地衣酚显色法测定RNA含量实验原理和操作步骤
【实验原理】 RNA与浓盐酸共热时发生降解,产生的戊糖又可转变为糠醛,在FeCl3或CuCl2催化下,糠醛与地衣酚(3,5—二羟基甲苯)反应形成绿色复合物,该产物在670nm处有最大吸收。当RNA浓度为20μg/m1~250μg/m1时,吸光度与 RNA浓度成正比。 【实验材料】 1.实验器材 恒温水浴,721分光光度计。 2.实验试剂 (1)RNA标准液:称取10mgRNA(需先定磷确定其纯度)用少量水溶解(若不溶可用2mol/L NaOH溶液调至pH7.0),定容至100m1,浓度为100µg/ml。 (2) RNA样品液:用上述实验方法提取的RNA样品 (3) 地衣酚试剂:取0.1g地衣酚溶于100ml浓盐酸,再加入0.1gFeCl3·6H20。该溶液使用前新鲜配制。 【实验操作】 1.标准曲线的绘制 取干燥试管6支,编号,按表所示加入试剂。 ......阅读全文
细胞RNA含量检测
细胞RNA含量检测 实验步骤
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如何测量RNA的纯度和含量
RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢,因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。RNA-seq即转录组测序
细胞RNA含量样品的制备及分析
实验材料单细胞悬液试剂、试剂盒PY 试剂醋酸缓冲液磷酸缓冲液DNA 酶消化液实验步骤一、试剂配制1. PY 试剂的配制:PY 1.0 g 以 100 ml 蒸馏水溶解,配成母液,置 4℃ 冰箱保存。PY 工作液:取 1 ml PY 母液,加入 1 mol/L pH 4.7 的醋酸缓冲液 100 ml
细胞RNA含量样品的制备及分析
实验材料 单细胞悬液 试剂、试剂盒 PY 试剂 醋酸缓冲液 磷酸缓冲液 DNA
动物总RNA的提取及含量测定
一、实验目的(1)了解制备RNA几种方法的原理及优缺点(2)掌握稀碱法提取兔肝RNA的原理和操作技术二、实验原理 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分离制备RNA时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备
细胞RNA含量样品的制备及分析
细胞RNA含量样品的制备及分析 实验材料 单细胞悬液 试剂、试剂
细胞RNA-含量样品的制备及分析
实验材料 单细胞悬液试剂、试剂盒 PY 试剂醋酸缓冲液磷酸缓冲液DNA 酶消化液实验步骤 一、试剂配制1. PY 试剂的配制:PY 1.0 g 以 100 ml 蒸馏水溶解,配成母液,置 4℃ 冰箱保存。PY 工作液:取 1 ml PY 母液,加入 1 mol/L pH 4.7 的醋酸缓冲液 100
地衣酚显色法测定RNA含量
原理 核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他
酵母RNA的提取及含量测定(地衣酚显色法)
一、实验目的 (1)熟悉酵母RNA的提取方法(2)掌握地衣酚显色法测定酵母RNA含量的原理和方法二、实验原理 RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3, 5-二羟甲苯反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20-25
地衣酚显色法测定RNA含量实验原理和操作步骤
【实验原理】 RNA与浓盐酸共热时发生降解,产生的戊糖又可转变为糠醛,在FeCl3或CuCl2催化下,糠醛与地衣酚(3,5—二羟基甲苯)反应形成绿色复合物,该产物在670nm处有最大吸收。当RNA浓度为20μg/m1~250μg/m1时,吸光度与 RNA浓度成正比。 【实验材料】
RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(2)
早期的 RNAi 技术可用在研究与胚胎发育相关基因的功能上,但是由于细胞分裂造成 dsRNA 的稀释,使得这种方法在研究成体的基因功能时有一定的局限性。为弥补早期 RNAi 技术的不足,Tavernarakis 等将 RNAi 技术做了一些改进及更动,将目的基因之标的序列以反向重复的方式,由
RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(1)
基因沉默(gene silencing)是生物体内特定基因由于种种原因不表达的遗传现象。一方面,基因沉默是生物遗传操作创造新的遗传修饰生物(genetically modified organisms)的障碍,另一方面,它又是植物抵抗外来核酸入侵(如病毒)的一种反应,为植物抗病毒的遗传育
RNA提取时RNA降解原因
1 ) 新鲜细胞: 裂解液的量不足,使得裂解不充分。 2 ) 新鲜组织: 某些含有内源性核酸酶的样品,很难避免RNA酶的降解,建议采用的方法为在液氮条件下将组织研碎,并且,匀浆时采用更多的裂解液。 3 ) 冷冻样品: 样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存
RNA干扰技术(RNA-interference,RNAi)
1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果
RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后
RNA干扰相关知识RNARITS)
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing(RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA干扰相关知识RNARISC
RNA-induced silencing complex(RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。
反义技术——RNA干扰(RNA-interference,RNAi)
最近由于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA干扰是由长的双链 RNA
RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液,用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀,每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚,充分混匀,于 60
RNA标记
RNA labeling (Amersham Pharmacia)For the generation of radiolabelled, single stranded RNA for use as hybridization probes 32P-pCp 3' End-labeling
RNA电泳
RNA Gel (Crawford Lab)Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis.Northern Gel and TransferUsing glyoxal
RNA提取
RNA提取(主要内容如下)Tips for Handing RNA Total RNA IsolationmRNA IsolationrRNA IsolationOthersQ & A posted in the Method Forum Basic Procedures for Handing
指导RNA
中文名称指导RNA英文名称guide RNA;gRNA定 义一种小分子RNA,约含60~80个核苷酸,在RNA编辑中起模板作用。其功能是提供核苷酸插入或删除的信息。由小环DNA及大环DNA编码的指导RNA均带有编辑区的序列信息,可介导编辑过程。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调
Quantitating-RNA
RNA quantitation is an important and necessary step prior to most RNA analysis methods. Here we discuss three common methods used to quantitate RNA an
RNA标记
RNA标记是将标记物(如放射性同位素、荧光素或酶)共价地连接到RNA,通过检测标记物,进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛,在疾病诊断方面也很有前景。 理想的RNA标记方法应符合以下要求: 1. 操作简单,灵敏度高 2. 不影响碱基配对的特异性 3. 不影响RN
RNA降解
新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如 果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。 2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是:在液氮条件下将组织
RNA电泳
· RNA Gel (Crawford Lab)· Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis. · Northern
RNA-剪接
中文名称RNA 剪接英文名称RNA splicing定 义在真核细胞核中从RNA初始转录物切除内含子,连接外显子形成成熟的mRNA的过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞遗传(二级学科)