SouthernBlotting实验原理、操作步骤和注意事项1
对于大的基因组，DNA酶切图谱凭肉眼是分辨不开的（EB染色），因为大小不等的分子呈现弥散分布，只有借助灵敏的放射性同位素（或其他化学发光物质），将靶DNA在凝胶上（膜上）的带型通过特定的探针与之杂交，转换成X光片上直观的带型，才能进行相关分析。另外如果需要鉴定或寻找与已知DNA同源的 DNA片段如：染色体步查、基因组文库的评价和利用、阳性克隆的分析鉴定、转基因拷贝数分析等也都需进行DNA的分子杂交实验。 实验目的： 掌握同位素的操作及防护方法；掌握预杂交、探针的标记及分子杂交技术 实验原理： 依据碱基配对原则，用放射性同位素标记的DNA探针，与固着在膜上的靶DNA杂交，经放射自显影，确定靶DNA的位置。 1．预杂交：膜上有许多没有结合DNA分子的地方，若不在杂交前用一些封闭剂结合位点，加入探针后，探针DNA分子将会结合在这些位点上，导致杂交背景深，预杂交的目的是用非特异性DNA分子（鲑精DNA）及其它高分......阅读全文
间接法的原理和操作步骤
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺
分子标记—AFLP原理和操作步骤
实验方法原理 AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后
溶菌酶（lysozyme）的制备及其性质实验原理和操作(1)
【实验内容】 1.溶菌酶Y活性检测 ⑴ 酶活力测定方法 ⑵ 酶活力单位定义 ⑶ 比活力定义 ⑷ 蛋白含量测定方法 2. 蛋清溶菌酶的提取 ⑴ 每组4～5个新鲜鸡蛋 ⑵ 利用等电点沉淀及树脂层析等方法进行溶菌酶提取 3. 溶菌酶的分离、纯化 ⑴ 利用
免疫印迹法实验的操作步骤和注意事项
操作步骤 一蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000r离心15min。取上清液作为样品。 二电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。 三转移：（半干式转移） 1、电泳结束后将胶条
兔肝RNA的制备及测定实验原理和操作步骤
实验原理细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA 时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。其中，以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高，适合
聚合酶链反应[PCR]实验原理和操作步骤(2)
【实验目的】了解聚合酶链反应（PCR）的基本原理及其影响因素，掌握PCR的基本操作过程。[仪器]PCR仪、台式离心机、电泳仪、电泳槽、紫外检测仪[试剂]1、引物：用去离子水配成10 μmol /μL。2、Taq聚合酶3、10×PCR反应缓冲液（加镁离子）4、dNTPs：四种核苷酸混合物，浓度为10m
PCR扩增DNA（PCR－Amplify－DNA）实验原理、材料和操作步骤
【实验原理】聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是一种体外 DNA扩增技术，1985年由Mullis等人创立。该技术能在几小时的实验操作中，将人为选定的一段DNA扩增几百万倍，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等优点，目前已成为分子生物学及基因工程中极为
elisa的原理和实验步骤
ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
elisa的原理和实验步骤
ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与
elisa的原理和实验步骤
1. ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗
Southern－杂交技术1
Southern技术是指以Southern名字命名的DNA转移杂交技术。它可用于基因组特定DNA序列的定位，可以测定相关片段的同源性、可以从c库、基因组文库中筛选完整基因等。用一种或多种限制性内切酶对基因组DNA加以切割，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段，随后，使DNA在原位变性，并从凝胶转移至固相膜
PI单染色法原理、试剂、操作步骤和注意事项
PI单染色法原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性。PI介绍荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidi
Western印迹法（试剂配制和操作步骤）1
这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。仪器：高压锅、玻
Southern－Blot－实验流程（包括原理/细节）3
3）杂交：排尽预杂交液，在8.0ml 新Hyb 高效杂交液（Hyb-100）加入4.0μl 新变性好的探针(1-3ul/膜，5-20ng/ml杂交液)，混匀。65℃杂交仪中杂交过夜（8-15转/分）。4）杂交完成后，将杂交液回收置于一可耐低温又可耐沸水浴的管中，贮存于-70℃以备重复使用。重复使用时
Southern－Blot－实验流程（包括原理/细节）2
）标记探针检测取标记产物和普通PCR扩增产物各1μl，1.0%的琼脂糖凝胶电泳。由于大分子量的DIG掺入，标记产物泳动速度比普通PCR产物要慢。所以根据电泳图就可以判断是否标记上和有没有非特异标记！其余标记产物-20℃保存。如果要准确检测标记效率（一般不必），取标记产物1μl和Dig标记的对照DNA
Western－blot实验步骤及注意事项1
一.实验步骤1. 组织块称重2. 利用液氮、研钵粉碎组织块3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PM
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤
一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。本实验学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。 二、实验原理 琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在
细胞膜的通透性观察实验原理和操作步骤
一、实验目的1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。2.了解溶血现象及其发生机制。 二、实验原理 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞
地衣酚显色法测定RNA含量实验原理和操作步骤
【实验原理】 RNA与浓盐酸共热时发生降解，产生的戊糖又可转变为糠醛，在FeCl3或CuCl2催化下，糠醛与地衣酚（3,5—二羟基甲苯）反应形成绿色复合物，该产物在670nm处有最大吸收。当RNA浓度为20μg／m1~250μg／m1时，吸光度与 RNA浓度成正比。 【实验材料】
熔点仪的工作原理和操作步骤
工作原理 熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的，该仪器利用电子技术实现温度程控，初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件，并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管，通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化
熔点仪的工作原理和操作步骤
工作原理 熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的，该仪器利用电子技术实现温度程控，初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件，并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管，通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化
分子标记方法：AFLP原理和操作步骤
AFLP原理：AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘
熔点仪的工作原理和操作步骤
工作原理 熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的，该仪器利用电子技术实现温度程控，初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件，并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管，通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化过程，清
RtPCR实验准备及与操作步骤1
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP 管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）1个125m
Southern－印迹实验
实验方法原理 本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设计的，稍作修改后同样可用于硝酸纤维素膜方法。实验材料 DNA试剂、试剂盒 HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙锭仪器、耗材 电泳仪紫外透射仪实验步骤 一、向上毛细管转移法的转移叠层系统：：图一、向上毛细管转移法的转移
Southern－blot实验
Southern blot可应用于：（1）检测重组DNA；（2）分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段；（3）验证检测片段的分子量大小。实验方法原理具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶
Southern－blot实验
实验方法原理 具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线