竞争ELISA基本程序
① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就减少，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合方法。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。......阅读全文
竞争ELISA基本程序
① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结
竞争ELISA法的操作程序
此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标
竞争ELISA法的操作程序
此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标
双夹心ELISA基本程序
① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加底物液 → 37℃ 2
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
1、直接ELISA试剂盒本法首要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，直接ELISA的操作程序如下：(1) 资料① 包被液、洗刷液、保温液、底物液、停止液；② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参阅血清；待检鸭血清；③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。(2)
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C－ELISA）。
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
抗体的活性和纯度对制备标记抗体至关重要，因为特异性免疫反应随抗体活性和纯度的增加而增强。 在酶标记过程中，抗体的活性有所降低，故需要纯度高、效价高及抗原亲和力强的抗体球蛋白，最好使用亲和层析提纯的抗体，可提高敏感性，而且可稀释使用，减少非特异性吸附。 酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原
竞争－ELISA－检测法的缺点
竞争 ELISA 法存在以下一些缺点：检测范围相对较窄：由于其检测原理是基于竞争抑制，浓度过高或过低的待测物可能导致结果不准确，限制了可检测的浓度范围。准确性可能受竞争不完全的影响：在竞争反应中，如果标记抗原和未标记抗原与抗体的结合能力存在差异，或者反应条件不理想，可能导致竞争不完全，从而影响检测结
间接ELISA与间接竞争ELISA有什么区别
一般间接Elisa法用于检测抗体（比如免疫血清的效价）而间接竞争Elisa法用于检测小分子抗原
间接ELISA与间接竞争ELISA有什么区别
一般间接Elisa法用于检测抗体（比如免疫血清的效价）而间接竞争Elisa法用于检测小分子抗原
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序（一）
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序（二）
4、竞争ELISA 此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检
Elisa竞争法抑制试验原理
针对于HBeAb的中和抑制法采用抗-HBe抗体包被反应板，加入校准品及被测样本，同时加入定量HBeAg中和抗原，经过振荡孵育,洗板后再加入铕标记的抗-HBe，若标本中抗-HBe浓度高，HBeAg将被大量中和，使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。增强液（β－NTA）将标记在
Elisa竞争法抑制试验原理
针对于HBeAb的中和抑制法采用抗-HBe抗体包被反应板，加入校准品及被测样本，同时加入定量HBeAg中和抗原，经过振荡孵育,洗板后再加入铕标记的抗-HBe，若标本中抗-HBe浓度高，HBeAg将被大量中和，使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。增强液（β－NTA）将标记在
布ELISA法的主要程序
⑴ 首先把抗布氏杆菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并经洗涤及封闭；⑵ 加被检样品并于室温下感作30分钟，然后洗5次；⑶ 加酶标记的抗布氏杆菌抗体，于室温下感作30分钟，然后洗涤5次；⑷ 加入底物液显色；⑸ 测定OD值。
间接ELISA的操作程序
本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下： ⑴ 材料 ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液； ② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清； ③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。 ⑵ 方
阻断ELISA的操作程序
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃
夹心法ELISA和竞争法ELISA操作步骤比较
竞争法ELISA操作步骤实验开始前，各试剂和样本均应平衡至室温；样本复融后需再次离心，取上清检测；试剂或样本配制时，需充分混匀并尽量避免起泡；标曲和样本建议做复孔检测。1.加样：将标准品工作液依次加入到前两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔50 μL。待测样品加入到其他孔，每孔50 μ
ELISA竞争抑制法存在的操作问题
两对半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测，而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。而竞争抑制法的原理：酶标抗体与样本抗体在同样的体系中，与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲，应该先将样本与酶标抗体先行混匀，然后加入反应也进行。但实际
如何用竞争elisa来定量检测抗体
竞争ELISA这种ELISA形式一般用于检测小分子抗原，比如抗生素、细胞因子和其它小分子药物等。而且竞争ELISA法的建立一般需要针对抗原（体）进行标记，标记的效果是未知因素。且竞争ELISA法的方法学优化需要考虑的因素也稍多。抗体作为一种蛋白质，分子量一般在70KD以上，有足够多的抗原决定簇，所以
ELISA竞争抑制法存在的操作问题
两对半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测，而HBcAb、HBeAb使用竞争抑制法检测。而竞争抑制法的原理：酶标抗体与样本抗体在同样的体系中，与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲，应该先将样本与酶标抗体先行混匀，然后加入反应也进行。但实际工作中并
斑点ELISA法的操作程序
常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置
布ELISA法的操作程序
（C－ELISA） C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为免疫反应提供较大的表面
斑点ELISA法主要操作程序
⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使硝酸纤维素膜彻底干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭 将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30
阻断ELISA检测法操作程序
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干⑤
布ELISA法的操作程序
（C－ELISA） C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为免疫反应提供较大的表面
间接ELISA法的操作程序
本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步骤① 加抗原包被 → 4
阻断ELISA法的操作程序
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