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质谱常用离子源

无信号/荧光强度弱 不正确的信号补偿:检查流式细胞仪阳性单一颜色对照是否正确,通道和补偿设置是否能正确地捕获所有粒子;没有足够的抗体来检测:增加抗体的量/浓度;无法接近细胞内目标:检查目标蛋白是否在细胞内。 对于胞内染色,确保有足够的通透性。为防止细胞表面蛋白质的内化,该过程应用冰冷的试剂,在冰上或 4 °C进行,以终止一切反应。加入叠氮钠可防止表面抗原的修饰和内化带来的荧光强度的损失。对于细胞系染色,胰蛋白酶可以引起细胞表面蛋白质的内化,尤其是细胞表面分子,可能需要更温和的分离方法; 细胞内染色结合荧光分子太大:对细胞内染色实验,荧光分子应具有较小的分子量。大分子量荧光染料会降低抗体的动力和其进入细胞的可能性; 激光器未对齐:确保流式细胞仪的激光器正确对齐,必要时通过运行液流检查微球来调整路线。如果激光器不能正确对准或发生漂移时,您可能需要考虑联系此机的客服; 目标蛋白不存在或处于低水平表达:确保组织或细胞类型表......阅读全文

流式抗体选择

很多朋友面对各种各样颜色的流式抗体,在选择及搭配上就犯了难,在此我们需要了解下流式细胞仪的各个激发光及各个接收通道是如何工作的、常见的荧光素有哪些、这些荧光的特性是什么样的。了解了这些,选择抗体和搭配不同的颜色就变得非常简单了。我们再回过头来看看流式细胞仪的原理,熟悉一下流式细胞仪的光路系统。从这张

流式细胞术之染料选择那些事儿

很多朋友面对各种各样颜色的流式抗体,在选择及搭配上就犯了难,在此我们需要了解下流式细胞仪的各个激发光及各个接收通道是如何工作的、常见的荧光素有哪些、这些荧光的特性是什么样的。了解了这些,选择抗体和搭配不同的颜色就变得非常简单了。 我们再回过头来看看流式细胞仪的原理,熟悉一下流式细胞仪的光路系统。  

流式细胞术的3大要素

  一、流式细胞术的3大要素  1. 流式细胞仪:现在市面上有多种型号的流式细胞仪,但其基本结构都是相同的,分析性流式细胞仪有液流系统、光路系统、监测分析系统。  (1)液流系统  (2)光路系统  光路系统始于激光器,其分类分法很多,最常用的分类方法是根据其发射的激光的波长来分,如常见的有488n

流式细胞仪光源的那点事

激光是一种相干光源,它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照,是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。细胞处在快速运动的状态,每个细胞经过光照区的时间仅为微秒左右,每个细胞所携带荧光物质被激发产生荧光信号的强弱与被照射的时间和激发光的强度有关,只有细胞接受到足够的光照,才能产生相应可被检出的信号。通常小型流

跟着论文做实验:凋亡的多参数检测

  大家都知道,在细胞凋亡的早期,线粒体膜电位的下降是一个标志性的事件。而对于线粒体膜电位的检测,JC-1这种亲脂性阳离子染料是个很好的工具,也使用了很多年。  当线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,产生红色荧光;而当线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体的基质中,此

流式细胞仪荧光补偿调节方法

  荧光补偿是指修正荧光光学信号在探测器之间相互渗漏并被数字化检测的过程。自单激光双色分析出现后,此过程变得十分重要。每种荧光素分子都具有自身的光谱发射范围。这些发射光谱之间存在相互叠加,在某些情况下此现象十分明显。  举例来说,如下图为FITC与PE荧光发射光谱的叠加情况。在一个双探测器系统中,可

Cobolt激光器在生物分析和光学测量中的应用研究

瑞典Cobolt AB公司致力于研发生产半导体泵浦固体激光器和半导体激光器,波长范围覆盖:紫外、可见、近红外,因其优秀的性能特点和小巧紧凑的外形设计,广泛应用于:生物分析、拉曼检测、全息术、激光投影、RGB光源,得到广大科学实验室和OEM客户的认可。新势力光电携手Cobolt公司为中国客户提供高端的

肿瘤细胞的标记及活体荧光成像

摘要 以绿色荧光蛋白( GFP) 作为标记基因转入人类肺癌细胞系(ASTC2a21) , 经800 mg/ L G418 筛选, 获得5 株高表达细胞系. 利用流式细胞仪对GFP 表达的稳定性进行了初步研究, 结果表明本实验中有些细胞株间GFP 表达稳定性有显著差异( P < 0101) . 将稳定

多色流式实验荧光素的选择(一)

如今,流式细胞术已经成为一项功能强大的技术,可在数秒内对数千个单个细胞或其他颗粒的多项参数进行分析。在流式细胞分析中,荧光素受到一定波长的激光激发后,释放出的能量能发射出一定波长的荧光,因此我们在选择荧光素时应注意它们的激发波长和发射波长,以选择正确的激光器和荧光组合。随着多色流式细胞仪的出现,新荧

流式细胞仪入门

目录前言第1章 综述第2章 液流系统第3章 散射光信号及荧光信号  3.1 散射光信号   3.2 荧光信号第4章 光电系统  4.1 光平台   4.2 光学滤片   4.3 信号探测器   4.4 阀值第5 章 数据分析  5.1 数据采集及显示   5.2 设门   5.3 细胞亚群的数据分析