灵敏度比双缩脲法高100 倍,定量范围为5~100μg 蛋白质。Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1.实验材料 绿豆芽下胚轴(也可用其它材料如面粉) 2.仪器 (1)722 型(或721 型)分光光度计 (2)4 000r/min 的离心机 (3)分析天平 (4)容量瓶(50......阅读全文
Folin酚试剂法测定蛋白质含量
一、 目的 掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法,熟悉分光光度计的操作。 二、原理 Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin 试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨
蛋白质含量的测定:Folin酚试剂法(Lowry法)和考马斯...
蛋白质含量的测定—Folin-酚试剂法(Lowry法)和考马斯亮蓝法 1.学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 2. 进一步掌握分光光度法——求标准曲线、准确测定未知样品、正确使用仪器。 原理 蛋白质浓度可以从它们
folin酚试剂法测定蛋白质含量的原理
此法的显色原理与双缩脲法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色(
folin酚试剂法测定蛋白质含量的注意事项
进行测定时,加Folin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定,但上述还原反应只在pH=10的情况下发生,故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前,还原反应即能发生。 此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。[1]
有哪些因素可干扰Folin酚测定蛋白质含量
酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)等溶液对显色无影响,但这些物质浓度高时,必须作校正曲线。含硫酸铵的溶液,只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液,
关于Folin酚法应用试剂的介绍
试剂 (1)试剂甲(A,B): (A) 10克 Na2CO3,2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)。溶解于500毫升蒸馏水中。 (B) 0.5克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸馏水中,每次使用前,将50份(A)与1份(B)混合,即为试剂甲。
Folin酚试剂法的优缺点有哪些
优点:灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多。缺点:费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰folin-酚反应(Lowry反应)。而且对后者的影响还要大得多。
福林酚试剂法如何测定蛋白质含量
lowry法一般测量含量少于5微克的物质,耗费时间长约40-60分钟.操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化,灵敏度高biuret法适用于1-20mg.用于快速测定.约20-30分钟,但不太灵敏;由于不同蛋白质显色相似,因此灵敏度比folin-酚试剂法差的很远
蛋白质含量测定实验——folin—酚试剂法
蛋白质含量测定实验可以用于:(1)测定蛋白质浓度;(2)检测所提取的蛋白质含量。实验方法原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即f
Folin酚法的实验所需试剂与器材
试剂(1)试剂甲(A,B):(A) 10克 Na2CO3,2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠 (KNaC4H4O6·4H2O)。溶解于500毫升蒸馏水中。(B) 0.5克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸馏水中,每次使用前,将50份(A)与1份(B)混合,即为试剂甲。(2)试剂乙:在
酚试剂(Lowry)法测血清蛋白质含量
一、 相关理论1、 血清(浆)蛋白质是血清(浆)固体成分中含量最多、组成复杂、功能广泛的一类化和物。2、 血清(浆)蛋白质的分类:目前已研究的有300 余种,已分离提纯的有100 余种,大部分在肝脏合成。1) 盐析法可将血浆蛋白分为白蛋白(Albumin, Alb 或A)和球蛋白(Globulin,
olin—酚试剂法(lowry法)测蛋白质含量
一、实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生
Folin酚法的实验原理
这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(可订购),逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是:在碱性条件
蛋白质的定量测定——福林酚法(Folin—酚试剂法)
实验原理 Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。以后在生物化学领域得到广泛的应用。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这个方法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时较
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定4
V 蛋白质含量测定一、双缩脲法测定蛋白质浓度(一)目的了解并掌握双缩脉法测定蛋白质浓度的原理和方法。(二)原理具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应,在碱性溶液中蛋白质与硫酸铜形成紫色络合物,在 540nm 处有最大吸收。在一定浓度的范围内,蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比,可用比色
鸭源性核酸PCR荧光探针试剂盒Folin-酚试剂法操作分析
一、鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒Folin-酚试剂法目前实验室较多用用Folin-酚法测定蛋白质含量,此法的特点是灵敏度高,较双缩脲高两个数量级,较紫外法略高,操作稍微麻烦,反应约在15分钟有zui大显色,并zui少可稳定几个小时,其不足之处是干扰因素较多,有较多种类的物质都会影响测定结果的准确
关于Folin酚法的相关介绍
Folin-酚法(Lowry法)最灵敏的蛋白质测定方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难,近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。
概述Folin酚法的实验原理
这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(可订购),逐渐被考马斯亮兰法所取代。 此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是:在
Folin酚法的用途和功效
Folin-酚法(Lowry法)最灵敏的蛋白质测定方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难,近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。
福林酚比色法原理
原理蛋白质与福林(Folin)-酚试剂反应,产生蓝色复合物。作用机理主要是蛋白质中的肽键与碱性铜盐产生双缩脲反应,同时也由于蛋白质中存在的酪氨酸与色氨酸同磷钼酸-磷钨酸试剂反应产生颜色。呈色强度与蛋白质含量成正比,是检测可溶性蛋白质含量最灵敏的经典方法之一。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法...1
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法和紫外吸收法原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA 与蛋白质解离,并除去蛋白质。除去蛋白质的方法主要有:(1)用氯仿-辛醇混合液剧烈振荡,使蛋白质变性。(2)在冷的2mol/L盐酸胍溶液
地衣酚显色法测定RNA含量
原理 核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他
Folin酚法的实验操作方法
标准曲线测定取16支大试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分成两组,分别加入0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升标准蛋白质溶液(浓度为250mg/L)。用水补足到1.0毫升,然后每支试管加入5毫升试剂甲,在旋涡混合器上迅速混合,于室温(20~25℃)放置10分钟。再逐管加入
福林酚法定量测定蛋白质
实验概要本实验用福林酚法(Folin—酚试剂法)测定了蛋白质的含量。实验原理Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。以后在生物化学领域得到广泛的应用。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