恒温核酸扩增技术通量

在实际的产业化中,分子诊断仪器的通量往往至关重要。对于qPCR而言,由于引物设计的成熟和荧光通道的多样性,往往可以比较好的实现高通量检测。由于恒温核酸扩增技术引物设计较为困难,单一的反应温度会造成引物和模板,引物与引物之间的非特异性链接和扩增,使得恒温扩增的检测通量受到限制。但同时也得益于反应温度的单一化,我们可以通过设计多个反应槽来弥补通量不足的遗憾。 过去几十年间,若干恒温核酸扩增技术发展迅速,如环介导恒温扩增(LAMP)技术,链置换(SDA)恒温扩增,解旋酶(HDA)DNA 恒温扩增,重组酶聚合酶(RPA)扩增和切刻内切酶(NEAR)恒温扩增。......阅读全文

什么是荧光定量核酸扩增仪?技术指标是?

  荧光定量核酸扩增仪是一种用于基础医学、预防医学与公共卫生学、药学、中医学与中药学领域的分析仪器,于2017年12月8日启用。  技术指标  温控模块:采用银质半导体温控模块(半导体元件+Therma-Base气液平衡层导热技术) 模块设计:所有样本对应的温控模块一体化成型,不由独立的多个小型模块

核酸序列扩增法的定义

中文名称核酸序列扩增法英文名称nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定  义一种在等温系统中扩增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶仅在结合核酸上相应位点时才能起作用的特点,将结合位点序列与靶序列相连,然后产生靶分子的RNA拷贝,形成反转录和RN

博奥生物恒温扩增微流控芯片核酸分析仪获批

  国家食品药品监督管理总局经审查,2015年4月20日,批准博奥生物集团有限公司的恒温扩增微流控芯片核酸分析仪医疗器械注册。该产品是国家食品药品监督管理总局按照《创新医疗器械特别审批程序(试行)》批准注册的产品。该产品主要由仪器主机、电源线、数据线组成,其中仪器主机主要包含前面板组件、运动平台组件

食药监局将恒温核酸扩增检测仪等22个产品分类界定

《食品药品监管总局办公厅关于恒温核酸扩增检测仪等22个产品分类界定的通知》  各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局:  为适应医疗器械监督管理工作的需要,总局组织有关单位和专家对恒温核酸扩增检测仪等22个产品的管理类别进行了界定。现通知如下:  一、作为Ⅲ类医疗器械管理的产品(1个)  恒温核酸扩

高通量核酸提取组合方案(二)

标准组件已经可以完成核酸分离纯化过程,可进行全血,血清的核酸提取以及PCR产物纯化。各种选用组件主要用于各种不同来源材料的前处理过程。以全血DNA提取为例,介绍提取过程以及过程中每个组件的功能: 1.       血样从采血管手动转移到96孔盘:这步操作最为复杂,一方面采血管的规格不同于96孔盘,另

高通量核酸提取组合方案(一)

核酸提取,也许是现代生物学中最基础也最重要的工作了。疾病诊断,遗传育种,药物筛选,发育表达,分子进化… … 几乎生物科学中每一个部分的研究,都离不开分离纯化所需要的核酸组分。而且,随着技术的进步,很多研究都向高通量方面靠拢,因为样本的数量增多,得出的结果就更有统计学意义也更可信。如果您面对一天上百个

核酸扩增引物设计的原则

  引物设计的必要条件是与引物互补的靶DNA序列必须是已知的,两引物之间的序列未必清楚,这两段已知序列一般为15~20个碱基,可以用DNA合成仪合成与其对应互补的两条引物。除此之外,引物设计一般遵循的原则包括: 一、引物长度根据统计学计算,长约17个碱基的寡核苷酸序列在人的基因组中可能出现的几率为1

核酸扩增检测仪临床应用

  1.聚合酶链反应  可用于检测由基因点突变、获得启动子、基因易位、重排、扩增等导致的癌基因的异常激活、抑癌基因的失活及检测外源性肿瘤病毒。此外,检测致癌基因的表达水平对选择化疗方案也具有一定的指导意义。  2.聚合酶链反应直接测序  从最直观的核酸序列水平研究癌基因突变,为肿瘤的早期诊断及基因治

