亚细胞结构的分离与鉴定2
第三节 微粒体的分离细胞通过匀浆破碎时,细胞质膜碎成片段,这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等)的小泡有不同的特性,所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体,称微粒体(microsome)。分离微粒体的方法是利用分级离心方法,去掉细胞核、线粒体后,经超速离心法而制备。具体步骤如下。1. 将体重约为300g饥俄20h后的大鼠断头,取出肝脏,洗涤,剪碎,加2倍体积的介质溶液(含0.15mol/L蔗糖,0.025mol/L KCl,0.1mol/L Tris-HCl pH7.4, 0.005mol/L MgCl2),在玻璃匀浆器中匀浆;2. 15000g×10min离心,弃沉淀,取上清;3. 100000g×60min离心,弃上清,取沉淀,沉淀即为微粒体;4. 将微粒体保存在介质溶液中。第四节 溶酶体的分离溶酶体是由一层单位膜包围......阅读全文
肝亚细胞部分的制备
离心法钙沉淀法实验材料肝线粒体 试剂、试剂盒蔗糖 氯化钾
亚细胞器有哪些
亚细胞器就是指要用电子显微镜才能观察到的细胞器,因而电子显微镜观察到的的细胞结构也称之为亚显微结构.具体的亚细胞器有:核糖体,中心体
什么是亚细胞器
显微结构:细胞核、线粒体、叶绿体(线粒体光镜下能看见的!)亚显微结构:内质网、细胞膜、核糖体,以及细胞器的精细结构。
亚细胞核结构nuclear-speckle在mRNA出核中的功能与机制
9月7日,国际学术期刊J Cell Biol 在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所程红研究组的最新研究成果“Intronless mRNAs transit through nuclear speckles to gain export competence”,首次揭示了具备出核能力的
亚显微,光学显微镜,显微镜分别能看到细胞结构是什么
显微结构是指在光学显微镜下可以观察到的结构.对于细胞来说:细胞壁、细胞核、内质网、线粒体、叶绿体、高尔基体等是可以直接在光学显微镜下观察到外观形状的,属于显微结构;注意只能看到细胞器的形状,内部详细结构是看不见的.比如叶绿体只能看到是绿色的椭圆形颗粒,里面的基粒属于亚显微结构.亚显微结构是指在电子显
亚显微、光学显微镜分别能看得到的细胞结构是什么
显微结构是指在光学显微镜下可以观察到的结构.对于细胞来说:细胞壁、细胞核、内质网、线粒体、叶绿体、高尔基体等是可以直接在光学显微镜下观察到外观形状的,属于显微结构;注意只能看到细胞器的形状,内部详细结构是看不见的.比如叶绿体只能看到是绿色的椭圆形颗粒,里面的基粒属于亚显微结构.亚显微结构是指在电子显
锂亚硫酰氯电池的结构特点
锂亚硫酰氯电池(又名:Li/SOCl2)是实际应用电池系列中比能量最高的一种电池,比能量可达590W·h/kg和1100(瓦时每立方分米)。这一最高的比能量值是由大容量、低放电率型大尺寸电池获得的。应用锂亚硫酰氯电池(Li/SOCl2)是利用该系列的高比能量和长贮存寿命的优点。小电流放电的圆柱形电池
关于亚细胞定位的基本介绍
亚细胞定位是查找生物大分子在细胞内的具体存在的位置,如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。常见的亚细胞定位方法有生物信息学预测法、免疫荧光法、GFP融合蛋白表达法。 不同的细胞器往往具有不同的理化环境,它根据蛋白质的结构及表面理化特征,选择性容纳蛋白。 蛋白质表面直接暴露于细胞器环境中,它由序列
研究亚细胞核结构nuclear-speckle在mRNA出核中的功能与机制
9月7日,国际学术期刊J Cell Biol 在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所程红研究组的最新研究成果“Intronless mRNAs transit through nuclear speckles to gain export competence”,首次揭示了具备出核能力的
细胞结构
细胞壁 分类在细菌、真菌、植物的生物,其组成的细胞都具有细胞壁(Cell Wall),而原生生物则有一部分的生物体具有此构造,但是动物没有。 植物细胞壁主要成分是纤维素,经过有系统的编织形成网状的外壁。可分为中胶层、初生细胞壁、次生细胞壁。中胶层是植物细胞刚分裂完成的子细胞之间,最先形成的间
细胞结构
细胞壁 分类在细菌、真菌、植物的生物,其组成的细胞都具有细胞壁(Cell Wall),而原生生物则有一部分的生物体具有此构造,但是动物没有。 植物细胞壁主要成分是纤维素,经过有系统的编织形成网状的外壁。可分为中胶层、初生细胞壁、次生细胞壁。中胶层是植物细胞刚分裂完成的子细胞之间,最先形成的间
细胞和亚细胞提取物的制备实验
实验方法原理 对于细胞内蛋白的纯化和特性分析,重要的是选择一种有效的方法来破碎细胞或组织,使蛋白迅速地从胞内相对隔离的空间中释放到缓冲液中,而该缓冲液应对所研究的蛋白的生物活性没有影响。广泛使用的破碎软组织的方法之一是勻浆。在本方案中,讨论了使用机械力匀浆组织:在 Potter-Elvehjem
细胞和亚细胞提取物的制备实验
从组织和细胞中提取蛋白可能是蛋白质组研究中最关键的一步,因为这一步影响了蛋白的产率、生物活性和特定目的蛋白结构的完整性。因此,我们要注意蛋白提取条件的选择。主要目标是在破坏力最小、保持蛋白结构完整性的前提下,可重复地使细胞最大程度地裂解。方案1 哺乳动物组织的匀浆实验实验方法原理对于细胞内蛋白的纯化
