小鼠βactin基因的克隆表达（1）
动物组织RNA的提取实验目的：掌握由动物组织中提取总RNA的方法实验原理：Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA则分布在上层的水相中，最后用异丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗涤沉淀，这样就可以得到比较纯净的总RNA.实验步骤：① 先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意组织粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。② 室温放置5min，然后加入200µl的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。③ 12000rpm离心10min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入......阅读全文
有关融合蛋白表达载体的克隆
在构建融含蛋白表达载体时除了要注意插入片段的方向、读码框架与载体保持一致外，注意以下问题可能会减少一些不必要的麻烦，当外源片的插入载体起始密码的后面，另一个基因的前面时，注意检查插入后基因的两端是否引入了新的终止密码，特别是用到Klenow mung bean 核酸酶，T4 Polymerase
分子克隆-蛋白表达实验指南（十六）
Amp(50mg/ml) 溶解1g Amp于足量的水中，最后定容至20ml。分装成小份于-20℃贮存。常以20～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基，1:1000比例稀释 Kan(50mg/ml) 溶解1g Kan于足量的水中，最后定容至20ml
分子克隆-蛋白表达实验指南（十七）
Buffers for His purification in denatured conditions: 配制时加终体积50％的水，之后定容至所需体积。先配pH 8.0的buffer(调pH需要较多NaOH)，再统一配bufferC，D，E，分别调pH Buffer B (200ml
分子克隆-蛋白表达实验指南（十八）
15％胶 水1.11.872.33.43.854.65.76.99.211.5 30％聚丙烯酰胺混合液2.54.2557.58.751012.5152025 1.5M Tris(pH=8.8)1.32.212.53.84.5556.37.
分子克隆-蛋白表达实验指南（三）
若有非特异性条带，可进行Touchdown PCR，提高引物的特异性。 PCR反应条件： 1 94C 5min 2 94C 45s 3 65C 45s 退火温度视
分子克隆-蛋白表达实验指南（四）
7. PCR产物与TA载体连接 pGEM-T vector is T-tailed at the insert site. To improve the ligation efficiency, it is recommended PCR product be A-tailed. +A s
分子克隆-蛋白表达实验指南（十三）
7． 电泳结束后，按比例从胶上割下相应约1cm条带（当按比例的条带割下后可相应的向两边再割一点，但是电透析时中间和两边的胶必须分开透析），用镊子或尺子将胶碾碎成2mm见方的小块。 8． 将碎块小心加入电透析tube中，200V，120～150min。 9． 移出放电透析tube的架子，
分子克隆-蛋白表达实验指南（二）
取DEPC水时切记带上手套 Genequant使用方法： 开机－set-up－enter(只更改DNA/RNA，看光波是否为320nm)－set-ref(此时插入空白对照)－样品 1．使用前将比色皿中水吸出，用1ml蒸馏水重新洗涤再将比色皿中的水吸尽（先用1ml枪吸，后用100ul枪吸）
分子克隆-蛋白表达实验指南（十四）
RbCl制备感受态细胞 需准备的灭菌器具和培养液： SOB，Buffer 1，Buffer 2，3×200ml广口瓶，1.5ml EP管，1×500ml离心瓶（按200ml摇菌量计算），2×50ml离心管，2×移液管（用于加Buffer 1），液氮，冰 离心管，EP管，移液管使用前均需要放
小鼠β-actin基因的克隆表达（4）
实验步骤：（1）诱导靶蛋白表达分别挑取对照菌和重组菌1~2个菌落，接入5ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养过夜。取5ml过夜培养物接入500ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养2h以上，至对数中期（A550=0.5~1.0）。向诱导管中加入IPTG使其浓