TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤

凋亡细胞的原位末断转移酶标记法(TUNEL法) 细胞凋亡的多步骤机制作用的最终环节是;细胞内源性核酸内切酶的激活而导致核染色质DNA双链的断裂。大量DNA片段暴露出的3羟基在末断转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)或DNA多聚酶的作用下,与生物素或地高辛标记的核苷酸结合,最终借助与卵白素或抗地高辛抗体结合的荧光素或HRP,使凋亡细胞被特异性地标记和显示出来。 TUNEL细胞凋亡试剂盒由美国罗氏公司提供 试剂1:酶浓缩溶液(EnzymeSolution) 试剂2:标记溶液(LableSolution) 试剂3:转化剂-POD(Converter-POD) 酶标记抗荧光素抗体(即用型) 试验所需其它试剂: 非石蜡切片: ·冲洗缓冲液:磷酸盐缓冲液(PBS) ·阻断溶液:0.3%H2O2甲醇溶液 ·......阅读全文

流式细胞术做凋亡的操作步骤和注意事项

流式样品的准备:DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞时加入3%小牛血清。1 培养或分离的细胞约110 6,离心沉淀后用0.3ml含10%小牛血清的PBS悬浮,移入1.5mlEP管中,加入0.7ml无水乙醇,置-20摄

流式细胞术做凋亡的操作步骤和注意事项

流式样品的准备:DNA含量的测定:用本法可以测定细胞周期、细胞倍体和凋亡,在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片,建议在固定细胞时加入3%小牛血清。1 培养或分离的细胞约110 6,离心沉淀后用0.3ml含10%小牛血清的PBS悬浮,移入1.5mlEP管中,加入0.7ml无水乙醇,置-20摄

流式细胞仪在细胞凋亡检测应用

细胞凋亡的检测方法众多,流式细胞仪 检测凋亡,是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此,具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。下面是一幅凋亡过程图。在凋亡诱导剂的作用下,首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体,线粒体 

流式细胞仪检测细胞凋亡

细胞凋亡的检测方法众多,流式细胞仪检测凋亡,是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此,具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。在凋亡诱导剂的作用下,首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体,线粒体的功能发生衰退;后是cas

用流式细胞仪检测细胞凋亡

  细胞凋亡的检测方法众多,流式细胞仪检测凋亡,是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此,具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。在凋亡诱导剂的作用下,首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体,线粒体的功能发生衰退;后是c

用流式细胞仪检测细胞凋亡

细胞凋亡的检测方法众多,流式细胞仪检测凋亡,是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此,具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。在凋亡诱导剂的作用下,首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体,线粒体的功能发生衰退;后是cas

生物凋亡试剂盒AP101检测步骤

联科生物凋亡检测试剂盒(Annexin V/PI apoptosis kit,Cat#:AP101)是用FITC标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪,荧光显微镜或其他荧光检测设备进行检测。本试剂盒还提供了碘化丙啶(P

流式细胞术定量检测细胞凋亡3种方法的比较研究

细胞凋亡的定性检测依赖于形态学观察及DNA电泳,其定量检测则需借助于流式细胞检查。使用碘化丙啶(PI)染色检测DNA含量是最早出现的凋亡定量检测方法[1]。进入90年代,检测DNA断裂点的TUNEL(Terminal deoxylnucleotidyl transferase mediated-dU

流式细胞术定量检测细胞凋亡的3种方法研究比较

细胞凋亡的定性检测依赖于形态学观察及DNA电泳,其定量检测则需借助于流式细胞检查。使用碘化丙啶(PI)染色检测DNA含量是最早出现的凋亡定量检测方法[1]。进入90年代,检测DNA断裂点的TUNEL(Terminal deoxylnucleotidyl transferase mediated-dU

噪音计操作步骤及操作步骤

  噪音计-操作步骤  1、打开噪音计携带箱,取出噪音计,套上传感器。  2、将噪音计置于A状态,检测电池,然后校准噪音计。  3、对照常见的环境声级大小表,调节仪器的测量量程。  4、测量:可以用快(测量声压级变化较大的环境的瞬时值)、慢(测量声压级变化不大的环境中的平均值)、脉冲(测量脉冲声源)

DNA提取试剂盒的工作原理及操作步骤

一、RNA和DNA提取:裂解:裂解公式可能因您要提取 DNA 还是 RNA 而异,但共同点是含有高浓度离液盐的裂解缓冲液。Chaotropes(离液剂)的作用:Chaotrope会破坏氢键及疏水间的相互作用。离液盐包括盐酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸锂。洗涤剂:除了离液剂外,裂解缓冲液中通常还有一些去

流式细胞仪检测实验_TUNEL组织切面中的凋亡细胞原位杂交

实验材料要分析的新鲜组织试剂、试剂盒 含1% (m V)多聚甲醛的PBS (低温揽拌溶解过夜用之前过滤)Tris缓冲盐(TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反应液TdT 地高辛(digo×igenin下同)-dUTP混合液2% (V V)马血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初级

流式细胞仪检测实验TUNEL组织切面的凋亡细胞的原位杂交

实验材料要分析的新鲜组织试剂、试剂盒 含1% (m V)多聚甲醛的PBS (低温揽拌溶解过夜用之前过滤)Tris缓冲盐(TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反应液TdT 地高辛(digo×igenin下同)-dUTP混合液2% (V V)马血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初级

