免疫细胞的分离技术
淋巴细胞的分离取肝素抗凝血1ml加Hanks 液1：1 稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2ml淋巴细胞分离液的试管内（注意勿与分离液混合，然后2000r/min 水平离心20min，管内分为4 层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞（图2—1）。用毛细管伸至单个核细胞层中（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks 液洗两次，每次2000r/min 离心10min。最后用RPMI l640 培养液将细胞配成2×106/m1 的细胞悬液备用。T 细胞及B 细胞的分离将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B 细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B 细胞，并用少量的RPMI l640 培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B 细胞。尼龙柱（塑料管）的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。......阅读全文
单细胞分离技术的方法比较
单细胞分离技术：流式细胞分选术（Flow Cytometry Sorting）：通过细胞表面标志物的特异性抗体标记细胞，利用流体力学和激光技术，对细胞进行快速、准确的分离和分选。激光捕获显微切割技术（Laser Capture Microdissection，LCM）：利用激光束从组织切片中精确地切
成纤维细胞的分离技术
实验概要本实验分离了成纤维细胞，所述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。实验步骤选择大约一半足孕时间的胚胎最好，10-13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 1. 胚胎的分离 1) 适用哺乳动物（仓鼠、小鼠和大鼠） a.采用认可的方案处死啮齿
抗体介导的细胞分离技术介绍
抗体介导的细胞分离技术主要有：抗体/补体介导细胞学溶解法、流式细胞仪细胞分选法、平面黏附分离法和免疫磁珠分离法等 。
免疫细胞电镜技术
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献，但由于光学分辨率的限制，不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此，Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法，为在细胞超微结构水平研究抗原 抗体反应提供了可能。在此基础上，相继发展了杂交抗
免疫球蛋白提取分离纯化技术
实验概要免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平，并进一步代表着B细胞的功能，因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。本实验对禽血清IgG和IgA进行了分离纯化。实验原理免疫球蛋白包括IgG、IgM、IgA、IgE和I
激光显微细胞分离技术
在基础医学研究中涉及越来越多的如某一疾病状态组织中，多种基因或遗传变化，区别发展中的组织细胞群以及疾病状态组织细胞，将有助于了解疾病发生的分子机制。因此，在下一代的分子分析方法将需要进入微观世界及自动化程度高。对某一特殊个体的切片进行遗传指纹图谱鉴定，将有助于诊断及指导治疗。 然而，即使是
详细介绍原代细胞分离技术
取人或动物体内（或胚胎）的组织，将其剪碎至1mm3的组织块，再采用的如下方法进行分离培养：一、悬浮细胞的分离方法1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。2、去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。3、用培养基
细胞分离技术是细胞培养的基本方法
从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋白酶 (Tryp
细胞培养的基本方法细胞分离技术（一）
细胞分离技术一、从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋
细胞培养的基本方法细胞分离技术（二）
1.悬浮细胞 ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。 ●以1×107到5×107细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中，再次悬浮细胞。 ●
关于红细胞的分离技术问题
（一）材料与试剂 1．肝素等抗凝剂2．3％明胶液 取明胶3g，溶于0.9％灭菌盐水100ml中，114.3℃灭菌10min，冷却后4℃冰箱保存。临用时，37℃预热10min。3．阿氏液 （二）操作方法1．采血抗凝，即为红细胞。由于红细胞与白细胞的比例相差悬殊，一般白细胞混杂在其中，忽略不计。2．根
血细胞分离技术的操作程序
（一）材料与试剂 1．抗凝剂 （1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。 （2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是
红细胞的分离技术操作程序
（一）材料与试剂1．肝素等抗凝剂2．3％明胶液 取明胶3g，溶于0.9％灭菌盐水100ml中，114.3℃灭菌10min，冷却后4℃冰箱保存。临用时，37℃预热10min。3．阿氏液（二）操作方法1．采血抗凝，即为红细胞。由于红细胞与白细胞的比例相差悬殊，一般白细胞混杂在其中，忽略不计。2．根据红细
细胞器分离和细胞脱核技术
