细胞器分离和细胞脱核技术
一、破碎细胞的方法 1.杆状玻璃匀浆器法 •该匀浆器由一根端部表面磨砂的玻璃杆和一个内壁磨砂的玻璃套管组成。使用时，先用锋利的刀片把组织块切碎，然后把碎块加入套管中，用力使玻杆移动使组织细胞破碎。 2.高速组织捣碎机法 •使用时将4℃预冷的组织碎块或细胞悬液加入捣碎机的梅花玻璃杯中，至杯体积的1/3即可盖好玻璃杯盖，固定好带杆叶片刀，缓慢调整旋转速度，一般开机数十秒后，组织细胞即可被高速旋转的叶片刀破碎。但不宜时间过长，以防高速旋转产生热而导致分离物中的活性物降解，用冷却水降温更好。 3.超声波处理法 •超声波发生器能产生高强度的超声信号，经换能器传送至与之接触的溶液中，由声波形成冲击和振动而产生剪力，致使细胞破碎，动物组织肝、肾、胸腺、淋巴结、腹水细胞、红细胞、体外培养的细胞均可在短时间内破碎，因超声时可产热，应注意冰浴冷却，生物大分子如核酸和酶对超声敏感，一般不宜采用 4.化学裂......阅读全文
细胞器分离和细胞脱核技术
一、破碎细胞的方法 1.杆状玻璃匀浆器法 •该匀浆器由一根端部表面磨砂的玻璃杆和一个内壁磨砂的玻璃套管组成。使用时，先用锋利的刀片把组织块切碎，然后把碎块加入套管中，用力使玻杆移动使组织细胞破碎。 2.高速组织捣碎机法 •使用时将4℃预冷的组织碎块或细胞悬液加入捣碎机的梅
细胞组分和细胞器——细胞器分离
Labeling Microtubules (Molecular Dynamics Inc. )Microtubules are involved in many aspects of cell motion including propulsion, mitosis, growth, and o
细胞器分离原理
细胞器的分离,一般采用差速离心法,此法是利用细胞各组分质量大小不同,在离心管不同区域沉降的原理,分离出所需组分,分离得到的细胞器,其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定.细胞器（organelle）一般认为是散布在细胞质内具有一定形态和功能的微结构或微器官。但对于“细胞器”这一
单个核细胞的分离
实验概要外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。本实验介绍了两种单个核细胞的分离方法。实验原理PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密
如何分离各种各样的细胞器
细胞器的分离主要用到的是离心技术。主要用到：（一）、差速离心在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉
细胞、细胞器及组分的分离与观察1
叶绿体的分离与荧光观察一、实验目的了解叶绿体分离的一般原理和方法,并熟悉应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。二、实验原理叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体,其分离在等渗溶液（0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液）中进行,目的是为了防
细胞、细胞器及组分的分离与观察2
细胞器标记酶的测定是评价细胞器内膜组分和分离纯度的主要依据,如线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶,该酶使詹纳斯绿B染料保持在氧化状态呈现蓝绿色,从而使线粒体显色,而胞质中的染料被还原成无色。詹纳斯绿B是一种活体染料,能对动植物的细胞或组织在活体状态下进行无毒害的染色。由于染料（碱性染料）的胶粒表面带有
用淋巴细胞分离液分离单个核细胞
用淋巴细胞分离液分离单个核细胞1）分离外周血中的单个核细胞（PBMC）1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加等量含5～10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上，室温中，水平离心500×g 20分钟。此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞
差速离心法分离各种细胞器的原理
解析： 差速离心是指低速与高速离心交替进行，使各种沉降系数（不同的细胞器有不同的沉降系数）不同的颗粒先后沉淀下来，达到分离的目的。沉降系数差别在一个或几个数量级的颗粒，可以用此法分离。样品离心时，在同一离心条件下，沉降速度不同，通过不断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉
鼠肝细胞器的超速分离方法举例
Ⅰ.前处理：鼠肝匀浆，台式离心机1,000xg，10分，取上清，沉淀稀释后再1,000xg，10分，取上清，再重复一次取上清，三次上清液合并用于超速离心。Ⅱ. 密度梯度离心：日立超速离心机（各种型号）转头：P45AT（6×94ml，实际容量85ml）不连续蔗糖梯度：10％，20％，30％，40％，5
人单个核细胞的分离
实验概要人单个核细胞的分离主要试剂DPBS、0.5%甲基纤维素、人淋巴细胞分离液、人HSCs培养液主要设备离心机，超净台，体视镜，倒置显微镜，96孔培养板，T75培养瓶，25mL/10mL/5mL移液管实验材料脐带血100 mL，取自医院，并和产妇签知情同意书实验步骤（1）用血袋从医院取脐带血100
细胞核的预先分离
实验材料细胞试剂、试剂盒PBSRSB 缓冲液仪器、耗材医用台式离心机Dounce 匀浆器实验步骤1. 在 4℃ 用 PBS 清洗细胞，用一医用台式离心机低速离心。然后用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液悬浮沉淀。每 107 个细胞用 1 ml 缓冲液。用 0.002 英寸间隙的 D
单个核细胞的分离纯化
外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验最常用的细胞，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。1．原理PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的
如何分离外周血单个核细胞
外周血单个核细胞即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞，目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天，但需要刺激。 PBMC（外周血单个核细胞）是原代细胞，单纯