细胞和亚细胞提取物的制备实验
方案1 哺乳动物组织的匀浆实验 方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验 方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验 方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验 方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验 方案6 细菌中重组蛋白的
亚细胞(细胞器)构造的组成与功能
分离与纯化对象之一:“亚细胞(细胞器)”的构造与功能 上世纪20年代以Svedberg为首的欧洲科学家艰难研制的超速离心机原型主要目的是想分离和纯化病毒、细胞和亚细胞构造(细胞器),然而50年代中期开始生产的*代及以后的各代超速离心机,在很长一段时期内(50年代—80年代)主要用于分离和纯化
锂亚硫酰氯电池的电极结构介绍
Li/SOCl2碳包式电池已符合ANSI标准的尺寸制成圆柱形。这些电池是为低、中等放电率放电设计的,不得高于C/100率放电,它们具有高比能量,例如,ABLE D型电池已3.5V的电压释放出19.0Ah的容量,与此相比,传统的碱性锌/二氧化锰电池已1.5V的电压只能释放出15Ah的容量。 (1
细胞和亚细胞提取物的制备实验8
方案8 酵母提取物的制备实验实验方法原理由于酵母的经典遗传分析和分子遗传分析都已经研究得非常透彻,因而对于纯化重组动物蛋白来说,酵母是一个很有吸引力的表达体系。关于培养和收集酵母细胞的讨论,尤其是芽殖酵母,参见 Jazwinski(1990)。酵母细胞的裂解方法有很多种,包括自溶、压力破碎(如 Fr
亚细胞(细胞器)构造的组成与功能(一)
上世纪20年代以Svedberg为首的欧洲科学家艰难研制的超速离心机原型主要目的是想分离和纯化病毒、细胞和亚细胞构造(细胞器),然而50年代中期开始生产的第一代及以后的各代超速离心机,在很长一段时期内(50年代—80年代)主要用于分离和纯化生物大分子、细胞、细胞器、病毒、血液组份等生物体。但从90年
细胞和亚细胞提取物的制备实验5
方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。为了检测诱导和重组蛋白的表达水平,评估方法的快速简单是很重要的。本方案使用 0.5% TritonX-1OO 裂解细胞,小量制备细菌提取物。实验材料表达目标重组蛋白的细菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇(DTT)样
亚细胞(细胞器)构造的组成与功能(三)
△ 微体: microbody (peroxisome) 在植物种子内称为乙醛酸循环体(glyoxysome)0.5um,单位膜内包有中等致密颗粒,常见于肝、肾上皮细胞、支气管无纤毛上皮细胞中。种类:● 有核样微体● 有边缘板或哑铃样微体 ● 无核样微样△ 中心粒: centrosome
亚细胞(细胞器)构造的组成与功能(二)
二种内质网可互相连接,一定条件下可转换,但构成成分及酶系差别很大。 △ 高尔基复合体:一般位于核附近 组成:扁平囊泡、大囊泡(又称分泌泡或浓缩泡)、小囊泡 △ 线粒体: 结构: 线粒体外膜。外室、基粒(可溶性ATP)、核糖体、内膜、脊。又分为板状脊与管状脊二种结构形式
细胞和亚细胞提取物的制备实验6
方案6 细菌中重组蛋白的大量提取实验实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。适用于细菌细胞蛋白提取的方法包括超声波处理、玻璃珠研磨、钒土或石英砂研磨、French 加压罐高压剪切细胞和溶’菌酶处理。这些方法适用于从各种革兰阴性菌和革兰阳性菌中制备蛋白提取物。通常是使用酶的方法破坏细胞
细胞和亚细胞提取物的制备实验2
方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验实验方法原理培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解(如 l%NP-40 或 l%Triton X-100),那么这对目标蛋白的影响可能比方案 1 中所讨论的匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表
细胞和亚细胞提取物的制备实验3
方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验实验方法原理去垢剂裂解细胞法通常用于培养的动物细胞。典型的离子型去垢剂SDS(如2%SDS)能充分地裂解细胞。培养的动物细胞和细菌,如可以使用这种方式裂解。假如实验所用的抗体识别的抗原决定簇取决于自然空间构象,并对还原环境敏感,那么在裂解缓冲液
细胞和亚细胞提取物的制备实验9
实验方法原理差异去垢剂分离法(differential detergent fractionation, DDF) 包括使用一系列含不同去垢剂的 PIPES 缓冲液对细胞进行连续抽提,首先是毛地黄皂苷,其次是 Triton, 最后是 Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生 4 种在生化和电泳上相异的组
亚细胞(细胞器)构造的组成与功能(四)
三.内质网:(endoplasmic reticulum) 粗面内质网:最重要的功能是合成输出蛋白(或称分泌蛋白:包括各种肽类、激素、酶类和抗体) 滑面内质网:多方面功能,不同细胞中功能不同。 Ⅰ.脂质和固醇的合成; Ⅱ.蛋白质及脂类的