基因诊断的分子生物学基础（二）
三、RNA分子结构 （一）RNA类型 细胞内含有三类主要的RNA，即核蛋白体RNA（Ribosomal RNA， rRNA）、转运RNA（Transfer RNA，tRNA）及信使（Messenger RNA，mRNA）。 1．rRNA。是核蛋白体的组成部分，含量最多，约占细胞内全部RNA的74~80%，在真核细胞中有四种rRNA，分子大小不均。它们分别与70多种蛋白质相结合而构成核蛋白体大小亚基，是蛋白质生物合成的“装配机”。 2．tRNA。占细胞内RNA总量的10~25%，分散于胞液中。种类很多，每种氨基酸都有与 其相对应的一种或几种tRNA。tRNA分子由70~90个核苷酸组成，所以分子量较小，tRNA的生理功能是运输活化了的氨基酸，参与蛋白质的生物合成。 3．mRNA。占细胞内RNA总量的2~5%，其代谢活跃，更新迅速，所以半衰期较短。细胞内mRNA的种类很多，但每种mRNA的含量却很少，它是蛋白质生物合......阅读全文
基因诊断的分子生物学基础（二）
三、RNA分子结构 （一）RNA类型 细胞内含有三类主要的RNA，即核蛋白体RNA（Ribosomal RNA， rRNA）、转运RNA（Transfer RNA，tRNA）及信使（Messenger RNA，mRNA）。 1．rRNA。是核蛋白体的组成部分，含量最多，约占细胞内全部RNA
基因诊断的分子生物学基础（一）
基因诊断操作的对象为基因或其片段。基因是遗传学上的一个概念，是在染色体上占有一定的位置，表现一定功能的基本单位。基因的物质基础是脱氧核糖核酸（DNA）（有些病毒的基因是核糖核酸，RNA）。原核细胞（如细菌和病毒）的基因单位较小，其排布一般是连续的。真核细胞的基因一般较大，其排布是不连续的，它被称为插
分子生物学实验诊断技术（二）
（三）Northern blot用于RNA分析，电泳条件与转膜方法与Southern blot不同外，RNA不必变性与中和，电泳时加电醛防止RNA发夹结构形成。其它步骤相同。为了防止RNase水解需分析的mRNA，尽可能将器皿在160-180℃干热灭菌8小时以上，也可加0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC
基因诊断的原理（二）
末端的DNA片段在DNA连接酶的作用下很容易共价连接，因此被广泛地应用于重组DNA操作中。具有相同平齐末端的DNA片段也可以连接，但连接效率只有粘性末端连接效率的1％。 限制酶的上述特性在基因工程和基因诊断中具有重要用途：①首先不论DNA的来源如何，用同一种内切酶切割后产生的粘性末端很容易重
分子生物学实验基础知识
分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也
分子生物学实验基础知识
分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也
分子生物学绪论（二）
（二)现代分子生物学的建立和发展阶段 这一阶段是从50年代初到70年代初，以1953年Watson和Crick提出的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑开创了分子遗传学基本理论建立和发展的黄金。DNA双螺旋发现的最深刻意义在于：确立了核酸作为信息分子的结构基础；提出碱基配对是核酸
分子生物学实验诊断技术
一、酸杂交技术检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成本高外，关键是操作
分子生物学实验诊断技术
一、酸杂交技术检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成本高外，关键是操作
口蹄疫分子生物学诊断技术
近年来，由于分子生物学技术的迅速发展及其在FMD诊断中的应用，建立了各种FMD的分子生物学诊断技术，主要包括以下几种方法，核酸杂交、等电点聚焦电泳、寡核苷酸指纹图谱分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚合酶链式反应、单克隆抗体技术等。（1）核酸探针 核酸探针即应用FMD的cDNA克隆片段，用32P或生物素等标
分子生物学检验技术的理论基础是什么？
分子生物学检验技术的理论基础是什么？:一、病原生物基因与医学检验网人类感染性疾病 严重影响人类健康的病原微生物如结核杆菌、肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、SARS相关冠状病毒、人禽流感病毒和原虫等，目前受到广泛关注。 二、病原生物基因与人类感染性疾病对于这些病原生物基因和基因组的研究已经成为消灭病原生物、
分子生物学概念的发展与检验诊断—分子生物学到生物...
