定量PCR标准化，挑战在哪里？
六年前，科学家针对实时定量PCR实验中的种种问题，提出了一套统一的评估标准——MIQE指南。两年前，数字PCR版本的MIQE指南也出炉。然而，认真执行MIQE指南的实验室并不多。定量PCR标准化，挑战在哪里？Jeffrey Perkel博士近日在《BioTechniques》上讨论了这一问题。 当零基础的人们准备开展定量PCR时，大多会请教师兄师姐。不过，对于数字PCR（dPCR）这种比较新的技术，周围的人未必有经验。同时，这种技术不像传统PCR那么简单，需要用到专门的仪器、操作和变量。Perkel认为，若未经培训的研究人员利用dPCR来定量mRNA的丰度，他们也能获得一个数字，但这个数字是否能准确代表样品本身，就不好说了。 幸运的是，一组研究人员已经开发出dPCR实验的路线图，称为digital MIQE指南。这个指南能够指导研究人员开展dPCR，包括实验设计和分析。digital MIQE论文的主要作者，LGC公司的......阅读全文
银染实验用水指南
SDS聚丙烯酰胺凝胶染色是蛋白质研究的一个基础方法。染色方法有很多，实际应用中，考马斯亮蓝染色（考染）和银染是运用的最多的方法。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色，它与蛋白质结合后变为蓝色，结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。银染实验中
实验小鼠运输指南（一）
大家好，我是一只来自邦耀实验室SPF级动物房的基因编辑小鼠，听实验室的哥哥姐姐们说现在外面已经30多度的高温了，在外面呆几分钟就能汗流浃背。虽然我没有汗腺，但是光想象一下就觉得鼠生艰难啊…不过上完最后一节课就要放暑假，去一个新的环境、参与完成一项伟大的实验了~但是我们中有的是短途货车出行，有的是长途
实验小鼠运输指南（二）
2. 装载密度运输时注意降低运输箱盒中动物的密度，保证动物舒适地站立、躺卧或转身，可减轻应激反应。例如规格450×250×160 mm的小型运输箱内放入的小鼠总量最好不超过10只，规格600×400×200 mm的大型运输箱内放入的小鼠总数最好不超过20只。如果运输的小鼠周龄较大或者在饲养过
Northern－Blotting－实验操作指南
实验概要本文介绍了Northern Blotting实验详细操作流程。实验材料1. 试剂盒提供NorthernMax (Formaldehyde-Based System for Northern Blots)[Catlog#1940]6ml -20℃ Formaldehyde Loa
实验动物采血完全指南
采血方法的选择，决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。例如，研究毒物对肺功能的影响、血液
实验动物饲养用水指南
在生命科学、医学和药学研究领域，对一些难以在人身上进行的工作，需要使用动物来代替人类进行实验研究。为了保证实验科学、准确和重复性，我们需要将研究的生理或病理活动相对稳定地显现在标准化的实验动物身上。这些标准化的动物就称之为实验动物。常见的实验动物包含：秀丽线虫(caenorhabditis eleg
有机合成实验入门指南－实验装置设置
实验检查玻璃仪器和反应设备。反应瓶是否有裂纹，滴液漏斗是否渗漏，油浴和磁力搅拌是否正常等。搭建装置要重心平稳、安全，并保持十字平衡，各种反应一定在反应瓶下面放置保护的容器，以防发生意外泄漏（搅拌子打破瓶子，反应过速外溢）而无法回收原料及产品。选择合适的反应瓶：对于均相反应，液面不超过容器的2/3；对
核酸分离纯化实验技术指南
核酸分离纯化实验技术指南： 总RNA提取常见问题分析 RNA降解 1. 新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如 果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。 2. 新鲜组织：某些富含
荧光定量PCR实验指南4
3.8 防止残余（Carry-over）污染PCR易受污染的影响，因为它是一种敏感的扩增技术。小量的外源DNA污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时，会发生共同来源的污染。这称之为残余污染。从其他样品中纯化的DNA或克隆的DNA也会是污染源（非残余污染）。可以在PCR过
荧光定量PCR实验指南5
您可以选择荧光染料SYBGREEN体系，具体请参照说明书。您可灵活使用20-50ul间其他体积，注意保证终浓度相同。A2010A0106试剂盒:反应体系终浓度(自配热启动荧光系统)：1-2U的hotstartTaq酶、3-5.5mM的Mg2+ 、0.2mM的dNTPs、1×PCRbuffer（A
荧光定量PCR实验指南1
第一部分一、基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成；4、反应体系的配制；5、反应条件的设定；6、反应体系和条件的优化；7、荧光曲线和数据分析；8、标准品的制备； 二、技术关键： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；
荧光定量PCR实验指南3
3.3 引物、探针的纯度和稳定性定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。部分应用需要纯化，以除去在合成过程中的任何非全长序列。这些截断序列的产生是因为DNA合成化学的效率不是100％。这是个循环过程，在每个碱基加入时使用重复化学反应，使DNA从3'到5'合成。在任何一个循环都
荧光定量PCR实验指南2
2.3TaqmanMGB探针设计介绍MGB探针的优点：²MGB探针较短(14-20bp)，更容易找到所有排序序列的较短片段的保守区。²短片段探针(14-20bp)加上MGB 后，Tm值将提高10℃，更容易达到荧光探针Tm值的要求。²MGB探针的设计原则²探针的5’端避免出现G，即使探针水解为单个碱基
PCR实验技术指南(引物设计)
所谓“工欲善其事，必先利其器”，这年头手工设计引物的人似乎不多，还是用软件方便些，防止你一不小心看走眼，丢一个碱基，同时计算起来也方便。设计软件有很多，既可以在线设计(如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi)，
滴定理论指南－滴定实验的定义、理论和实践指南
本手册首先介绍基本的滴定定义，然后通过示例、图示和评估原则介绍了主要的滴定类型。滴定是一种分析技术，可以定量测量样品中特定可溶性物质的含量。提供了解滴定所需的基本知识，说明各种不同的滴定类型，并解释评估原则。特别提供了正确进行滴定所需的所有必要信息，以便获得可靠的结果。最后，简短介绍与滴定相关的化学
实验室纯水器选型指南
水是我们每天在实验中接触到的最多的试剂。水是非常好的溶剂，在很多实验中水作为试剂直接参与反应，水也是常用的传导热的工具，我们的整个实验过程可以说无法离开水。因为水的普遍和易得，往往让我们忽略了它对实验结果产生的影响。正确选择纯水仪器可以帮助研究人员避免许多不必要的麻烦。在挑选一款合适的纯水器之前，我
分子克隆蛋白表达实验指南（十二）
– Note: The yield of fusion protein can be estimated by measuring the absorbance at 280 nm. The GST affinity tag can be approximated by 1 A280 Å 0.5
分子克隆蛋白表达实验指南（十五）
LB固体培养基 Tryptone 1g Yeast Extract 0.5g NaCl 1g Agar 1.5g 加蒸馏水至总体
分子克隆蛋白表达实验指南（十八）
15％胶 水1.11.872.33.43.854.65.76.99.211.5 30％聚丙烯酰胺混合液2.54.2557.58.751012.5152025 1.5M Tris(pH=8.8)1.32.212.53.84.5556.37.