定量分析晚期细胞凋亡中DNA片段的直接方法

多细胞生物是由高度组织化的细胞群落组成的,为了这个细胞群落的茁壮成长,重要的是1.通过复杂的细胞过程,如细胞增殖和凋亡,2.建立稳态。这两个过程中任何一个过程的不适当转变都会导致疾病。例如,神经元凋亡活性的增加是各种神经退行性疾病如阿尔茨海默氏症和帕金森氏症的根源。相反,凋亡机制的丧失会导致细胞过度

TUNEL分析实验——贴壁细胞的-TUNEL-染色

实验材料细胞试剂、试剂盒PBSTdT 反应混合液仪器、耗材Parafilm 膜实验步骤1. 用无菌镊子将一无菌盖玻片放入 35 mm 培养皿中。2. 将大约 1X104 细胞接种于无菌盖玻片上,培养 24~48 小时。凋亡诱导时,细胞铺满不超过 80%。如细胞贴壁不太好,可以用纤连蛋白、聚赖氨酸或血

拟南芥细胞培养原理及操作步骤

实验概要了解植物细胞悬浮培养的基本原理,通过实验掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。并通过实验练习和巩固无菌操作技术。实验原理植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。植物离体培养可产生愈伤组织。将疏松型的愈伤组织县浮在液体培养基中并

大鼠自然杀伤细胞(NKC)ELISA试剂盒使用操作步骤

大鼠自然杀伤细胞(NKC)ELISA试剂盒使用操作步骤:1,试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。2,实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。3,不用的其它试剂应包装好或盖好。4,使用一次性的吸头以免交叉污染,避免使用带金属部分的加样器。5,使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充

TUNEL检测的常见问题

a. 有些细胞或组织,例如平滑肌细胞或组织,nuclease或polymerase的酶活性水平较高,易导致出现非特异性的荧光标记。解决方法是,取细胞或组织后立即固定并且要充分固定,以阻止这些酶导致假阳性。b. 使用了不适当的固定液,例如一些酸性固定液,导致出现假阳性。建议采用推荐的固定液。c. TU

细胞ELISA操作步骤

Cellular ELISA ProtocolFormalin Fixed Cell Plates1. Trypsinize confluent flasks2. Pool and count cells3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes4. Resus

细胞凋亡检测操作流程2——BrdU检测凋亡细胞DNA断裂片段

凋亡检测操作流程二、 BrdU检测凋亡细胞DNA断裂片段相关试剂及组分:一步法: APO-DIRECT试剂盒(货号:556381): PartA(4°C保存)PartB(-20°C保存)PI/RNase A SolutionFITC-dUTPReaction BufferTdT EnzymeRins

TUNEL检测的常见问题

出现非特异性荧光标记a. 有些细胞或组织,例如平滑肌细胞或组织,nuclease或polymerase的酶活性水平较高,易导致出现非特异性的荧光标记。解决方法是,取细胞或组织后立即固定并且要充分固定,以阻止这些酶导致假阳性。b. 使用了不适当的固定液,例如一些酸性固定液,导致出现假阳性。建议采用推荐

关于TUNEL检测的常见问题分析介绍

  一、出现非特异性荧光标记  a. 有些细胞或组织,例如平滑肌细胞或组织,nuclease或polymerase的酶活性水平较高,易导致出现非特异性的荧光标记。解决方法是,取细胞或组织后立即固定并且要充分固定,以阻止这些酶导致假阳性。  b. 使用了不适当的固定液,例如一些酸性固定液,导致出现假阳

人粒细胞无形体病-(HGA)ELISA试剂盒操作步骤

我司ELISA试剂盒品质保证,质量优,价格实惠,是您生物实验的首选,如有需要可与我司销售人员联系。本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于检测人血清,血浆及相关液体样本中人粒细胞无形体病 (HGA)水平。实验原理:本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中人粒细胞无形体病 (HGA)。用纯

人抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒操作步骤

我司ELISA试剂盒品质保证,质量优,价格实惠,是您生物实验的首选,如有需要可与我司销售人员联系。本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗内皮细胞抗体(AECA)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗内皮细胞抗体(AECA)水平。用纯化的抗原包被微孔

细胞周期试剂盒Cell-cycle-staining-Kit中文操作步骤

试剂盒特点:1、独创的活细胞一步法检测,收集——洗涤——染色,简单快速   2、兼容固定细胞检测,改进的固定方法,更少细胞粘连,更小CV值   3、兼容流式和荧光显微镜分析,提供详细protocol固定细胞处理:1、收集细胞悬液,细胞数为2 × 10^5 ~ 1 × 10^6。离心沉淀细胞,去上清,

细胞凋亡检测方法简介

细胞凋亡是指细胞在生长到一定阶段及某些生理过程中,会受到多因素和机制的严格调控而进入死亡。这是一个动态的过程,会涉及一系列复杂的生化反应, 是一个需要酶参与的级联反应,同时也涉及不同基因的表达及调控、信号传导。其中有几项生理过程能被用来检测凋亡的发生,因此多参数分析法对于准确检测这一过程十分

细胞计数及活力测定原理和操作步骤

一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞 ,总细胞 中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞 一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损

流式细胞仪原理及操作步骤

  流式细胞仪原理及操作步骤:  流式细胞仪是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行精确分类,还能分离纯

流式细胞仪原理及操作步骤

流式细胞仪原理及操作步骤:流式细胞仪是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行精确分类,还能分离纯化某一群

流式细胞仪原理及操作步骤

流式细胞仪是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行精确分类,还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光