细胞凋亡的检测方法综述4
DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移（ISNT）切片常规脱蜡，梯度乙醇复水化。将切片组织浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸馏水冲尽。0.5%胃蛋白酶（pH2.0）37℃消化0～20min，PBS洗尽。用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A，5min。缓冲液A：50mmol/L Tris-HCl， 5mmol/L MgCl2， 10mmol/L β-巯基乙醇，0.005％BSA，pH7.5。弃去缓冲液A，滴加标记液约50μl，25℃温育1h。标记反应液：0.005mmol/L dNTP， 0.005mol/L biotin-16-dUTP， 25U/ml Klenow大片段。PBS漂洗2次，各3min。内源酶阻断剂阻断15min。PBS洗2次，各3min。滴加HRP-avidin覆盖组织，室温下30min。PBS洗2次，各3min。DAB-H2O2显色约5min。流水冲洗后，苏木素复染1m......阅读全文
细胞凋亡的检测方法综述4
DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移（ISNT）切片常规脱蜡，梯度乙醇复水化。将切片组织浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸馏水冲尽。0.5%胃蛋白酶（pH2.0）37℃消化0～20min，PBS洗尽。用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A，5min。缓冲液A
细胞凋亡综述4
2、所有Caspase先以无活性的酶原（procaspase）的形式合成，其激活过程包括：①二聚体化②caspase自身序列裂解成小亚其和大亚基③除去prodomain。3、最早发现的 caspase 为IL-1β转化酶 (ICE=caspase-1) 它将 pro-IL-1 前体裂解成其活性形式。
细胞凋亡的检测方法综述1
一、形态学检测（一）光学显微镜和倒置显微镜 1、未染色细胞凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 2、染色细胞常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
细胞凋亡的检测方法综述5
4、检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法原理：磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine， PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中（图3）。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂
细胞凋亡的检测方法综述3
4、DNA 5’末端32P标记（1）将脱磷酸样品DNA置冰浴上，再加双蒸水10μl，10×缓冲液2μl，T4多核苷酸激酶10U，32P-ATP 740kBq（20μCi），双蒸水加至20μl。（2）混合后，37℃水浴60min。（3）加入1μl的0.5mol/L EDTA，90℃灭活5min。5、观
细胞凋亡的检测方法综述2
方法三（1）收集细胞悬液（106细胞），低速离心（1000r/min，离心5min）。（2）去上清，沉淀加0.4ml低渗缓冲液作用1h。（3）13 000r/min，离心10min，将上清转移至另一Eppendorf管中，加等量50％异丙醇和0.5mol/L NaCl混匀，置液氮5min。（4）12
检测细胞凋亡的实验方法比较4
六、Caspase-3活性的检测 Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（1
细胞凋亡综述2
在凋亡早期，活化的Caspase-3是主要的功能蛋白酶。凋亡细胞内，32kD的原酶裂解为17kD和12kD的亚单位，两个亚单位组成二聚体，即活化的Caspase-3，活化的Caspase-3进一步水解活化其它Caspase酶及胞浆内目标（如D4-GDI）和核内目标（如PARP）。Bcl-2家族Bcl
细胞凋亡综述1
细胞程序性死亡是正常生理现象，多发生于胚胎发育和维持组织自身平衡。Kerr et al.最早发现有两种细胞死亡：坏死（Necrosis）和凋亡（Apoptosis）。Apoptosis，希腊文意思是树叶从树上“凋落”，这里是指凋亡，是细胞主动参与自身死亡的过程。凋亡程序有一些特殊形态学特征，包括
综述：细胞凋亡（一）
人体内的细胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡则是病理性的，有关细胞死亡过程的研究，近年来已成为生物学、医学研究的一个热点，到目前为此，人们已经知道细胞的死亡起码有两种方式，即细胞坏死与细胞凋亡。细胞坏死是早已被认识到的一种细胞死亡方式，而细胞凋亡则是近年逐渐被认识的一种细胞死亡方式，
综述：细胞凋亡（四）
5 线粒体在细胞凋亡作用中的进一步证据 (1)若将纯化的正常的线粒体与纯化的细胞核在一起保温，并不导致细胞核的变化。但若将诱导生成PT孔道的线粒体与纯化的细胞核一同保温，细胞核即开始凋亡变化。(2)细胞死亡调节蛋白不论是抑制死亡的bcl-2家族还是促进细胞死亡的Bax家族均以线粒体作为靶细胞器
细胞凋亡综述3
二、凋亡的生理功能1、维持组织稳态平衡（homeostasis）,通过干细胞分裂产生新细胞的同时，选择性地除去那些损伤的或老的或多余的细胞。2、清除不需要的免疫细胞。3、神经元发育4、个体发育三、凋亡细胞的形态学和生化特征1、细胞皱缩（shrinkage）2、质膜出泡（blebbing）3、染色质浓
综述：细胞凋亡（三）
细胞凋亡与医学 1．免疫学： 1）胸腺细胞成熟过程中的凋亡：胸腺细胞经过一系列的发育过程而成为各种类型的免疫活性细胞。在这一发展过程中，涉及了一系列的阳性细胞选择和阴性细胞选择过程。以形成CD4+的T淋巴细胞亚型及CD8+的T淋巴细胞亚型；同时，对识别自身抗原的T细胞克隆进行选择性地消除，其细胞
