常用酶的配制
实验概要常用酶的配制实验步骤1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。2．蛋白水解酶类 a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。 c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2 结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去......阅读全文
常用酶的配制
实验概要常用酶的配制实验步骤1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。2．蛋白水解酶类 a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b：自消化可消除DN
常用酶的配制
1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2．蛋白水解酶类 贮存液 贮存温度 反应浓度 反应缓冲液 温度 预处理 0.01mol/L Tris(pH7.8)
常用的酶和常用的底物有哪些？
常用的酶1.辣根过氧化物酶（HRP）：目前酶联免疫吸附试验中应用最广泛的标记用酶。由无色的糖蛋白（主酶）和亚铁血红蛋白（辅基）结合而成的复合物。辅基是酶活性基团，而主酶则与酶活性无关，HRP的纯度用RZ（HRP分别在403nm和275nm处的吸光度比值）表示，RZ值应大于3.0。RZ值仅说明血红素基
常用酶标记法介绍
酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ， 取出
常用的酶有哪些？
常用的酶有：1.辣根过氧化物酶（HRP）： 目前酶联免疫吸附试验中应用最广泛的标记用酶。由无色的糖蛋白(主酶)和亚铁血红蛋白(辅基)结合而成的复合物。辅基是酶活性基团，而主酶则与酶活性无关，HRP的纯度用RZ(HRP分别在403nm和275nm处的吸光度比值)表示，RZ值应大于3.0 。RZ值仅说明
免疫酶技术中常用的酶底物系统
各种免疫酶技术,最终都是以某种显色反应而揭示待测物质来进行定性和定量分析。不同酶要选择相应的底物,见下表。免疫酶技术中常用的酶-底物系统酶底物显色反应测定波长/nm辣根过氧化物酶二氨基联苯胺深褐色沉淀5-氨基水杨酸棕色449邻苯二胺橘红色492/460邻联甲苯胺蓝色4254-硝基酚磷酸黄色400碱性
酶活力测定常用的方法
酶活力测定常用的方法有终点法和动力学方法两类。终点法测定完成一定量反应所需的时间，如α-淀粉酶的活力测定。因为碘对淀粉呈现蓝色反应，当淀粉溶液中加入淀粉酶后，碘的蓝色反应消失而呈现红棕色;碘对淀粉颜色反应消失的时间可表示淀粉酶活力的大小。碘对淀粉颜色反应消失花的时间越短，表示酶的活力越高。动力学方法
常用果胶酶纯化方法
常用果胶酶纯化方法有：硫酸铵沉淀、丙酮沉淀、离子交换层析以及凝胶过滤色谱等。
酶最常用的纯化方法介绍
酶的纯化属于一种后处理工艺，包括粗制工艺与精制工艺，对超酶液进行浓缩精制是生产高质量酶制剂的重要环节。其提纯手段一般是依据酶的分析大小、形状、电荷性质、溶解度、专一结合位点等性质而建立。要得到纯酶,一般需要将各种方法联合使用。最常用的纯化方法有根据溶解度特性的沉淀法;根据电荷极性的离子交换层析、等电
常用血清酶和同工酶测定有哪些？
1.连续监测法测定血清肌酸激酶（CK）2.连续监测法测定乳酸脱氢酶（LD）总活性3.连续监测法测定血清（天）门冬氨酸氨基转移酶（AST）4.连续监测法测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）5.连续监测法测定血清碱性磷酸酶（ALP）6.连续监测法测定血清中谷氨酰基转移酶（GGT）7.淀粉酶（AMY）测定8
临床常用血清酶同工酶及其亚型分析
