地衣酚显色法测定RNA含量

原理 核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量,再计算出RNA含量 。 操作方法 一、RNA标准曲线的制定 取10支试管,分成2组,依次加入0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mLRNA标准溶液。分别加入蒸馏水使最终体积为2.5mL。另取2支试管,各加入2.5mL水作为对照。然后各加入2.5mL地衣酚试剂。混匀后,于沸水浴内加热20分钟。取出冷却(自来水中)。于670nm波长处测定光吸收值。取两管平均值,以RNA浓度为横坐标,光吸收值为纵......阅读全文

地衣酚显色法测定RNA含量

原理 核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他

地衣酚显色法测定RNA含量实验原理和操作步骤

【实验原理】 RNA与浓盐酸共热时发生降解,产生的戊糖又可转变为糠醛,在FeCl3或CuCl2催化下,糠醛与地衣酚(3,5—二羟基甲苯)反应形成绿色复合物,该产物在670nm处有最大吸收。当RNA浓度为20μg/m1~250μg/m1时,吸光度与 RNA浓度成正比。 【实验材料】

酵母RNA的提取及含量测定(地衣酚显色法)

一、实验目的  (1)熟悉酵母RNA的提取方法(2)掌握地衣酚显色法测定酵母RNA含量的原理和方法二、实验原理  RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3, 5-二羟甲苯反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20-25

核酸的定量测定实验——地衣酚显色法

实验方法原理RNA 与浓盐酸共热时发生降解, 产生的核糖又可转变为糖醛, 在FaCl3 或CuCl2催化下, 糖醛与3 , 5-二羟基甲苯( 地衣酚、苔黑酚)反应形成绿色复合物, 该产物在670 nm 处有最大吸收。当RNA 浓度为20~250 μg/ ml 时光密度与RNA 浓度成正比。实验材料蛋

动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法和...

动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法和紫外吸收法[附2]二苯胺显色法测定DNA含量原理脱氧核糖核酸中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺试剂一起加热产生蓝色反应,在595nm处有最大光吸收。 DNA在40-400 g范围内,光吸收与DNA的浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛,可以

动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定2

试剂和器材试剂1.DNA标准溶液(须经定磷确定其纯度):取小牛胸腺DNA钠盐以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成200 µg/mL的溶液。2.样品待测液:准确称取DNA干燥制品以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成100 µg/mL左右的溶液。在测定RNA制品中的DNA含量时,要求RNA制品的每mL待

化学法测定DNA的含量——二苯胺显色法

(一)原理DNA 在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质,在595nm 波长处有最大吸收。DNA 在40-400μg 范围内,光吸收与DNA的浓度

化学法测定DNA的含量——二苯胺显色法

            实验方法原理 DNA 在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质,在595nm 波长处有最大吸收

化学法测定DNA的含量——二苯胺显色法

化学法测定DNA含量可以用于:(1)转化、转染之前的质粒浓度估测;(2)对获取的DNA含量进行检测。实验方法原理DNA 在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质

茚三酮显色法测定壳聚糖含量介绍

  壳聚糖是甲壳素的脱乙酰基衍生物,是一种分子量较大的碱性多糖。由于分子间和分子内强烈的氢键作用,壳聚糖在水及大多数溶剂中的溶解性较差,可溶于醋酸等无机酸的稀溶液中。壳聚糖及其衍生物具有较强的生物活性,具有抗肿瘤、抗凝血、抗血栓、降血脂和增强免疫力等功能。壳聚糖还具有良好的生物降解性和生物相容性,被

茚三酮显色法测定壳聚糖含量介绍

壳聚糖是甲壳素的脱乙酰基衍生物,是一种分子量较大的碱性多糖。由于分子间和分子内强烈的氢键作用,壳聚糖在水及大多数溶剂中的溶解性较差,可溶于醋酸等无机酸的稀溶液中。壳聚糖及其衍生物具有较强的生物活性,具有抗肿瘤、抗凝血、抗血栓、降血脂和增强免疫力等功能。壳聚糖还具有良好的生物降解性和生物相容性,被广泛

动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法...1

动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法和紫外吸收法原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA 与蛋白质解离,并除去蛋白质。除去蛋白质的方法主要有:(1)用氯仿-辛醇混合液剧烈振荡,使蛋白质变性。(2)在冷的2mol/L盐酸胍溶液

动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定1

原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA与蛋白质解离,并除去蛋白质。除去蛋白质的方法主要有:(1)用氯仿-辛醇混合液剧烈振荡,使蛋白质变性。(2)在冷的2mol/L盐酸胍溶液中沉淀RNA,大部分蛋白质仍处于溶解状态。(3)以去污剂如十二烷基硫

兔肝RNA的制备及测定

实验原理: 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分离制备RNA  时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备方法各异,一般常用的方法有,盐酸胍法,去污剂法和苯酚法。其中,以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高,适