分子克隆蛋白表达实验指南（十三）
7． 电泳结束后，按比例从胶上割下相应约1cm条带（当按比例的条带割下后可相应的向两边再割一点，但是电透析时中间和两边的胶必须分开透析），用镊子或尺子将胶碾碎成2mm见方的小块。 8． 将碎块小心加入电透析tube中，200V，120～150min。 9． 移出放电透析tube的架子，
分子克隆蛋白表达实验指南（十四）
RbCl制备感受态细胞 需准备的灭菌器具和培养液： SOB，Buffer 1，Buffer 2，3×200ml广口瓶，1.5ml EP管，1×500ml离心瓶（按200ml摇菌量计算），2×50ml离心管，2×移液管（用于加Buffer 1），液氮，冰 离心管，EP管，移液管使用前均需要放
实验室纯水器选型指南
水是我们每天在实验中接触到的最多的试剂。水是非常好的溶剂，在很多实验中水作为试剂直接参与反应，水也是常用的传导热的工具，我们的整个实验过程可以说无法离开水。因为水的普遍和易得，往往让我们忽略了它对实验结果产生的影响。正确选择纯水仪器可以帮助研究人员避免许多不必要的麻烦。在挑选一款合适的纯水器之前，我
分子克隆蛋白表达实验指南（十六）
Amp(50mg/ml) 溶解1g Amp于足量的水中，最后定容至20ml。分装成小份于-20℃贮存。常以20～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基，1:1000比例稀释 Kan(50mg/ml) 溶解1g Kan于足量的水中，最后定容至20ml
分子克隆蛋白表达实验指南（三）
若有非特异性条带，可进行Touchdown PCR，提高引物的特异性。 PCR反应条件： 1 94C 5min 2 94C 45s 3 65C 45s 退火温度视
分子克隆蛋白表达实验指南（十）
13．连接产物转化DH5α（预开42C水浴） 与T载体转化相同，先转化DH5α，筛选及扩增目的重组质粒 转化DH5α后挑6～8个菌落验证，验证项目： 1． 目的基因引物PCR验证 2． 表达载体引物PCR验证 3． Step2中PCR产物胶回收后，以胶回收为模板、
实验室马弗炉安全操作指南
高温炉是一种通用的加热设备，主要供实验室、工矿企业、科研单位作元素分析测定和合金钢制品、各种金属机件正火、淬火、退火等热处理之用，还可作金属、陶瓷的烧结、溶解、分析、金刚石切割刀片进行高温烧结等高温加热用，也可以用在有机物固化烧结用。属周期作业电炉。与一些高温窑是有很大区别的，一般使用起来的实验空间
PCR实验技术指南之产物测序
1. DNA 直接测序：指直接分析不经分离的PCR 扩增产物，如果各个位点上碱基序列都是一致的，则所得信号是确定的，否则，在那些有相异碱基的位点出现模糊信号， 如果模板在多数情况下被正确扩增，则少数的突变将被掩盖，这是结果显示的是模板的序列.但是，当扩增的前几轮即出现错误扩增并被后续的循环积累，这时
分子克隆蛋白表达实验指南（十一）
SDS-PAGE胶样品排列： MarkerUII 37CUI’I’ Marker：低分子量蛋白marker，上样10ul UI：未诱导菌液，上样10ul。任取37C和20C中一个 I：诱导后对照，上样10ul UI’, I’代表G
分子克隆蛋白表达实验指南（一）
目的基因克隆包括保存用全长基因(gene for saving, GS)和表达用全长基因(gene for expression, GE)两部分。 这两部分所克隆的基因都是全长片段，但克隆的策略及目的不同。直接用精确克隆(及引物从基因CDS两端开始)很难找到高效价的引物，且cDNA中目的基
分子克隆蛋白表达实验指南（七）
目的基因表达 14．快速诱导表达 快速诱导目的是为检测该重组质粒在BL21中是否能被诱导表达重组蛋白，并确定在不同IPTG浓度蛋白诱导效率的差异。 5． 挑单克隆菌落于7ml含有相应抗生素LB培养液的50ml培养管中，37C振荡培养过夜（8-16h）。 6． 37C，1mM