综述：细胞凋亡（二）
细胞凋亡的过程及机理 细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化（Caspase）→进入连续反应过程 1．凋亡的启动阶段细胞凋亡的启动是细胞在感受到相应的信号刺激后胞内一系列控制开关的开启或关闭，不同的外界因素启动凋亡的方式不同，所引起的信号转
细胞凋亡，细胞凋亡通路和细胞凋亡检测的几种检测方法
一、形态学观察方法 1、HE染色、光镜观察：细胞凋亡后呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙(AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。细胞凋亡|后（细胞凋亡,细胞凋亡通路，细胞凋亡检测）核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧
细胞凋亡通路和细胞凋亡检测的几种检测方法
一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察：细胞凋亡后呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙(AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。细胞凋亡|后（细胞凋亡,细胞凋亡通路，细胞凋亡检测）核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨
细胞凋亡检测方法
细胞发生凋亡时，不同区域内（如细胞膜、细胞浆、线粒体、细胞核等）会发生不同的生理生化改变。因此，针对不同区域的细胞凋亡检测要采用不同的方法。1）Annexin V 凋亡检测原理：Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca依赖性磷脂结合蛋白，正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphatidyl
细胞凋亡检测方法
细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。一、细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒
细胞凋亡的检测方法
（一） 测原理细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。（二） 用价值流式细胞仪检测有下列特点：（1）检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡
细胞凋亡的检测方法
（一） 测原理细胞发生凋亡时，其细胞膜 的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。（二） 用价值流式细胞仪检测有下列特点：（1）检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比
细胞凋亡的细胞凋亡检测
细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡，乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此，有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和
细胞凋亡的细胞凋亡检测
细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡，乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此，有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和
细胞凋亡检测方法简介
细胞凋亡是指细胞在生长到一定阶段及某些生理过程中，会受到多因素和机制的严格调控而进入死亡。这是一个动态的过程，会涉及一系列复杂的生化反应, 是一个需要酶参与的级联反应,同时也涉及不同基因的表达及调控、信号传导。其中有几项生理过程能被用来检测凋亡的发生，因此多参数分析法对于准确检测这一过程十分
细胞凋亡检测方法介绍
细胞凋亡是指细胞在生长到一定阶段及某些生理过程中，会受到多因素和机制的严格调控而进入死亡。这是一个动态的过程,会涉及一系列复杂的生化反应, 是一个需要酶参与的级联反应,同时也涉及不同基因的表达及调控、信号传导。其中有几项生理过程能被用来检测凋亡的发生，因此多参数分析法对于准确检测这一过程十分
细胞凋亡的几种检测方法
一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整
细胞凋亡的几种检测方法
一、形态学观察方法 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝染
细胞凋亡的早期检测方法
1、PS（磷脂酰丝氨酸）在胞外膜分布的检测PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志。AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在胞膜外侧的PS，使用荧光素标记的AnnexinV 蛋白（如Annexin V-FITC）即可检测细胞凋亡。由于这是一种凋亡早
细胞凋亡的几种检测方法
一、形态学观察方法 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝
细胞凋亡的几种检测方法
一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙(AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核 呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜 不
细胞凋亡的几种检测方法
一、形态学观察方法 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝染色：如果