一、破碎细胞的方法 1.杆状玻璃匀浆器法 •该匀浆器由一根端部表面磨砂的玻璃杆和一个内壁磨砂的玻璃套管组成。使用时，先用锋利的刀片把组织块切碎，然后把碎块加入套管中，用力使玻杆移动使组织细胞破碎。 2.高速组织捣碎机法 •使用时将4℃预冷的组织碎块或细胞悬液加入捣碎机的梅
原代细胞培养之——细胞分离技术（一）
原代细胞的分离和制作人或动物体内（或胚胎组织）由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下： 一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水
原代细胞培养之——细胞分离技术（二）
（2） 胶原酶（Collagenase）消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用PBS和含血清的
细胞免疫化学：免疫酶标技术
1） 直接法1．标本固定。2．PBS洗涤2×3分钟。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。4．正常血清（1：10）孵育，室温20分钟。5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6．PBS洗涤3×3分钟。7．DAB＋H2O2显色5～10分钟，镜下控制染色
CLS自体免疫细胞治疗技术的技术原理
CLS生物细胞疗法是分为DC与CIK两种细胞治疗。DC与CIK两种细胞是美国斯坦福大学最先研制的、具有高增殖能力和高细胞毒性杀伤肿瘤的免疫活性细胞，具有精确杀伤肿瘤细胞的作用。CLS自体免疫细胞治疗技术采用独特的双养双输法，对DC、CIK细胞双培养、双回输，临床应用取得良好的治疗效果。CLS自体
小鼠造血干细胞/祖细胞免疫磁性分离操作步骤
小鼠造血干细胞/祖细胞免疫磁性分离操作步骤： 1) 取小鼠骨髓用BD染色液制成约2×108单细胞悬液 2) 阻断：加入Ms Fc BlockTM置冰上15min,0.25mg/106细胞 3) 加入Lineage Panel中biotin-mAb, 每种2ml/ 106细胞,冰上15mi
基于粘附力的新型干细胞分离技术
近日，美国佐治亚理工学院、ARUNA生物医学公司以及密歇根大学等机构的研究人员开发出了一种名为µSHEAR（micro stem cell high-efficiency adhesion-based recovery）的新型干细胞分离技术，这一技术依据的是细胞间容易区分的粘附力物理差异。相关研
淋巴细胞的分离技术操作程序
（一）材料与试剂 1．淋巴细胞分层液有两种： （1）聚蔗糖—泛影葡胺液：聚蔗糖（polysucrose solution）,商品名Ficoll，分子量400 000，多配制成40±1％（W/V）水溶液，也有干粉出售。应用时，用蒸馏水配制9％溶液。泛影葡胺溶液(Meglumi
免疫酶细胞化学实验技术
免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色
免疫荧光细胞化学技术
免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons等（1950）建立，经过近43年的发展，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与亲合化学技术如葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激
单细胞分离技术大揭秘，值得收藏
单细胞分离是研究中困难的步骤之一，目前的分离策略主要分为三类：手动分离、荧光激活的细胞分选和微流体技术。 在进行单细胞转录分析之前，我们需要确定自己拿到了正确的细胞。如果你想要的细胞已经处于悬浮状态（比如循环肿瘤细胞），而且含量相对比较丰富，那么流式细胞分析将是你的理想选择。如果样本是实体组织，
免疫球蛋白提取技术：IgG的分离与提纯2
⑴ 区带电泳：玻片琼脂或醋酸纤维膜电泳均可。加样电泳后，只在γ—球蛋白的迁移部位出现一条带。操作时，同时可用全血清样品，不同浓度 (NH4)2SO4盐析样品进行电泳，以资比较。⑵ 琼脂双相双扩散鉴定：预先准备该IgG免疫异种动物所获的抗IgG血清。将IgG与抗 IgG血清进行双相双扩散，如IgG提纯
免疫球蛋白提取技术：IgG的分离与提纯1
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表着机体体液免疫的水平，并进一步代表着B细胞的功能，因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，但大多数
免疫细胞化学法的技术特点
免疫细胞化学是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术，根据抗原与抗体特异性结合的特点，检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。
细胞凋亡的免疫检测技术1
一、概述 细胞凋亡（apoptosis,Apo）是细胞增殖的反面，探讨的是细胞死亡的方式与机制。凋亡一词来源于希腊语。原指花瓣、叶片的脱落。自1972年Kerr首次提出细胞凋亡的概念以来，随着细胞生物学、免疫学和肿瘤学的研究发展，最近几年人们对细胞凋亡的重大理论意义和实际意义有了更深的理解。细胞
细胞凋亡的免疫检测技术2
（二）荧光标记法1．材料与试剂 采用德国Boehringer- Mannheim公司In Situ Cell Death Detection 试剂盒，或美国Oncor公司ApopTagTM试剂盒，包括：⑴ 生物素标记的-Dutp(Biotin-dUTP)或地高辛标记的-dUTP(Digoxingen
免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术的分类
1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。 3）按结合方式