临床上可根据酶浓度的变化用以辅助诊断。若酶浓度变化由细胞坏死或细胞膜通透性变化引起，表示脏器或组织损伤；若为细胞内酶合成增加所致，提示组织再生、修复、成骨或异位分泌，或提示有恶性肿瘤的可能；若为酶排泄障碍引起者说明有梗阻存在。同工酶的分析与鉴定则能反应疾病的部位、性质和程度。一、转氨酶及其同
临床常用血清酶同工酶及其亚型分析
临床上可根据酶浓度的变化用以辅助诊断。若酶浓度变化由细胞坏死或细胞膜通透性变化引起，表示脏器或组织损伤；若为细胞内酶合成增加所致，提示组织再生、修复、成骨或异位分泌，或提示有恶性肿瘤的可能；若为酶排泄障碍引起者说明有梗阻存在。同工酶的分析与鉴定则能反应疾病的部位、性质和程度。一、转氨酶及其同
临床常用血清酶同工酶及其亚型分析(2)
二、γ-谷氨酰转移酶及其同工酶（一）生物化学特征g-谷氨酰转移酶（γ-GT或GGT）又称γ-谷氨酰转肽酶（γ-GTP或GGTP），是一种含巯基的线粒体酶。组织分布以肾脏含量最多，其次为胰、肺、肝等。血清中的γ-GT则主要来自肝胆，红细胞中几乎无γ-GT，因此溶血对其测定影响不大。（二）测定方法目前国
临床常用血清酶同工酶及其亚型分析(3)
（三）测定方法目前根据LD催化反应方向的不同，有两大类测LD方法，一大类为以丙酮酸为底物（反应方向P®L）的逆向反应（称LD-P法）；另一大类以乳酸为底物（反应方向L®P）的顺向反应（称LD-L法）。临床上测定LD及其同工酶常用于诊断和鉴别诊断心、肝和骨骼肌的疾病。LD同工酶测定常用电泳法、免疫沉淀
有哪些常用的细胞解离酶？
以下是一些常用的细胞解离酶：胶原酶（Collagenase）主要用于消化细胞外基质中的胶原蛋白，常用于解离实体组织，如肝脏、心脏、肺等。胰蛋白酶（Trypsin）常用于消化细胞间连接，使细胞彼此分离，适用于上皮细胞、成纤维细胞等的解离。木瓜蛋白酶（Papain）可用于多种组织和细胞的解离，如神经组织
基因工程常用的工具酶2
①增加限制酶的用量，平均每微克底物DNA可高达10单位甚至更多。②增加酶反应体系的体积，以使潜在的抑制物被相应的稀释。③延长酶解反应的保温时间。④向反应体系中添加亚精胺（spermidine）（终浓度为1~2.5mmol/L），亚精胺与负电性的杂质结合。注意，亚精胺在4℃时会沉淀DNA，因此最好在反
基因工程常用的工具酶1
一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）1．定义：凡能识别和切割双链DNA分子内特定核苷酸序列的酶，也称为限制酶（restriction enzyme，RE）。2．类型：来自原核生物，有三种类型。Ⅰ型：兼具甲基化修饰和ATP参与的核酸内切酶活性，随机切割。Ⅱ型：大多能
酶活性测定法的常用方法介绍
常用的测定方法有取样法和连续法。 取样法是在酶反应开始后不同的时间，从反应系统中取出一定量的反应液，并用适当方法停止其反应，再根据产物和底物在化学性质上的差别进行分析，求得单位时间内酶促反应的变化量。 连续法则是基于底物和产物在物理化学性质上的不同，在反应过程中对反应系统添加酶的变性剂以终止
常用的转换酶抑制剂有哪些
第一代转换酶抑制剂为卡托普利，是最早应用于临床的转换酶抑制剂，现已广泛应用于高血压和心衰的治疗。对轻、中度高血压均适用。用于降压时，开始剂量 12.5～25mg，每日 3 次口服，有效剂量为每日 50～ 150mg。加用利尿剂（如双氢克尿噻）、 β受体阻滞剂（如普萘洛尔、美托洛尔等），疗效更佳。本品
常用于焙烤食品中酶有哪些？
淀粉酶、B一淀粉酶、葡萄糖氧化酶、蛋白酶、半纤维素酶、巯基氧化酶和脂肪氧化酶等，最常用于面包改良剂的为 一淀粉酶和蛋白酶。 一淀粉酶是在面粉自身的 一淀粉酶活力低时添加，提高面粉的烘烤品质。它可使面团在醒发时连续不断地生成糊精和麦芽糖，继而转化为葡萄糖，作为发酵时酵母的来源。另外还可以改善操作性能，
酶免疫技术常用的底物知识点小结