兔肝RNA的制备及测定实验原理和操作步骤

实验原理细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分离制备RNA 时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备方法各异,一般常用的方法有,盐酸胍法,去污剂法和苯酚法。其中,以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高,适合

Folin酚试剂法测定蛋白质含量

一、 目的 掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法,熟悉分光光度计的操作。 二、原理 Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin 试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨

folin酚试剂法测定蛋白质含量的原理

  此法的显色原理与双缩脲法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色(

RNA-酚污染-怎么避免

如果是酚污染:加200氯仿抽提离心得到上清后再加等体积的氯仿(400-500)抽提一次。 问题是不知道是不是酚污染而造成在270吸光值.....西瓜(站内联系TA)加了氯仿抽提之后,吸上清不要贪多。RNA要的是纯度,浓度一般不成问题。碰到下层就会有酚的污染。 再有就是用酒精漂洗的时候,尽量让沉淀块整

folin酚试剂法测定蛋白质含量的注意事项

  进行测定时,加Folin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定,但上述还原反应只在pH=10的情况下发生,故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前,还原反应即能发生。  此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。[1]

酚/SDS法制备植物RNA

试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液TLE 缓冲液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 处理)乙酸钠 (DEPC 处理) 无水乙醇DEPC 处理水仪器、耗材 Folytron 匀浆器(BrinkmarmPT10 35)实验步骤 一 材料与设备1) 液氮2) 研磨缓冲液 18mol/LTris,0.09m

酚/SDS法制备植物RNA

            试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液 TLE 缓冲液平衡酚) 氯仿 IiCl 溶液 (DEPC 处理) 乙酸钠 (DEPC 处理)

高效液相色谱法测定硫磺霜中间苯二酚的含量

  硫磺霜由间苯二酚、升华硫、甘油等成分组成。主要用于治疗体癣、脂溢性皮炎等。原标准中无间苯二酚的含量测定方法,为了更好地控制药品质量,本实验建立了高效液相色谱法测定硫磺霜中间苯二酚含量的新方法。   1、仪器与试剂   SSISPC3000高效液相色谱仪;梅特勒百万分之一天平(AG13

高效液相色谱法测定硫磺霜中间苯二酚的含量

硫磺霜由间苯二酚、升华硫、甘油等成分组成。主要用于治疗体癣、脂溢性皮炎等。原标准中无间苯二酚的含量测定方法,为了更好地控制药品质量,本实验建立了高效液相色谱法测定硫磺霜中间苯二酚含量的新方法。 1、仪器与试剂 SSISPC3000高效液相色谱仪;梅特勒百万分之一天平(AG135)。硫磺霜本院自制制剂

核糖核酸的测定

【实验原理】RNA分子中的核糖在浓酸中加热,脱水转变成糖醛,后者在氯化铁存在下,与地衣酚试剂(3,5-二羟基甲苯)反应,缩合成绿色化合物,在670nm处有最大吸收峰,从而可进行定量测定。待测样品中的RNA浓度在20~200µg/mL之间时,其吸光度与浓度成正比。反应式如下:核 糖 糖 醛 绿色化合物

推荐一些面粉品质分析的化学方法

以下是一些用于面粉品质分析的化学方法:一、蛋白质含量测定凯氏定氮法:样品消化:准确称取一定量的面粉样品放入凯氏烧瓶中,加入浓硫酸和催化剂(如硫酸铜和硫酸钾),加热消化至溶液呈透明的蓝绿色。蒸馏:消化液冷却后,加入过量的氢氧化钠溶液,进行蒸馏,使氨逸出并被吸收在硼酸溶液中。滴定:用标准盐酸溶液滴定吸收

麝香草酚分光光度法测定硝酸根的含量

1.0原理 硝酸盐的麝香草酚在浓硫酸溶液中形成硝基化合物,在碱性溶液中发生分子重排,生成黄色化合物,比色测定。 2.0试剂 2.1氨水(ρ20=0.88g/ml)。 2.2乙酸溶液(1+4)。 2.3氨基磺酸铵溶液(20g/L):称取2.0g氨基磺酸铵(NH4SO3NH2)

细胞RNA含量检测

细胞RNA含量检测             实验步骤        

细胞RNA含量检测

实验步骤展开

细胞RNA含量检测

实验步骤             展开

2.2.1-酚/SDS法制备植物RNA

酚/SDS法比较适合于从RNA含量较丰富.易提取的植物材料中制备RNA试剂、试剂盒液氮研磨缓冲液TLE 缓冲液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 处理)乙酸钠 (DEPC 处理)无水乙醇DEPC 处理水仪器、耗材Folytron 匀浆器(BrinkmarmPT10 35)实验步骤一 材料与设备1