基因枪应用技术问答解疑
1. 基因枪转化法对受体有啥要求?基因枪对动物:任何可暴露于基因枪口外的组织(皮肤、器官)细胞、外植体和器官培养;植物:田间和温室使用、植物培养细胞和外植体;酵母、细菌、其它微生物细胞器、叶绿体、线粒体;受体广泛。2. 基因枪(颗粒轰击法)相比传统的转化那些优势?简单快速功能灵活,各类细胞类型通用只需要少量的DNA和细胞能进行多质粒共同导入能输送大片段DNA没有无光的基因或蛋白被转导3. 基因枪都应用哪些方面比较多?基因表达研究、基因治疗、遗传免疫、神经细胞染料标记、遗传育种4. 基因枪转化过程中气源对人体是否有伤害?基因枪转化过程中使用的气源一般是纯度比较高的氮气或者氦气,氮气占空气的74% 完全无害= = 氦气稀有气体,比氮气更稳定,不发生化学反应(除了物理方法)5. 作为转化的动力源氮气和氦气哪个更好?氢气易燃易爆 氧气助燃且可能影响宿主 ,氦气是惰性气......阅读全文
基因枪法介绍
基因枪法,又称粒子轰击(particle bombardment),高速粒子喷射技术(High-velocity particle microprojection)或基因枪轰击技术(gene gun bombardment),是由美国Cornell大学生物化学系John.C.Sanford等于198
基因枪技术介绍
基因转移技术是一种将外源基因以在体(in vivo)或离体(in vitro)的方式导入到靶细胞核内的技术, 属于基因工程技术(亦称重组DNA 技术)的一个重要组成部分。基因工程技术以分子生物学等学科发展为基础, 使人类拥有了构造生物遗传物质新组合的能力。对在体方式而言, 基因转移技术需要跨越细胞外
基因枪法的作用
基因枪法,又叫粒子轰击细胞法或微弹技术。基因枪的作用是用压缩气体(氦或氮等) 动力产生一种冷的气体冲击波进入轰击室(因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤),把粘有DNA 的细微金粉打向细胞,穿过细胞壁、细胞膜、细胞质等层层构造到达细胞核,完成基因转移。只有很少部分的细胞符合这样的要求,大多数会
什么是基因枪?
基因枪技术, 又被称为生物弹道技术(Biolistic Technology) 或微粒轰击技术(Particle Bombardment Technology),是 用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒直接送入完整的组织或者细胞中的一种技术。它是基因转移技术中的一种方法。其
基因枪的历史
基因枪的历史可以追溯到1987年。第一代基因枪是台式基因枪,其中火药型台式基因枪是基因枪中最原始的类型。最早的基因枪是由美国康奈尔大学Sanford于1987年与该校工程技术专家Wolf及Kallen合作研究出的一种基因转移的新方法。该方法一经发明便在学界崭露头角,Klein等人于1987年最早应用
什么是基因枪法?
基因枪法,又叫粒子轰击细胞法或微弹技术。基因枪的作用是用压缩气体(氦或氮等) 动力产生一种冷的气体冲击波进入轰击室(因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤),把粘有DNA 的细微金粉打向细胞,穿过细胞壁、细胞膜、细胞质等层层构造到达细胞核,完成基因转移。只有很少部分的细胞符合这样的要求,大多数会
基因枪操作步骤
微弹制备(金粉母液配制) (1)称取60mg金粉加入Eppendorf管。 (2)加入1mL 75%乙醇,充分涡旋,静置15min,1500rpm离心5min。 (3)弃上清,加入1mL无菌水,充分涡旋,1500rpm离心5min。重复3次。 (4)弃上清,加入1mL无菌
基因枪的分类
这一方法是依靠一种基因枪来帮助导入外源基因。基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。其基本原理是通过动力系统将带有基因的金属颗粒(金粒或钨粒),将DNA吸附在表面,以一定的速度射进植物细胞,由于小颗粒穿透力强,故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组,从而实现稳定转化的目的。它具有
手提基因枪和台式基因枪应用范围有哪些区别?
手提基因枪主要应用于活体或者户外植物以及需要贴壁轰击的受体。台式主要适用于组织,或者外植体以及细胞器、叶绿体、线粒体。原理没有区别主要是受体选择上,原则上可以通用。
基因枪法转化小麦实验——使用-PDS1000/He-基因枪轰击
实验材料金粉试剂、试剂盒乙醇消毒液实验步骤注意:由于基因枪通过高压使粒子加速到极高的速度,故操作基因枪时应采取适当的安全措施并且佩戴安全眼镜。在任何使用基因枪转化的实验中,必须设置对照检测分化和选择效率(见注 40) 。( 1 ) 根据 PDS-1000/He (见图 4.2 ) 基因枪操作指南操
基因枪技术技术简介
基因转移技术是一种将外源基因以在体(in vivo)或离体(in vitro)的方式导入到靶细胞核内的技术, 属于基因工程技术(亦称重组DNA 技术)的一个重要组成部分。基因工程技术以分子生物学等学科发展为基础, 使人类拥有了构造生物遗传物质新组合的能力。对在体方式而言, 基因转移技术需要跨越细胞外
基因枪法转化小麦实验
实验材料幼胚盾片 试剂、试剂盒乙醇 漂白消毒剂
什么是基因枪技术?