如何用淋巴细胞分离液分离单个核细胞？
淋巴细胞分离液可用于体外分离外周淋巴血细胞，也可以从其他来源中分离单核细胞，包括脐带血细胞和骨髓细胞，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞，在医疗和医学生物中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。 如何用淋巴细胞分离液分离单个核细胞？ 1）分离外周血中的单个核细胞 1．抽取正常人静脉血加
从单个核细胞中分离T细胞
从单个核细胞中分离T细胞1）用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞1．制备AET-绵羊红细胞1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反
单抗制备、血细胞纯化、细胞器分离的离心条件选择
通用离心机在各行业应用得非常广泛。目前在科研单位应用比较多的离心机产品有高速离心机、血液离心机、细胞离心机等，种类繁多，功能也不尽相同。不同试验需要不同的离心条件，经常需要对细胞悬液离心，以增加细胞浓度或洗除有关试剂，可调节的台式离心机就能满足大多试验的需求，那么本文简单介绍一下在单抗制备、血细胞纯
分离人肠黏膜单个核细胞
实验步骤基 本 方案 离 人 肠 黏 膜 单 个 核 细 胞材 料新鲜的大肠或小肠样本，外科手术后分离获得H B S S ，不含钙和镁， p H 7. 2D T T - H B S S 溶液： 75m g D T T 溶于 50 ml H B S S ，新鲜配制E D T A - H B S S 溶
小鼠单个核细胞的分离实验
基 本 方 案 从 脾 脏 、胸腺和淋巴结制备细胞悬液材 料RPMI-5 或 DMEM-5 完全培养基新鲜分离的小鼠器官： < 6 周龄的小鼠胸腺； 6 周 至 6 个月龄的小鼠脾脏和淋巴结60 mmX 15 mm 培养皿剪 刀 和 镊 子（保 存 在 7 0 % 乙醇的烧杯中）装 有 19 G 针
外周血单个核细胞的分离实验
实验方法原理体外测定免疫细胞的数量和功能常需将某种免疫细胞首先分离出来。本实验是采用密度梯度离心法分离单个核细胞（mononuclear cell）。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。 血液中各种细胞的大小和比重不同，因此，可用不同比重（密度）的分离液使不同比重的细胞在离心沉降过
外周血单个核细胞分离的原理
外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其比重为1.070左右，而红细胞和多核白细胞的比重超过1.080。这样利用介于两者比重之间的溶液(称为分层液)做密度梯度离心，就可得到单个核细胞。最常用的分层液为聚蔗糖和泛影酸钠混合比重为1.070±0.001的溶液，国内常用泛影葡胺代替泛影酸钠。
外周血单个核细胞怎么进行分离？
外周血中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重介于1.075～1.090 之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间，因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。对分离介质的基本要
小鼠单个核细胞的分离实验
实验步骤基 本 方 案 从 脾 脏 、胸腺和淋巴结制备细胞悬液材 料RPMI-5 或 DMEM-5 完全培养基新鲜分离的小鼠器官： < 6 周龄的小鼠胸腺； 6 周 至 6 个月龄的小鼠脾脏和淋巴结60 mmX 15 mm 培养皿剪 刀 和 镊 子（保 存 在 7 0 % 乙醇的烧杯中）装 有 19
外周血单个核细胞的分离实验
实验方法原理 体外测定免疫细胞的数量和功能常需将某种免疫细胞首先分离出来。本实验是采用密度梯度离心法分离单个核细胞（mononuclear cell）。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。 血液中各种细胞的大小和比重不同，因此，可用不同比重（密度）的分离液使不同比重的细胞在
特定细胞类型标记的细胞核分离
从大量的植物或动物组织中分离出特异性的细胞类型是费力和棘手的。为了研究表观遗传学上的改变和在不同细胞系中不同表达的基因，如癌细胞与正常细胞，或者拟南芥中两种类型的表皮细胞(epidermal cell)，人们通常必须采用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,
密度梯度分离法分离单个核细胞（MNCs）
试剂和材料：1. 合适的培养基或冷冻液；2. PBSA；3. Ficoll-Hypague；4. 巴氏吸管；5. 50ml离心管；实验方法：1. 将脐血样品用PBSA按1：1比例稀释；2. 将15ml Ficoll-Hypague吸入50ml离心管；3. 将30mlPBSA稀释的脐血样品缓慢地加到F
细胞核的分级分离实验
实验材料小白鼠试剂、试剂盒蔗糖氯化钙溶液甲苯胺兰染液詹纳斯绿B染液NaCl溶液仪器、耗材玻璃匀浆器离心机天平光学显微镜载玻片盖玻片离心管滴管量筒烧杯玻璃漏斗解剖剪镊子实验步骤1. 用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块（去除结缔组织）尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中，反复
细胞核的分级分离实验
实验材料 小白鼠试剂、试剂盒 蔗糖氯化钙溶液甲苯胺兰染液詹纳斯绿B染液NaCl溶液仪器、耗材 玻璃匀浆器离心机天平光学显微镜载玻片盖玻片离心管滴管量筒烧杯玻璃漏斗解剖剪镊子实验步骤 1. 用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块（去除结缔组织）尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯
细胞核的分级分离实验
实验材料小白鼠 试剂、试剂盒蔗糖 氯化钙溶液
外周血单个核细胞分离的操作步骤
1、取外周静脉血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液并混匀。2、将分层液加入试管中，用量约为血量的1/2。用吸管沿管壁缓缓将血加入分层液面上。3、置于水平离心机离心，1500r/min，10min。可见绝大多数单个核细胞悬浮于血浆和分层液的界面，呈白膜状。4、用尖吸管吸取界面的细胞层，置于另一试管中