免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PCR的原理与ELISA和RIA等常规免疫学检测方法基本相同,只不过是用DNA片段代替了酶或放射性核素作为标记物。通常需要一个对抗体和DNA具有双亲和力的连接物,将DNA与抗体偶联在一起。抗体与抗原结合后,用该DNA片段特异的一对引物做PCR,分析扩增产物。特异性PCR产物的存在表明有该DNA片段标记的抗体所针对的特异性抗原存在。将DNA标记到抗体分子上的方法有多种,一种是通过链亲和素(streptavidin)蛋白A(protein A)的融合蛋白,它具有两种独立的结合功能,链亲和素结合生物素(biotin),蛋白A结合免疫球蛋白G......阅读全文

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

PCR-(多聚酶链反应)

【实验目的】掌握PCR技术的原理,学习PCR技术的基本方法,了解PCR技术的应用范围与意义。【实验原理】详见14章第2节。【实验对象】特定的DNA序列。【试剂与器材】引物(primer),根据需扩增的DNA设计相应的引物;TagDNA聚合酶; 10×PCR缓冲液(随酶一起购买);5mmol/L dN

关于多聚酶链反应的基本原理介绍

  多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)又称体外核酸扩增技术,即对特定DNA片段进行非细胞依赖性扩增,其基本过程是将已提取的待测DNA在一对寡核苷酸引物、三磷酸核苷及耐热DNA多聚酶存在的情况下,分别于90℃、55℃和72℃下经变性、退火和核苷酸链的延伸,如此循

PCR(多聚酶链反应)实验原理、方法步骤和注意事项

【实验对象】特定的DNA序列。【试剂与器材】 引物(primer),根据需扩增的DNA设计相应的引物;TagDNA聚合酶; 10×PCR缓冲液(随酶一起购买);5mmol/L dNTP贮备液(商品化产品);DNA模板(需扩增的 DNA);双蒸水;矿物油;PCR反应管;微量移液器;离心机及PCR仪

多聚酶链式反应PCR

多聚酶链式反应PCR :(1)PCR原理:在模板DNA、引物和4种脱氧单核苷酸存在的条件下依赖于耐高温的DNA聚合酶的酶促合成反应。以欲扩增的DNA做为模板,以和模板正链和负链末端互补的两种寡聚核苷酸做为引物,经过模板DNA变性、模板引物复性结合、并在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应来合成新的模

dna多聚酶的临床意义

  (1) 升高:乙肝病毒持续感染者、急性乙型肝炎潜伏期、初期、繁殖期、乙型慢性肝炎、乙型慢性肝炎的e抗体阳性、DNA多聚酶高值时说明肝功能恶化。(2) 降低:乙型慢性肝炎的e抗原阳性者。

多聚酶链式反应的原理

  多聚酶 链式反应的原理类似于DNA的天然 复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡 核苷酸 引物,经 变性、退火和延伸若干个 循环后,DNA扩增2n倍。  1.变性:加热使模板DNA在 高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段。  2.退火:使溶液温度降至

生化检测项目DNA多聚酶介绍

DNA多聚酶介绍:       基因是遗传的物质基础,它决定了病原体的生物特性。除个别病毒外,现知的所有微生物均是以核酸为遗传物质。乙肝病毒的基因是脱氧核糖核酸(DNA),与病毒复制所必需的DNA聚合酶关系密切。因此基因检测成为乙肝检测组成部分。DNA多聚酶正常值:       25cpm。DNA多

dna多聚酶的注意事项

  (1) 此酶的活性可在乙肝病毒感染的早期发现,甚至于在HBsAg出现前检出。(2) 可作为乙肝病毒复制及有传染性的标志。

几种多聚螯合物酶法

实验概要本文介绍了三种多聚螯合物酶法:PowerVision法,ELPS法和EPOS法。实验原理1.  PowerVision系统的原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子,与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密,形成串珠状多聚物,

几种多聚螯合物酶法

实验概要本文介绍了三种多聚螯合物酶法:PowerVision法,ELPS法和EPOS法。实验原理1.  PowerVision系统的原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子,与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密,形成串珠状多聚物,

检测自身免疫病:铁蛋白多聚抗原和多聚二抗检测

  自身免疫疾病是机体针对自身抗原产生大量自身抗体后引起的慢性全身性疾病。因此,检测患者体内特异性的自身抗体是诊断该病的主要指标。例如,用ELISA检测原发性干燥综合征(Primary Sjogren's syndrome, pSS)患者血清中的抗M3及α-fodrin抗体,为其诊断提供了重

