电泳迁移实验EMSA
核蛋白的提取 ①用细胞刮子刮取RAW264.7 细胞与VSMC ，移入2.5mlEP 管中。②将细胞用冰冷PBS 洗两遍，于4 ℃ , 5000g 离心3min ，沉淀细胞。③加5 倍细胞体积的冰浴缓冲液A 洗细胞一次，于4 ℃ ,5000g 离心3 min 沉淀细胞. ④加3 倍细胞体积的冰浴缓冲液A 悬浮细胞，冰上放置30min 、剧烈振荡10 次，4 ℃ ,5000g 离心15min ，去上清，沉淀为细胞核。⑤加与细胞等体积的冰浴缓冲液B ，充分混匀，冰上放置30min 后，于40 ℃ ,15 000g 离心15min, 上清为核蛋白。⑥取2μl 核蛋白Bradford 法测定核蛋白浓度，分装后于-70 ℃ 保存。 2. 探针的标记与纯化 A 、探针的标记: 将以下试剂加入冰浴中的0.5m l 的EP 管中，总体积20 时。①未标记的探针:2μl (50ng); ② 10 x 激酶缓冲液:2g 1; ③ ......阅读全文
EMSA凝胶迁移－(Electrophoretic－mobility－shift－assay)
实验概要凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。实验原理凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前
Aimees－nonRadioactive－EMSA－Protocol
NUCLEAR EXTRACTION OF TISSUE CELLSThis procedure was developed for HNEK cells grown in KGM, from Clonetics. All steps are performed on ice, with ice-
电泳迁移率变动分析的实验方法介绍
通常用32P标记DNA分子，而不标记蛋白质。电泳结束后，用放射自显影技术显现具放射性标记的DNA条带位置。如果细胞蛋白提取物中不存在与同放射性标记的DNA探针结合的蛋白质，那么所有放射性标记都将出现在凝胶的底部；反之，将会形成DNA-蛋白质复合物，由于受到凝胶阻滞的缘故，放射性标记的DNA条带就
最新进展！芒果内类胡罗卜素的和合成与积累机制
近日，中国热科院品资所在芒果果实中类胡萝卜素合成与积累机制方面取得新进展，为芒果色泽性状育种、提高果实品质的定向育种提供理论基础。 类胡萝卜素与果实颜色密切相关。为探明芒果果实颜色与类胡萝卜素的关系，本研究以绿色‘秋芒(Neelum)’和红色‘爱文(Irwin)’芒果为对象，转录组分析发现转录
电泳迁移率的概念
带电粒子在单位时间内移动的距离称为电泳迁移率。溶液中带电粒子在电场 (E)中向着与它相异电荷的电极移动，它的移动速度(V)是电场(E)和粒子的有效迁移率(m)的乘积，即：V=mE离子的有效迁移率是一个由许多因素(包括离子半径、溶剂化作用、介电常数、溶剂粘度、离子形状和电荷、pH、解离度和温度等)决定
分子间相互作用分析：荧光标记VS无标记
同无标记技术相比，利用荧光技术检测分子间相互作用的实验成本较低，例如荧光共振能量转移和凝胶迁移实验，无需昂贵的仪器便可完成结合分析。然而，基于荧光标记的检测技术也存在自己的局限性，像凝胶迁移实验就只能用来检测蛋白和核酸间的相互作用。那么在具体的实验中，研究人员该如何选择合适的检测技术呢？不要着急，下
实验室分析仪器影响电泳迁移率的因素
⒈电场强度 电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为 20cm，测得的电位降为 200V，那么电场强度为200V/20cm＝10V/cm。当电压在500V以下，电场强度在 2-10v/cm 时为常压电泳。电压在 500
western－blot激光近红外荧光检测的特点
Western blot方法是生物实验室常用的蛋白检测方法之一，自从1979提出至今已有数十年的历史。常用的检测方法有化学发光法和荧光方法。NIR近红外荧光检测方法，印迹膜自发荧光较低，信噪比高。NIR荧光检测能获得高信噪比和高质量图片主要依赖于激发强度大，精密的激光光源和专业的光学元件。我
电泳迁移率变动分析
中文名电泳迁移率变动分析外文名electrophoretic mobility shift assay定义用放射性同位素标记待检测的片段（即探针DNA），然后与细胞提取物共温育，形成DNA-蛋白复合物，将该复合物加到非变性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。
影响电泳迁移率的因素
由电泳迁移率的公式可以看出，影响电泳分离的因素很多，下面简单讨论一些主要的影响因素：1. 待分离生物大分子的性质待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。2. 缓冲液的性质缓冲液的 pH 值会影响待分
影响电泳迁移率的因素
影响电泳迁移率的外界因素：①电场强度 ②溶液的pH值 ③溶液的离子强度 ④电渗现象 影响电泳迁移率的内在因素：①质点所带净电荷的量 ②质点的大小和形状
影响电泳迁移速率的因素有哪些？
（1）DNA的分子大小线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。（2）琼脂糖浓度一个给定大小的线状DNA分子，其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝
电泳迁移率是什么，怎么计算
即、解离度和温度等）决定的物化系数：V=mE离子的有效迁移率是一个由许多因素（包括离子半径、离子形状和电荷。
影响电泳迁移率的因素介绍
由电泳迁移率的公式可以看出，影响电泳分离的因素很多，下面简单讨论一些主要的影响因素： 1. 待分离生物大分子的性质 待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。 2. 缓冲液的性质
电渗对电泳迁移率的影响