核酸扩增引物设计的要求

  1、避免重复碱基,尤其是G。  2、引物退火温度Tm控制在58~60℃。  3、G+C为30%~80%。  4、3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C。  5、正向引物与探针离得越近越好,但不能重叠。  6、扩增产物长度不能太大,一般在80~250 bp,80~150bp最为合适。 

核酸扩增—连接酶链反应

  LCR由基因扩增技术和连接酶方法结合而成,是继PCR之后的快速DNA扩增方法。与PCR不同的是,LCR采用2对寡核苷酸探针,每对寡核苷酸探针与变性正负靶链杂交时处于相邻的位置,两者之间形成一个缺口,只有当它们与靶DNA碱基配对且3'与5'端相邻位置均正确时,DNA连接酶才能将其连

如何提取土壤中的高通量核酸?

土壤是指地球表面的一层疏松的物质,由各种颗粒状矿物质、有机物质、水分、空气、微生物等组成,能生长植物。土壤微生物的数量很大,1克土壤中就含有4000~7000种近10亿个细菌。1亩地耕层土壤中,微生物的重量能达到300-3000公斤。而其中90%以上的微生物都是无法直接培养的。因此,提取土壤中的微生

荧光定量核酸扩增仪相关的功能

  荧光定量是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。  主要功能:  高灵敏度:可检测单拷贝基因; 动力学范围广:可检测10E0——10E8 拷贝; 高重复性:CV0.3% 高分辨率:轻松区

核酸序列扩增法的定义和原理

中文名称核酸序列扩增法英文名称nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定  义一种在等温系统中扩增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶仅在结合核酸上相应位点时才能起作用的特点,将结合位点序列与靶序列相连,然后产生靶分子的RNA拷贝,形成反转录和RN

依赖核酸序列的扩增的基本方法

基本方法为:将引物,标本加入扩增反应液,65℃1min使RNA分子二级结构打开,降温至37℃加入逆转录酶,T7rna聚合酶和RNaseH,并在37℃反应1——1.5小时,其产物经琼脂 糖电泳,溴乙锭染色即可在紫外仪下看到条带.NASBA的特点为操作简便,不需特殊仪器,不需温度循环.整个反应过程由三种

核酸扩增—普通聚合酶链反应

  把DNA分子变性后解链,两条单链DNA分别经复性与两条引物互补结合,在4种dNTP存在和合适的条件下,由DNA聚合酶催化引物由5'到3'扩增延长,每经过变性、复性、延伸一个循环,模板DNA增加1倍,新合成的DNA链又可作为下一个循环的模板,经过30-50个循环,可使原DNA量增加

简述副溶血弧菌的核酸扩增试验

  所有副溶血弧菌分离株都含有不耐热溶血毒素(TLH),这种溶血素是副溶血弧菌所特有的,因此它的编码基因tlh基因常被用作检测副溶血弧菌的靶基因。而tlh并不是一个毒素基因,真正与致病相关的是副溶血弧菌的耐热直接溶血素(TDH)和溶血相关溶血素(TRH),因此它们的编码基因tdh、tlh基因常被用作

恒温PCR技术检测转基因有哪些优点

恒温PCR一种新式恒温核酸扩增方法,其原理是采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,反应全过程恒定63℃,不到1h的时间里进行核酸的指数级扩增,其扩增效率可达到109个~ 1010个拷贝数量级。在扩增反应中产生茎-环结构,保证引物与其杂交启动新一轮核酸合成。配合恒

北航、华西医院联合研发便捷式病原体核酸快速检测仪

  当前全球新冠肺炎确诊人数持续增加,我国疫情已进入常态化防控阶段,面对广泛场景,如机场、车站、社区医院、乡村卫生站、居家自测等环境下,快速、精准、便携式和低成本的新冠病毒和其他病原体检测预警平台,具有重要的时效性和重大意义。  近日,北京航空航天大学和四川大学华西医院联合团队,设计和研发了一款高灵

