一文掌握MIQE指南的RTqPCR发表数据的实用方法

考虑到mRNA转录的高度动态特性以及样品处理和下游处理步骤中引入的潜在变量,RT-qPCR工作流程的每个步骤的标准化方法对于可靠和可重现的结果至关重要。MIQE为这种方法提供了一份包含85个参数的清单,以确保质量结果符合任何期刊的接受标准。接下来,小编将为大家详细介绍如何应用MIQE指南来建立一个可靠的RT-qPCR实验流程。 ▲图1:RT-qPCR基本流程 1、实验设计正确的实验设计是任何基因表达研究的关键。由于mRNA转录对与研究过程无关的外部刺激敏感,因此严格控制和设计实验条件的工作是十分重要的。其中包括了确定实验程序、对照组、重复组的类型和数量、实验条件以及各组内的样品处理方法等,这些对于最小化变异性至关重要(表1)。 ▲表1:RT-qPCR实验设计和样品管理 2、RNA提取及质控样品需-80℃冷冻或使用RNA储存溶液进行储存。RNA提取程序应包括DNA酶处理步骤,以去除任何的基因......阅读全文

一文掌握MIQE指南的RTqPCR发表数据的实用方法

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定量PCR标准化,挑战在哪里?

  六年前,科学家针对实时定量PCR实验中的种种问题,提出了一套统一的评估标准——MIQE指南。两年前,数字PCR版本的MIQE指南也出炉。然而,认真执行MIQE指南的实验室并不多。定量PCR标准化,挑战在哪里?Jeffrey Perkel博士近日在《BioTechniques》上讨论了这一问题。 

ICPMS实用指南

  ICP-MS全称是电感耦合等离子体质谱仪,可以用于物质试样中一个或者多个元素的定性、半定量和定量分析;能测定周期表中90%的元素,特别是对金属元素分析最擅长,他和ICP-OES、AAS是化学元素分析的常用的三种仪器,其中ICP-MS的检测限最低,可以达到PPT(10的负12次方)级。标准偏差为2

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RTqPCR的原理

提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用0ligo (dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR 使测的灵敏性提高了几个数量级,使- - 些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录

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数据不“沉睡”-趋势尽掌握

  在江苏省生态环境监控中心监控大屏上,全省重点污染源的基本信息、生产工艺、污染治理设施运行情况、排污状况、排污数据等信息一览无余。  “十一五”以来,江苏省环保厅在信息化运用方面不断改革探索创新,持续加大对环境监测工作的投入,建立起利用大数据和云计算等先进技术的“1831”生态环境监控系统。  在

ICPMS实验分析实用指南

  ICP-MS全称是电感耦合等离子体质谱仪,可以用于物质试样中一个或者多个元素的定性、半定量和定量分析;能测定周期表中90%的元素,特别是对金属元素分析擅长,他和ICP-OES、AAS是化学元素分析的常用的三种仪器,其中ICP-MS的检测限低,可以达到PPT(10的负12次方)级。

实用的高压绝缘电阻测试仪操作指南

高压绝缘电阻测试仪 工作原理:高压绝缘电阻 测试仪 由中大规模集成电路组成。本表输出功率大,短路电流值高,输出电压等级多(每种机型有四个电压等级)。工作原理为由机内电池作为电源经DC/DC变换产生的直流高压由E极出经被测试品到达L极,从而产生一个从E到L极的电流,经过I/V变换经除法器完成运算直接将

一文掌握氮吹仪的技巧,实验节省80%时间

  氮吹仪也叫氮气吹干仪,自动快速浓缩仪等,能够将氮气快速、连续、可控地吹到加热样品表面,实现大量样品的快速浓缩。氮吹仪代替传统的旋转蒸发仪对样品进行浓缩已经被越来越多的人认可并接受。  氮吹仪加快蒸发有两个方法:  加强它周围的空气流动和它的温度。氮气还是一种不活泼的气体,也能起到隔绝氧气的作用,

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 氮吹仪也叫氮气吹干仪,自动快速浓缩仪等,能够将氮气快速、连续、可控地吹到加热样品表面,实现大量样品的快速浓缩。氮吹仪代替传统的旋转蒸发仪对样品进行浓缩已经被越来越多的人认可并接受。  氮吹仪加快蒸发有两个方法:  加强它周围的空气流动和它的温度。氮气还是一种不活泼的气体,也能起到隔绝氧气的作用,防

高效称量的实用指南——制药行业明智之选

制药公司在满足合规性方面投资巨大又耗费时间。效率问题和具体瓶颈问题的确认是提高绩效的关键,采用自动化和软件解决方案可使工作流程标准化并减少动手时间和书面工作。以下会介绍常见的问题。

一文掌握常用高效液相色谱柱SOP

  为啥要学习使用高效液相色谱柱?  色谱柱的使用和保养:液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成,其中液相色谱柱的正确安装和使用,是液相色谱工作的关键;也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路,建立高效液相色谱柱日常维护与保养规程,保证能正常使用。  液相色谱柱的安装  1

一文教您掌握可视熔点仪的操作规程

 熔点是物质的物理常数,在有机物的鉴定中,熔点的测定很重要。熔点与物质的纯度有着特定的关系,当物质含有杂质时,熔点会降低。因此,测定物质的熔点可以反映物质的纯杂程度。  可视熔点仪是辨认物质本性的基本手段,也是纯度测定的重要方法之一。因此,在化学工业研究中据有重要地位,是生产药物、香料、染料及其他有

国内首部!这一方法学指南正式发表

近日,四川大学华西医院临床流行病学与循证医学中心研究员孙鑫、副研究员王雯团队在《军事医学研究》上发表方法学指南。该指南系统构建了在真实世界环境下,变量识别的算法开发、验证、评价一体化方法框架和关键技术,是国内首部基于真实世界数据的变量识别与标准化方法学指南。以医院电子病历数据为代表的常规收集健康医疗

重庆CACLP-2024:观众注册全攻略,一文掌握!