电渗是指在电场的作用下，涂膜中的大量水分从涂膜中渗析到槽液，使涂膜脱水形成几乎连电流也通不过的含水率极低的、电阻很高的致密涂膜。随着电泳时间，电阻越来越高，电流越来越低，场强E越来越小，电流越来越小，电泳迁移率也越来越小，最终达到平衡
由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验
试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶 核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物 σ32 非变性胶样品缓冲液 储存缓冲液 考马斯亮蓝（CBB) 染色
由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验
试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物σ32 非变性胶样品缓冲液储存缓冲液考马斯亮蓝（CBB) 染色液脱色液仪器、耗材 非变性凝胶电泳装置实验步骤 材料与设备核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物，由免疫亲和柱洗脱所得σ32，由 POROS 50S
由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验
当蛋白质在保持其天然构型不变的条件下进行电泳时，其迁移率可以作为它的均一性的一种量度。由于迁移率是电荷和形状两者的函数，因此可以预期，能将单体、二聚体等形式彼此分开。也有可能因异构体形状的差异而用非变性凝胶电泳把蛋白质的构象异构体（conformational isomer) 分开。本实验来源于蛋白
影响电泳迁移率的因素有哪些？
⒈电场强度 电场强度是指单位长度(cm)的电位降,也称电势梯度。如以滤纸作支持物,其两端浸入到电极液中,电极液与滤纸交界面的纸长为 20cm,测得的电位降为 200V,那么电场强度为200V/20cm=10V/cm。当电压在500V以下,电场强度在 2-10v/cm 时为常压电泳。电压在 500V
电泳迁移率变动分析的应用
用于研究特定的转录因子以及转录因子所结合的顺势作用元件。用于研究与蛋白质相结合的DNA的序列的特异性。评估突变对探针DNA与结合蛋白相互作用的影响。用于研究DNA-foot printing。
电泳迁移率变动分析的应用
用于研究特定的转录因子以及转录因子所结合的顺势作用元件。 用于研究与蛋白质相结合的DNA的序列的特异性。评估突变对探针DNA与结合蛋白相互作用的影响。 用于研究DNA-foot printing。
琼脂糖凝胶电泳迁移速率的影响因素
1、 DNA的分子大小及构型: 不同构型DNA的移动速度次序为：共价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越
琼脂糖凝胶电泳迁移速率的影响因素
1、DNA的分子大小及构型 不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝
简述电泳迁移率变动分析的应用
1、用于研究特定的转录因子以及转录因子所结合的顺势作用元件。 2、用于研究与蛋白质相结合的DNA的序列的特异性。 3、评估突变对探针DNA与结合蛋白相互作用的影响。 4、用于研究DNA-foot printing。
高通量的转录因子活性检测
转录因子(transcription factor，TF)在真核生物的基因表达过程中发挥着重要作用，或调节基因表达的强度，或控制目的基因的时空特异性表达，或应答外界刺激和环境胁迫。近年来，随着干细胞研究的不断升温，人们对转录因子的兴趣也日益浓厚。同一个基因组，为何最终分化成不
凝胶迁移滞后实验基本原理
凝胶迁移滞后实验（electrophoretic mobility shift assays，EMSA）是近年发展起来的研究核酸与蛋白质相互作用简单、快速、敏感的方法。目前已经成为转录因子研究的经典方法。其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的
南开大学Hepatology癌症研究新成果
来自南开大学生命科学学院的研究人员在新研究中证实：乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein，HBx)通过CREB介导YAP癌基因促进了肝癌细胞生长。相关论文发表在12月的国际著名肝脏疾病杂志Hepatology上(最新影响因子11.665)上。 南开大
凝胶迁移（Gel－Shift）实验操作方法1
1.探针的标记：（1） 如下设置探针标记的反应体系：待标记探针 （1.75pmol/微升） 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） 1微升Nuclease-Free Water 5微升[γ-32P]ATP（3,000Ci/mmol at 10mCi/ml）
凝胶迁移（Gel－Shift）实验操作方法2
探针冷竞争反应：Nuclease-Free Water 4微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液（5X） 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 2微升未标记的探针 1微升标记好的探针 1微升总体积 10微升突变探针的冷竞争反应：Nuclease-Free Water 4微升EMSA/Gel-Shif
Nature－Cell－Biology杂志一则撤稿声明
2018年12月17日，Nature Cell Biology 发表了一篇撤稿声明，来自西班牙奥维耶多大学（Universidad de Oviedo）的研究者 Carlos López-Otín 等人撤回了他们于2015年7月27日发表在该刊物上的文章 “NF-κB activation im