恒温荧光法试剂盒快速筛选及鉴定金黄色葡萄球菌解决

一、技术原理试剂盒基于恒温荧光法检测,利用两对特殊引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,使模板两端引物结合处循环出现环状单链结构,引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应,实现在恒温条件下(60-65℃)进行连续快速扩增。反应体系中加入了显色指示剂,阴阳性结果显色差异显著,扩增结束后可以通过

搞定恒温扩增分子诊断(RPA/RAA)

分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定!为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RPA, recombinase polymeras

上海应物所等发表核酸等温扩增技术研究综述论文

  近期,中国科学院上海应用物理研究所研究员樊春海与西安交通大学生命学院教授赵永席应邀在《化学评论》(Chemical Reviews)发表了关于核酸等温扩增技术的综述论文:Isothermal Amplification of Nucleic Acids(Chem. Rev., 2015, 115

美开发出一种核酸快速扩增技术-大大加快PCR速度

据物理学家组织网8月29日(北京时间)报道,美国能源部劳伦斯·利弗莫尔国家实验室(LLNL)研究人员最近开发出一种核酸(DNA和RNA)快速扩增技术,使聚合酶链式反应(PCR)的速度大大加快,可在3分钟内将基因组片段扩增10亿倍,迅速识别出病原菌。疾病快速诊断有望很快成为现实。相关论文发表在最近出版

关于基因扩增技术—聚合酶链反应的条件模板核酸的介绍

  基因扩增技术—聚合酶链反应可以以DNA或RNA为模板进行核酸的体外扩增。不过RNA的扩增首先逆转录成cDNA后才能进行PCR循环。不同来源的核酸标本必须经处理后才能用于PCR的扩增,处理不当或处理过程中DNA掉失都会导致PCR扩增失败。采集标本方法不当,未能获得所要检测的靶DNA都会导致出现假阴

低丰度核酸反转录及扩增实验

实验材料 核酸试剂、试剂盒 dNTPMnCl2MgCl2BSArTth DNA聚合酶仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1.  用过氧化物酶,蛋白酶K和DNA酶预处理载玻片。2.  配置如下一步反应体系(总体积100 μl)(1)0.5 μl 100 μmol/l 正向引物(终浓度0.5 μmol/l

志贺菌属核酸扩增法的检测介绍

  核酸扩增技术,即聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸,作为引物,对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端,然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增,使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。

ma6000核酸扩增仪怎么新建程序

1、首先打开ma6000核酸扩增仪。2、然后进入ma6000核酸扩增仪设置。3、最后在设置中,登录雅瑞操作软件,新建一个项目,再新建一个项目集合,在详细信息中添加项目名称,即新建程序创建完成。

高通量测序技术

没有测序的癌症诊断是不完整的,完整的癌症诊断应该包括一系列基于细胞遗传学技术、荧光原位杂交技术、标准分子技术以及NGS的预后与预测性分析。对于早期癌症患者来说,NGS序列分析在多种癌症的筛查技术中具有不容忽视的代表性;而对于晚期癌症患者,大量的侵入性测试往往只能筛查出少数几个药物靶点。 随

基因扩增技术的技术特点

特异性高首次报导的PCR所用的DNA聚合酶是大肠杆菌的DNAPolymerase I的Klenow大片段,其酶活性在90℃会变性失活,需每次PCR循环都要重新加入Klenow大片段,同时引物是在37℃延伸(聚合)易产生模板—引物之间的碱基错配、致特异性较差,1988年Saiki等从温泉水中分离到的水

切刻内切酶(NEAR)恒温扩增

  切刻内切酶(NEAR)恒温扩增是目前相关研究最少的一种恒温核酸扩增技术。它是在2008年由Ionian科技公司的研究人员开发并申请ZL的(Brain等2009)。除了链置换酶(Bst)外,NEAR反应中还需添加一个切刻内切酶。NEAR反应的引物设计需要将所使用的切刻内切酶的DNA作为序列加在引物

一文搞定恒温扩增——RPA/RAA

分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问,决定开小灶,包会!哈哈~~为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RP