间接免疫荧光和直接免疫荧光染色方法的异同
免疫荧光细胞化学方法的原理是根据抗原抗体反应的规律，把已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或抗体，然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。方法具体种类有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下，根据其形成复合物所发的荧光，来确定判断检测物的来源、性质和部位。 1、直接法：这是最早的方法。其基本原理是用已知的抗体标记上荧光素后成为特异性荧光抗体，染色时将该抗体直接滴在载玻片上进行孵育，使之直接与载玻片上的抗原结合，在荧光显微镜下直接观察，作出判断。该方法评价：简单易行、特异性高、快速方便，常用于肾活检组织几种免疫球蛋白的检测和病原体的检测。但其不足是只能检测相应的一种物质，敏感性较差，效果有时不理想，目前较少作为更多方面的检测。 2、间接法：该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体，与前面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发......阅读全文
小鼠载脂蛋白EELISA试剂盒的间接法
双抗原夹心法的反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的
免疫金组织化学染色实验——IGS－间接法
实验方法原理免疫金染色（immunogold staining，IGS）法是由 Geoghegan 等（1978）首次应用金标探针检测 B 淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于 20 nm）标记在第二抗体或 SPA 分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标 SPA
检测elisa试剂盒组成技术原理与间接法
组成结构 1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗
免疫荧光技术荧光抗体染色方法介绍直接法
直接法是指用特异荧光抗体直接滴加于待检的标本上,由荧光标记的抗体与抗原发生特异结合(图)。标本中如有相应的抗原存在,即与荧光抗体特异性结合,在镜下可见有荧光的抗原复合物。此法的优点是操作简单、特异性高。其缺点是检查每种抗原均需制备相应的特异性荧光抗体,且敏感性低于间接法。
SPA－在免疫组化中的应用——间接法
实验方法原理由于 SPA 能结合 IgG 的 Fc 段，因此就成为天然的抗 IgG，酶标记的 SPA 可代替酶标记的 IgG 抗血清，从而测定和定位组织内的 IgG 或免疫复合物。实验材料石蜡切片试剂、试剂盒H2O2TBS第一抗体SPA-HRPDAB二甲苯乙醇树胶实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水。
聚碳酸酯的制法光气直接法的介绍
光气属于酰氯，活性高，可以与羟基化合物直接酯化。光气法合成聚碳酸酯多采用界面缩聚技术。双酚A和氢氧化钠配成双酚钠水溶液作为水相，光气的有机溶液（如二氯甲烷）为另一相，以胺类（如四丁基溴化铵）作催化剂，在50℃下反应。反应主要在水相一侧，反应器内的搅拌要保证有机相中的光气及时地扩散至界面，以供反应
简述抗人球蛋白试验（间接法）－临床意义
抗人球蛋白试验的间接法是用已知抗原的红细胞检查被检者血清中的不完全抗体，也可用已知抗血清测定被检红细胞是否含有相应抗原。在临床上此法可用于血型鉴定（如DU、Daffy、Kidd等），抗体的检出和鉴定。尚有助于D的检出，凡酶介质或其他方法为“d” 红细胞，必须用本法证实。本法多用于检测母体Rh（D
免疫荧光技术荧光抗体染色方法介绍间接法
间接法是根据抗球蛋白试验的原理,用荧光素标记抗球蛋白抗体(简称标记抗抗体)的方法(图）。间接法的检测过程分为两步:第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中在37℃下保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体;第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、
关于DNA连接酶的DNA接头连接法介绍
DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头
免疫荧光技术直接法测抗原的实验步骤介绍
① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。 ② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。 ③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按
免疫荧光技术直接法测抗原的注意事项
1）对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释度不应超过1：20，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。 2）染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从10 min到数小时，一般30 min已足够。染色温度多采用室温（25℃左右），高于
ELISA直接法和双抗体夹心法检测抗原的区别
不直接标记一抗而标记二抗，这是从生产成本上考虑的。二抗大部分是通用的，标记一次可以大量标记，比如10ml或者更多的浓缩液，可以生产上千上万的试剂盒。一次检测就行了而一抗种类很多，量少，如果标记一抗，比较费事。次次得检测（标记完得检测）。hrp标记不是很简单的事科研用的试剂盒。单品销售量很小的，不值当
免疫荧光技术直接法测抗原的检测原理介绍
⑴基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 ⑵试剂与仪器 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.0
简述抗人球蛋白试验（直接法）的临床意义
抗人球蛋白试验的直接法在临床上主要是检查被检者红细胞表面是否结合有不完全抗体，如新生儿溶血病病儿的红细胞被母体不完全抗体致敏；溶血性（血管外）输血反应时，献血者红细胞被受血者体内不完全抗体致敏；以及自身免疫性溶血性贫血病人红细胞被自身抗体致敏等。在临床上有较大意义，阳性结果可见于自体免疫溶血性贫