1.HRP的底物 作为供氢体的底物化合物较多，常用的有以下几种：（1）邻苯二胺（OPD）：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。OPD是ELISA中应用最早的底物，但其应用液稳定性差，易变色，需新
酶的生产中通常用什么方法去除杂质？
酶提取液中常含有杂蛋白、多糖、脂类及核酸等杂质，可用下述方法去除：调PH和加热法：利用蛋白质对酸、碱和热变性方面性质的差异，可去除非活性杂蛋白。如制备脂肪酶时，在pH 3-4时以400℃温度加热150 min，淀粉酶活力可丧失90%而被除去，而脂肪酶活力仍保持80％以上。蛋白质表面变性法：蛋白质表面
酶的生产中通常用什么方法去除杂质？
酶提取液中常含有杂蛋白、多糖、脂类及核酸等杂质，可用下述方法去除：调PH和加热法：利用蛋白质对酸、碱和热变性方面性质的差异，可去除非活性杂蛋白。如制备脂肪酶时，在pH 3-4时以400℃温度加热150 min，淀粉酶活力可丧失90%而被除去，而脂肪酶活力仍保持80％以上。蛋白质表面变性法：蛋白质表面
酶免疫技术常用的底物知识点小结
1.HRP的底物 作为供氢体的底物化合物较多，常用的有以下几种： （1）邻苯二胺（OPD）：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。OPD是ELISA中应用最早的底物，但其应用液稳定性差，易
细胞组织消化常用的几种酶的选择
直接从生物体获取的组织，一般需要将其消化成单个细胞才能进行体外培养。这种直接从离体组织获得的细胞，更接近于生物体内的生活状态，且生物性状尚未发生很大改变，因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多领域备受欢迎。但组织消化过程中常遇到多种问题，例如消化不完全、细胞死亡率高等。如何克服这些问题
酶免疫技术常用的底物知识点小结
1.HRP的底物 作为供氢体的底物化合物较多，常用的有以下几种： （1）邻苯二胺（OPD）：OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。OPD是ELISA中应用最早的底物，但其应用液稳定性差，易
抗坏血酸氧化酶活性常用的测定方法
酶活性以酶活单位(酶活单位为lmin氧化1 g还原性抗坏血酸的酶量)表示,即酶活单位/g鲜重。常用的测定方法是碘量法,这是一种经典的方法,所用仪器简单,准确性高；二是分光光度法,这种方法灵敏度和准确性高,重演性好,用途广,选择性好；三是氧电极分析法,该法灵敏度高,准确性好,但是氧电极对温度变化非
胰腺酶和胰外分泌功能检测常用的实验
（1）血清淀粉酶、尿淀粉酶、淀粉酶同工酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定。（2）粪便中氮、脂肪、胰酶等检测。（3）十二指肠内容物检查。（4）促胰酶素－促胰液素试验（P－Stest）。（5）对氨基苯甲酸试验（Bz－Ty－PABA实验）和荧光素试验。实际应用最多的还是血清酶和尿酶的检查。胰腺有很大的储备、代偿
胰腺酶和胰外分泌功能检测常用的实验
（1）血清淀粉酶、尿淀粉酶、淀粉酶同工酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定。（2）粪便中氮、脂肪、胰酶等检测。（3）十二指肠内容物检查。（4）促胰酶素－促胰液素试验（P－Stest）。（5）对氨基苯甲酸试验（Bz－Ty－PABA实验）和荧光素试验。实际应用最多的还是血清酶和尿酶的检查。胰腺有很大的储备、代偿
蛋白质提取过程中常用蛋白酶和磷酸酶抑制介绍
在与蛋白相关的检测中，zui关键的一步便是蛋白质的提取。在提取的过程中，我们要经常加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的。 本文详细总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF、Leupeptin亮肽素、Aprotinin抑肽酶、Pepsta