  第二十一届中国国际检验医学暨输血仪器试剂博览会(CACLP)及第四届中国国际IVD上游原材料制造暨流通供应链博览会(CISCE)将于2024年3月16-18日在重庆国际博览中心举行。超百场中外学术活动将于3月15-17日同期举办。 CACLP·CISCE 2024观众预登记 限时免费下载智能观展

庞国芳院士:谁掌握数据资源,谁就掌握了主动权

  高水平科技自立自强离不开原始创新,真正的原始创新来自基础研究,而可靠的数据资源是基础研究和原始创新的重要支撑。谁掌握数据资源,谁就掌握了原始创新的主动权和科技创新的战略先机。  “谁能把握大数据、人工智能等新经济发展机遇,谁就把准了时代脉搏。”习近平总书记一直高度重视信息化发展和大数据建设。在食

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原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/8/507564.shtm

RTqPCR需要注意的那些事

rt-qpcr需要注意的那些事,你都了解吗?在rt-qpcr实验中不论是实验小白还是老司机,都会遇到各种不同的实验问题。解决问题不仅要浪费额外的样品和试剂,还要占用大量的时间一遍遍的重复和分析,真是被实验折磨得焦头烂额。那实验过程中应该注意哪些细节呢?小翊精心为大家总结了rt-qpcr实验的注意事项

教你掌握检测氮含量的方法

  测定氮含量的方法今天分三部给大家讲解,分别是测定前准备,测定中的实验步骤和测定后的结果计算   。   一、测定前所需要的材料及设备   首先准备各种干燥、过筛(60~80目)的植物样品,所需要的仪器设备:消化管,定氮蒸馏装,三角烧瓶,微量滴定管,量筒,容量瓶,烧杯,移液管。   二实

掌握精密天平的使用方法

精密天平在衡器中属于重量zui的一中产品,精密天平不止一种产品,但是在内使用zui多销量zui好的产品是电子精密天平。在近代国内所发展的重点对象精密天平也在其中,所以精密天平在国内的技术上还在不断地提升。属于传感技术、数字电子技术、模拟电子技术以及微处理技术所综合发展的一个产品。        我们

简单实用的细菌快速检测方法

  目前有哪种微生物测试方法能够在6~8个小时内显示食品和食品生产环境清洁度的微生物水平?   食品和饮料生产公司的答案是令人失望的:没有!   细菌总数、大肠菌群以及大肠杆菌平板计数通常可以对食品样品以及表面处理环境的微生物水平进行评估,然而检测结果需要在24~72小时之后获得。而采用显色

了解HPV,需掌握这五个数据

 宫颈癌又名子宫颈癌,是指发生在宫颈阴道部或移行带的鳞状上皮细胞,与颈管内膜的柱状上皮细胞交界处的恶性肿瘤,其死亡率仅此于乳腺癌。全球每年新 发病例将近60万人,死亡率约50%-60%,而我国每年的新增病例数约为13.5万人,其中死亡率约为59%-65%。2008年德国科学家 Harald

数据流通市场的基础理论与治理方法-项目指南

  2024年度国家自然科学基金指南引导类原创探索计划项目  “数据流通市场的基础理论与治理方法”项目指南  以数据要素为核心引擎推动数字经济深化发展,有利于构建新发展格局、建设现代化经济体系、构筑国家竞争新优势。党的二十届三中全会明确提出,要完善要素市场制度和规则、推动生产要素畅通流动、培育全国一

方法、标准实用才是王道

顾名思义,粮油安全研究室主要目的就是保障粮油食品的质量安全,包括对粮油污染物的检验、监测、质量控制,主要涉及到生物毒素和重金属的检测。据悉,粮油安全研究室主要研究内容有:检测方法的开发、检测标准的制修订、质控标准物质的研究、快检产品的评价及开发。那么,针对粮油检测主要开发了哪些重金属检测方法?

一文读懂化学物质环境风险评估技术方法框架性指南

  评估化学物质环境风险,是安全利用化学物质的先决条件。化学物质环境风险评估是通过分析化学物质的固有危害属性及其在生产、加工、使用和废弃处置全生命周期过程中进入生态环境及向人体暴露等方面的信息,科学确定化学物质对生态环境和人体健康的风险程度,为有针对性地制定和实施风险控制措施提供决策依据。  一、适

物位计的实用

  微波物位计使用的微波频率有三个频段:C波段(5.8~6.3GHz)、X波段(9~10.5GHz)、K波段(24~26GHz)。制造商根据自己的技术及国家批准的频率来设计产品。  物位测量中的微波一般是定向发射的,通常用波束角来定量表示微波发射和接收的方向性。波束角和天线类型有关,也和使用的微波频

物位计的实用

  物位测量中的微波一般是定向发射的,通常用波束角来定量表示微波发射和接收的方向性。波束角和天线类型有关,也和使用的微波频率(波长)有关。   对于常用的圆锥形喇叭天线来说,微波的频率越高,波束的聚焦性能越好,即波束角小,在实际使用中这是十分重要的,低频微波物位计有较宽的波束,如果安装不得当,将会

-生命科学不容错过的几款App

  最近,Biotechniques杂志介绍了一些简单实用的App和网站,现在各位学霸可以随时随地进行科研了。从分子克隆到qPCR,从线虫到质粒,都在你的掌握之中。   1. Cloning Bench   这款多功能软件是分子克隆的好帮手,提供了实验设计和进行所需的基本工具,可以帮你摸索实验条