用于PCR的模板DNA制备实验——直接法（DNA－免提法）
实验步骤1. 标本太少时，可将一张石蜡切片经脱蜡，水化，蒸馏水清洗，无菌蒸馏水浸泡，取出晾至半干。2. 加入 20～80 μl 直接裂解液中，加 20 mg/ml 蛋白酶 K 0.2～1 μl，放置 55℃ 裂解 3 h 以上；100℃10 min 灭活蛋白酶 K；10000 r/min 离心 10
局部放电测试电路的三种基本接法及优缺点
1)标准试验电路，又称并联法。适应于必须接地的试品。 其缺点是高压引线对地杂散电容并联在 CX上，会降低测试灵敏度。 (2)串联法，其要求试品低压端对地浮置。 其优点是变压器入口电容、高压线对地杂散电容与耦合电容CK并联，有利于提高试验灵敏度；缺点是试样损坏时会损坏输入单元。
免疫荧光的技术的间接法测抗体注意事项
1）荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长 ，会使荧光减弱。 2）每次试验时 ，需设置以下三种对照： ① 阳性对照：阳性血清+荧光标记物 ②阴性对照：阴性血清+荧光标记物 ③ 荧光标记物对照：PBS+荧光标记物 3）已知抗原标本片需在操作的各个步骤中，始终保持湿润，
免疫荧光直接法测抗原法的原理和实验步骤
⑴基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。⑵试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，p
免疫荧光间接法测抗体法的原理和实验步骤
⑴基本原理染色程序分为两步，第一步，用未知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结
什么是电离真空计的外控接法？有何好处？
如规管的栅极作为电子加速极，而板极作为离子收集极，此种接法即为外控接法。其好处是电子在加速中不易被栅丝截获，并受灯丝和板极的电位排斥，可以在灯丝与板极的空间，反复穿过栅极来回振荡，如此，可显著提高测量的灵敏度。 利用电子对气体的碰撞产生电离作用，而电离的效果是与气体压力有关的。当电子电流一定时
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法原理和操...
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法原理和操作流程一、原理与意义免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——直接法，是一种荧光抗体染色法。该方法比较简单，适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白质抗原如肾、皮肤的检查和研究。此法每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原，特异性高而敏感性较低。二、操作流程
ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪
双抗体夹心法：(1)包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。(2)加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置3
双位点一步法和间接法区别
间接法是利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。双位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。在一步法测定中，应注意钩状效应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带
局部放电测试电路的三种基本接法及优缺点
(1)标准试验电路，又称并联法。适应于必须接地的试品。其缺点是高压引线对地杂散电容并联在 CX上，会降低测试灵敏度。(2)串联法，其要求试品低压端对地浮置。其优点是变压器入口电容、高压线对地杂散电容与耦合电容CK并联，有利于提高试验灵敏度;缺点是试样损坏时会损坏输入单元。(3)平衡法试验电路：要求两
新对接法将使宇航员6小时抵达空间站
俄罗斯宇航员训练中心负责人谢尔盖·克利卡列夫3月4日表示，定于本月28至29日飞往国际空间站的俄“联盟”号载人飞船将首次采用快速对接模式。宇航员从地面发射到空间站的时间将从原来的2天缩短为6小时。 克利卡列夫说，快速对接模式已在2012年至2013年发射的几艘“进步”货运飞船上试验成功，若
简述免疫荧光的技术的间接法测抗体的实验步骤
1）滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于已知抗原标本片，10min后弃去，使标本片保持一定湿度。 2）滴加以0.01mol/L，pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本，覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内，37℃保温30min。 3）取出玻片，置于玻片架上，先用0.01mol
双位点一步法与间接法的区别
间接法是利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。双位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。在一步法测定中，应注意钩状效应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带
DNA连接酶同聚物加尾法连接法的介绍
这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混
关于免疫荧光的技术的间接法测抗体的原理介绍
⑴基本原理 染色程序分为两步，第一步，用未知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体
兔子视黄醇结合蛋白4ELISA试剂盒的间接法
兔子视黄醇结合蛋白4ELISA试剂盒的间接法：1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。 2.次日洗涤3次。 3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释