基因枪技术, 又被称为生物弹道技术(Biolistic Technology) 或微粒轰击技术(Particle Bombardment Technology),是 用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒直接送入完整的组织或者细胞中的一种技术。它是基因转移技术中的一种方法。其
基因枪操作程序
基因枪技术又叫做微粒轰击技术或者生物弹道技术,是通过高压气体加速或者huo药爆炸直接往完整的组织或者细胞中送入包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒的一种技术。 基因枪的操作方法 准备材料 将一薄层培养基铺在9cm培养皿上,在培养皿中心平铺材料,直径在3cm范围内。 处理金粉
基因枪的操作指南
基因枪技术又叫做微粒轰击技术或者生物弹道技术,是通过高压气体加速或者huo药爆炸直接往完整的组织或者细胞中送入包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒的一种技术。 基因枪的操作方法 准备材料 将一薄层培养基铺在9cm培养皿上,在培养皿中心平铺材料,直径在3cm范围内。 处理金粉
基因枪法转化大麦实验
实验材料麦穗 试剂、试剂盒植物凝胶 乙醇
基因枪技术的历史
基因枪的历史可以追溯到1987年。第一代基因枪是台式基因枪,其中火药型台式基因枪是基因枪中最原始的类型。最早的基因枪是由美国康奈尔大学Sanford于1987年与该校工程技术专家Wolf及Kallen合作研究出的一种基因转移的新方法。该方法一经发明便在学界崭露头角,Klein等人于1987年最早应用
基因枪法转化大麦实验
实验材料麦穗试剂、试剂盒植物凝胶乙醇次氯酸钠蒸馏水亚精胺仪器、耗材EP 管移液枪实验步骤1. 组织培养基的准备( 1 ) 首先准备所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 2 ) 。( 2 ) 所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀,调到合适
影响基因枪转化的因素?
首先是气源的压力大小,以及射击距离,实验证明轰击次数太多也会造成对细胞的伤害,因此一般以2-3次为宜。
基因枪法转化小麦实验(一)
实验材料 幼胚盾片试剂、试剂盒 乙醇漂白消毒剂仪器、耗材 诱导培养基实验步骤 下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法,幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种,幼穗转化比幼胚盾片转化更有效,如普通小麦品种 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier,以及其他小
转基因技术基因枪法简介
利用火药爆炸或高压气体加速(这一加速设备被称为基因枪),将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中,然后通过细胞和组织培养技术,再生出植株,选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与农杆菌转化相比,基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制。而且其载体质粒的构建
基因枪活体植物基因转染
本实验所用基因传递系统(基因枪)原理:低压基因递送系统(GDS-80 基因枪 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1),根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计,是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图1中所示,当左侧出现输入气体压力时(如:氦气),两个腔室之间将形成巨
基因枪法转化大麦实验(一)
实验材料 麦穗试剂、试剂盒 植物凝胶乙醇次氯酸钠蒸馏水亚精胺仪器、耗材 EP 管移液枪实验步骤 1. 组织培养基的准备( 1 ) 首先准备所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 2 ) 。( 2 ) 所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀,
基因枪的操作方法
基因枪的操作方法 1.材料准备 在9cm2培养皿上铺一薄层培养基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等)平铺于培养皿中心,直径在3cm范围内。 2.金粉的处理 取60mg金粉或钨粉置于离心管中,加入lml无水乙醇,充分振荡3min,以9615g
基因枪法转化大麦实验(二)
4. 粒子轰击幼胚(1) 幼胚渗透处理轰击前,取分离 1 天后的幼胚,放在高渗培养基中处理 4 h。每皿 20~30 枚幼胚,置于培养皿中心 1.6 cm2 范围内,盾片朝上。胚可以放得紧密一些,但相互之间不要碰到。轰击之后幼胚继续高渗处理 16 h。(2) 基因枪准备① 基因枪所有组件和内部的枪体
基因枪法转化小麦实验(二)
实验材料 BIO-RAD 亚微米金粉试剂、试剂盒 无水乙醇TE 缓冲液亚精胺仪器、耗材 离心管实验步骤 1. 准备金粉颗粒( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉(0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中,加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min,短暂离心 3s,然后弃上清。
基因枪的定义与原理
基因枪法是一种基因导入仪技术,它把遗传物质或其他物质附着于高速微弹直接射入细胞、组织和细胞器,是目前国际上最先进的基因导入技术。气体基因枪以压缩气体(氦或氮)转换成的气体冲击波为动力,使气体基因枪枪产生一种“冷”的气体冲击波进入轰击室,因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤。气体基因枪可在广泛的
基因枪的使用方法
1、材料准备 在9cm2培养皿上铺一薄层培养基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等)平铺于培养皿中心,直径在3cm范围内。 2、金粉的处理 取60mg金粉或钨粉置于离心管中,加入lml无水乙醇,充分振荡3min,以9615g离心1rain,去上清,
基因枪的使用方法
1、材料准备 在9cm2培养皿上铺一薄层培养基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等)平铺于培养皿中心,直径在3cm范围内。 2、金粉的处理 取60mg金粉或钨粉置于离心管中,加入lml无水乙醇,充分振荡3min,以9615g离心1rain,去上清,
基因枪技术定义与原理
基因枪法是一种基因导入仪技术,它把遗传物质或其他物质附着于高速微弹直接射入细胞、组织和细胞器,是目前国际上最先进的基因导入技术。气体基因枪以压缩气体(氦或氮)转换成的气体冲击波为动力,使气体基因枪枪产生一种“冷”的气体冲击波进入轰击室,因此可免遭由“热”气体冲击波引起的细胞损伤。气体基因枪可在广泛的