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最

多聚螯合物酶组化实验

EPOS 法 EnVision 法 UIP 法 PowerVision 法             实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)

多聚螯合物酶组化实验

实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架,将特异性抗体和 HRP 结合在一起,形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物,该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时,只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体 EPOS 试剂,孵育 30~60 min 即可完成。勿需再加

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

  多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。  PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究

临床化学检查方法介绍DNA多聚酶介绍

DNA多聚酶介绍:       基因是遗传的物质基础,它决定了病原体的生物特性。除个别病毒外,现知的所有微生物均是以核酸为遗传物质。乙肝病毒的基因是脱氧核糖核酸(DNA),与病毒复制所必需的DNA聚合酶关系密切。因此基因检测成为乙肝检测组成部分。DNA多聚酶正常值:       25cpm。DNA多

多聚酶链式反应技术(PCR技术)(2)

(2)反应增强剂:PCR反应中加入一定浓度的增强剂如1%~10%二甲基亚砜(DMSO)、5%~20%甘油、非离子去污剂、1.25%~10%甲酰胺和10~100 μg/ml牛血清白蛋白等可提高反应特异性和产量,有些反应只能在这些辅助剂存在时才能进行。(3)热启动PCR:如果PCR反应混合物置于低于Tm

乙型肝炎病毒——血清DNA多聚酶检测

  测定HBV特异的DNA聚合酶活性是反映HBV增殖的一个有用指标。HBVDNA聚合酶活性与HBsAg滴度及HBeAn阳性有关,一般说HBeAg阳性,Dane颗粒增殖多,DNA聚合酶活性也高。HBVDNA聚合酶常存在于Dane颗粒核心内,但30%-50%HBV感染者的血清内还有可溶性游离HBVDNA

多聚酶链式反应技术(PCR技术)(1)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应

定量聚合酶链反应

中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定  义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应,对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

何谓连接酶链反应?

连接酶链反应(ligase chain reaction, LCR)属于一种探针扩增技术,是依赖靶核苷酸序列的寡核苷酸探针的连接技术。这种方法应用4种寡核苷酸探针(即两对互补的引物),当它们在体外结合到靶序列上以后,用耐热DNA连接酶将它们连接起来。两条探针被连接上以后又可以作为新的模板。由于使

反向聚合酶链反应

中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定  义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶,切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段,将切出的DNA区段环化,然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学

多聚免疫球蛋白受体的基本信息

中文名称多聚免疫球蛋白受体英文名称poly-Ig receptor定  义该受体表达在黏膜上皮细胞内层的基底膜表面,与多聚免疫球蛋白特别是IgA二聚体结合后,通过胞吞转运,使多聚免疫球蛋白受体-IgA复合物穿越黏膜表皮细胞转移至细胞黏膜腔表面,并分解为分泌型IgA和分泌片。应用学科免疫学(一级学科)

dna多聚酶的注意事项及相关疾病

  注意事项  (1) 此酶的活性可在乙肝病毒感染的早期发现,甚至于在HBsAg出现前检出。(2) 可作为乙肝病毒复制及有传染性的标志。  相关疾病  慢性迁延性肝炎

多聚螯合物酶组化实验——EPOS-法

长期以来,许多的研究者希望 IHC 方法更敏感、更稳定、更简单,要求多步检测系统简化,但敏感性要进一步提高,使这一技术面临巨大的挑战。在实践中,往往是步骤减少了,敏感性也降低,这是一对矛盾。一种新的多聚螯合物酶二步法在 1995 年被隆重推出,该方法与简单的二步法相比较,具有很高的敏感性、稳定性和特

多聚螯合物酶组化实验——UIP-法

实验方法原理UIP(universal immuno-enzyme polymer)法,即通用免疫酶复合物法,是 Nichirei 发明的一种新型免疫组化染色方法。其基本原理及工作流程与 EnVision 法相似,不同的是 UIP 复合物为 HRF 氨基酸-抗鼠或抗兔 IgG 复合物(N-Histo

多聚螯合物酶组化实验——EnVision-法

实验方法原理抗原-抗体反应结合后,第二抗体上标记有多聚化合物(葡聚糖)酶复合物(EnVision 复合物),与第一抗体结合,进而由酶作用底物进行显色定位。EnVision 复合物是利用一种多聚化合物将 HRP 或 AKP 和第二抗体(抗鼠或抗兔 IgG)同时标记在一个多聚化合物上,即形成酶-多聚化合