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1.取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！(6W-8W，以前用只年把的养出来外形也张牙舞爪，但流式检测没有CD11c表达，很奇怪啊；性别方面公母不限，经典版本说公的好，公的壮实，骨头大)2.冲骨髓细胞，我冲出来的骨髓细胞永远没有文献上说的那样多，但不影响大局，我一次用两只，怕出意外少了细胞，论坛里有战友说不要混一起，我不知道具体原因，盼赐教3. 细胞计数，不去红细胞！(不知是好是坏，文献说去红细胞会把一些祖细胞也去掉了)记数，计数只记白细胞(形态学区分，红细胞无核较小，目前我的眼睛目前还在为此积累经验)，2×10e6(似乎太低，这套方案作者是架起式一皿养到第12天的，所以我个人觉得看你在哪天收细胞做下游实验，如果只养到第6天或者第8天，多点应该也行吧？)白细胞种100mm细菌培养皿(注意是细菌培养皿，说悬浮细胞还是用细菌皿好，还说抑制细胞贴壁，让更多祖细胞向树突细胞分化而不是巨噬细胞)，这一天记为第0天4.第3天加等体积(10ml......阅读全文
1.取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！(6W-8W，以前用只年把的养出来外形也张牙舞爪，但流式检测没有CD11c表达，很奇怪啊；性别方面公母不限，经典版本说公的好，公的壮实，骨头大)2.冲骨髓细胞，我冲出来的骨髓细胞永远没有文献上说的那样多，但不影响大局，我一次用两只，怕出意外少了细胞，论坛里有战友说不要
【经典的 BMDC 制备方法简图】 &
1. 这些工作均是在 Ralph M.Steinman的参与下完成的；2. Inaba培养的BMDC来源于小鼠股骨和胫骨中的骨髓；3. Inaba先用抗体+补体法去除骨髓中的淋巴细胞，以防淋巴细胞对BMDC培养的影响；4. 在诱导分化过程中，为防止粒细胞的干扰，Inaba通过每2天轻摇培养板并3/4
4. 培养方法的选择 本文列出迄今为止最常用的三种BMDC培养方法，我们从下表中可以更清楚地看出这三种方法的异同，相信您能根据您的需要作出正确的判断。
【经典的BMDC培养法】-Inaba法（改良）[3,10]¾ 背景：1. Inaba法获得的BMDC数目为5-7 x 106个/小鼠；2. Inaba原法操作比较复杂，需要将骨髓中的淋巴细胞等用抗体+补体法预先去除， 后来的改良法均省却了这个步骤，其实Inaba后来自己也说这
3. BMDC的完全成熟注：步骤2中获得的BMDC并非完全成熟的DC,若想得到完成成熟的DC,还需LPS,CD40L或TNF-a等的诱导。3.1 步骤2.4或2.9中获得的BMDC以1200rpm离心5 min,弃上清；3.2 用含重组小鼠GM-CSF（20ng/ml）和IL-4（10ng/ml）的
¾ 培养步骤：1. 小鼠骨髓细胞的获得见Inaba法（改良）中的相应步骤，注意省去溶血步骤。2. BMDC 的大量制备2.1 步骤1中获得的小鼠骨髓细胞计数后用含 10% FBS的RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度为2 x 105/ml;2.2 铺至100 mm细菌
【注意事项】1. 小鼠品系和性别： 多数研究表明，所使用的小鼠品系与获得 BMDC 的数量和成熟度关系不大[9]，但也有研究表明C57BL/6小鼠可能更好。 Lutz表示从C57BL/10,DBA/2,C3 H/J和129等小鼠品系
小鼠脾脏DC是研究最多的淋巴组织DC，其特征为组成性表达MHC-II类分子和CD11c。该细胞群可进一步分为三群：主要分布于边缘区的CD4+CD8-CD11b+DC，主要分布于T细胞区的CD4-CD8+CD11b-DC和双阴性DC----CD4-CD8+CD11b+。其中，CD8+DC表达CD1d和
树突状细胞是一类形状不规则的非单核吞噬系统细胞，特点是胞浆有许多长突起呈触须状，使整个细胞的形态象一个蜘蛛。树突状细胞分散于全身的上皮组织和实质性器官，其细胞数量不超过局部细胞总数的1%；也可迁移到血液和淋巴，其数量不超过血液有核细胞总数的0.1%.在不同组织中，树突状细胞有不同名称，例如血液中的树