分子生物学概念的发展与检验诊断—分子生物学到生物... 经过了免疫学的热潮，20世纪中叶开始兴起了又一门新的学科“分子生物学”。人们怀着满腔热忱，期待这一学科能够对那些机理不清的疾病予以新的认识。众多科学家经过了半个世纪的努力，终于用分子生物学方法整理出一批单基因病等和基因相关的疾病。随着基因基础
毒物反应的遗传基础（二）
二、吸烟与慢性阻塞性肺疾患 慢性支气管炎（chronic bronchitis)合并肺气肿（emphysema)或支气管哮喘（bronchial asthma)统称为慢性阻塞性肺疾患（chronic obstructive pulmonary disease,COPD)。这类疾病以肺泡
药物反应的遗传基础（二）
三、葡萄糖－6－磷酸脱氢酶缺乏症 葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症是一种主要表现为溶血性贫血的遗传病，一般平时无症状，但在吃蚕豆或伯氨喹啉类药物后出现血红蛋白尿、黄疸、贫血等急性溶血反应。 众所周知，红细胞中糖代谢
感染性疾病基因诊断进展（二）
5 、血液筛查 血液筛查主要为免疫学方法。输血危险性来源于窗口期献血，病毒变异，非典型免疫应答和实验室检测的失误。 1999 年欧洲共同体、美国、日本相继把献血员筛查乙肝、丙肝、艾滋病毒。6 、与胎儿发育异常有关的病原体检测 研究表明，孕妇宫内感染弓形虫 TOX 、风疹病毒 RV 、巨细胞病毒
常用的分子生物学基本技术（二）
载体 所谓载体是指携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。细菌质粒 是一种细菌染色体外小型双链环状结构的DNA，分子大小为1-20kb，对细菌的某些代谢活动和抗药性表型具有一定的作用。质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成。最常用的质粒是pBR322。噬菌体（phaeg） 噬菌体是感
分子生物学常用试剂的配制（二）
15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml) 40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释10倍。 Tris-硼酸(TBE)：5×浓贮存液(每升)：54g Tris 碱 27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
常用的分子生物学基本技术（二）
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二
猪丹毒分子生物学诊断技术
常规细菌培养检测猪丹毒至少要3天，鉴定血清型大约要lo天，而这种PCR法可在5h内完成。它使用两步扩增法，先用高度特异性引物组M0101-M0102进行初步扩增之后，再添加4种特异性寡核苷酸引物组对4种不同血清型猪丹毒的16SrRNA序列进行扩增。 rRNA基因簇包括16SrRNA、23
分子生物学实验诊断技术（一）
一、核酸杂交技术 检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成
在细胞及分子生物学基础研究中的应用
激光扫描共聚焦显微镜应用照明针与检测孔共轭成像，有效抑制了焦外模糊成像并可对标本各层分别成像，对活细胞行无损伤的“光学切片”这种功能也被形象的称为“显微 CT”。CLSM 还可以对贴壁的单个细胞或细胞群的胞内、胞外荧光作定位、定性、定量及实时分析，并对胞内成分如线粒体、内质网、高尔基体、DNA、RN
HPLC基础知识（二）
3．离子交换色谱法 固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的
分子诊断在分子生物学中的应用
分子诊断可对多种病原体如细菌、病毒等进行快速、灵敏、准确的诊断，不仅能提早发现疾病，确定病因，还可以及时阻断细菌、病毒的传播，在感染病检测和预防方面有着较为明显的优势。目前主要应用在HBV、HCV、HIV、HSV、TB沙眼衣原体（CT）、淋球菌（NG）、解脲支原体等检测。 例如，
分子生物学技术诊断疟原虫的方法
PCR和核酸探针已用于疟疾的诊断，分子生物学检测技术的最突出的优点是对低原虫血症检出率较高。用核酸探针检测恶性疟原虫，其敏感性可达感染红细胞内0.0001%的原虫密度。国内学者采用套式PCR技术扩增间日疟原虫 SSU rRNA基因120bp的特定片段，其敏感性达0.1原虫/μl血。
分子生物学实验小技术（二）
1 、 各供应商送货时往往会提供冰袋，在室温下将化冻的大冰袋平整的一面整齐地插入1.5ml 或0.5ml 、0.2ml 的废弃离心管；或将几个化冻后的小冰袋填料塞入一个小泡沫盒中压实，再插入各种大小的试管，放在-20 摄氏度下冻24小时后取出，拔出插入的废管（可加点热水以助拔管）即可做成一个
分子生物学课程教学讲义（二）
第二讲 染色体与DNA一、 DNA的组成与结构 Avery在1944年的研究报告中写道："当溶液中酒精的体积达到9/10时，有纤维状物质析出。如稍加搅拌，它就会象棉线在线轴上一样绕在硬棒上，溶液中的其它成份则呈颗粒状沉淀。溶解纤维状物质并重复数次，可提高其纯度。这一物质具有很强的生物学活性，初步实验
分子生物学常用实验技术（二）
第三节操作步骤 一、细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。 二、质粒D
分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术的区别、原理（二）
二、核酸序列测定 测序反应是直接获得核酸序列信息的唯一技术手段,是分子诊断技术的一项重要分支。虽然分子杂交、分子构象变异或定量PCR技术在近几年已得到了长足的发展,但其对于核酸的鉴定都仅仅停留在间接推断的假设上,因此对基于特定基因序列检测的分子诊断,核酸测序仍是技术上的金标准。 (一)第1代
关于肿瘤发病的基因基础介绍
肿瘤分子生物学研究表明，有两类基因与肿瘤的发生、发展密切相关。一类是肿瘤基因，另一类是抗肿瘤基因。肿瘤基因的活化和过渡表达，将诱发肿瘤形成，而抗肿瘤基因的存在和表达，则有助于抑制肿瘤的发生。 肿瘤基因可以存在于正常细胞中，不表达肿瘤特性，当这样细胞受到致瘤因素作用时，如病毒、化学致瘤和射线等，
临床基础检验要点集锦（二）
贫血的红细胞形态学分类平均红细胞体积MCV：82~92fl，平均红细胞血红蛋白量MCH：27~31pg，平均红细胞血红蛋白浓度MCHC：320~360g/L贫血MCV/RDW分类法19、网织红细胞计数（尤其是网织红细胞绝对值）是反映骨髓造血功能的重要指标。当骨髓网织红细胞增多，外周血减少时，提示释放