酶联免疫吸附测定的方法类型和操作步骤

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:(1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。(2)用脱脂奶粉或BSA进行封闭。洗涤除去多余的脱脂奶粉或BSA。(3)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。(4)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。(5)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物......阅读全文

酶联免疫吸附测定(ELISA)操作要点

1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝

酶联免疫吸附测定法检测-ADH-和-ALDH-活性的步骤是什么?

酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)活性的大致步骤如下:包被抗体:将特异性识别 ADH 或 ALDH 的抗体包被在酶标板上,通常在 4℃ 过夜,使抗体固定在板上。封闭:用封闭液(如牛血清白蛋白溶液)封闭酶标板上未被抗体占据的位点,以减少非特异性结合,通常在

RFLP和RAPD技术原理和操作步骤

原理:DNA分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基础。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段长度多态性)已被广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。RFLP是根据不同品种(个体)基因组的限制性内切酶的酶切位点

灌肠的方法和步骤

(1)备齐用物携至床边,向病人解释,嘱其排尿,屏风遮挡。(2)病人取左侧卧位,双膝屈曲,露出臀部,垫治疗巾及橡胶单于臀下,弯盘放于臀边。不能自我控制排便的病人可取仰卧位,臀下垫便盘。盖好被子,只暴露臀部。(3)挂灌肠筒于架上,液面距肛门40~60cm,润滑肛管,并排气,夹紧肛管。(4)将肛管轻轻插入

紫外线老化试验箱的操作步骤和方法

  1将试验样品取样,标准样品尺寸长150mm*宽70mm,厚度1~3mm厚;  2打开试验箱两边的盖板,先将样品架框上面的固定弹簧圈取下,然后将挡光盲孔板取下,再将样品平整的放入样品架框,并用弹簧钢圈固定可靠,保证样品表面与灯管表面的距离均匀,以免影响测试结果;  3如果样品时很小的试样,先将样品

紫外线老化试验箱的操作步骤和方法

  1、将试验样品取样,标准样品尺寸长150mm*宽70mm,厚度1~3mm厚;  2、打开试验箱两边的盖板,先将样品架框上面的固定弹簧圈取下,然后将挡光盲孔板取下,再将样品平整的放入样品架框,并用弹簧钢圈固定可靠,保证样品表面与灯管表面的距离均匀,以免影响测试结果;  3、如果样品时很小的试样,先

使用离子色谱法测定甲醛的采样方法和操作步骤

采样打开活性炭采样管两端封口,将一端连接在空气采样器入口处,以0.2L/min的流量,采样4h。采样后,用胶帽将采样管两端密封,带回实验室。步骤1、离子色谱条件淋洗液:0.005mol/L 四硼酸钠溶液;流量:15ml/min;纸速:4mm/min;柱温:室温(不低于18℃)±0.5℃;进样量:20

离子色谱法测定硫酸雾的采样方法和操作步骤

采样同铬酸钡分光光度法。步骤样品溶液的制备、空白滤筒溶液的制备、阳离子树脂柱的制备及样品处理,同铬酸钡分光光度法步骤。1、色谱条件淋洗液:0.004mol/L碳酸钠溶液;流速:2ml/min;纸速:4mm/min;柱温:室温(不低于18℃)±0.5℃;进样体积:100μl。2、标准曲线的绘制取六个1

熔点仪的工作原理和操作步骤

工作原理    熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的,该仪器利用电子技术实现温度程控,初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件,并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管,通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化过程,清

熔点仪的工作原理和操作步骤

   工作原理    熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的,该仪器利用电子技术实现温度程控,初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件,并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管,通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化

HPLC的酸清洗和钝化操作步骤

HPLC的酸清洗和钝化!HPLC系统内部可能的污染物来自人的触摸,暴露在实验室化学环境,与零部件制造相关的残留物,或来自先前的流动相和样品的残余物。虽然HPLC系统自身也会逐步地被流动相清洗,但某些释放出的杂质会吸附在色谱柱上以及检测器润湿的表面上,因而会降低总的性能。 磷酸清洗:通常用于从系统中除

量热的仪操作步骤和规程

一、操作步骤:1、依次打开计算机、量热仪主机、打印机、电子天平的电源开关。 2、运行测试程序,从“测试”菜单进入“开始测试”工作界面。 3、往氧弹中装入一个废样进行试验。 4、半个小时后开始称样(样重1g左右,天平感量为0.0001g),如天平与计算机已连好,则可自动输入样重。(有关天平的正确使用,

熔点仪的工作原理和操作步骤

  工作原理      熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的,该仪器利用电子技术实现温度程控,初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件,并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管,通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化

cDNA的合成实验原理和操作步骤

一、实验目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、实验原理反转录酶主要用于体外cDNA的合成。目前最常用的反转录酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它们具有依赖于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性,可以以RNA分子

酶联免疫吸附测定实验(ELISA)的操作流程

  Elisa 操作流程(以人IL-4 ELISA KIT为例):  检测原理:  本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的IL-4会 与单抗结合,游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合;抗人

简述手套箱的操作方法步骤

  打开包装箱,首先检查运输过程中真空手套箱上的各结合部位有无松动。如有松动请将相应的螺丝拧紧,然后可以试抽真空。  一、抽真空与充气的放法:  1、本产品分为主箱体和过渡室两部分。主箱体不能单独抽真空,过渡室则可以单独抽真空。[2]  2、先打开过渡室里面的门,然后关上所有手套接口压盖、阀门和过渡

测振仪的使用方法与操作步骤

  历史上设备维修制度经历了“事后维修”、“预防维修”、“ 计划预防检修”等多种方式,最具代表性的是失效后修理和制定定期的大、中、小修计划。这些方式的共同点在于不是以设备实际存在的隐患为依据的,因而不可避免存在盲目拆卸,维修不足和人力、财力的浪费或机器停运造成经济损失等缺点,维修缺乏科学性。随着科学

分子标记——AFLP原理和操作步骤

一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺

分子标记—AFLP原理和操作步骤

AFLP可用于:(1)构建遗传连锁图谱;(2)利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记;(3)AFLP辅助的轮回选择育种;(4)研究基因表达与调控;(5)分类和进化研究;(6)甲基化研究等。实验方法原理AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行

分子标记—AFLP原理和操作步骤

            实验方法原理 AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后

分子标记——AFLP原理和操作步骤

一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺

Southern印迹技术原理和操作步骤

实验原理:Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物(如硝酸纤维素膜、尼龙膜)上,使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段,进行琼脂糖凝胶电泳,各片段因分子量不同而彼此分开,然后经碱处理凝胶,使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将

量热仪操作步骤和规程

化验室使用的煤质分析仪器设备。一、操作步骤:1、依次打开计算机、量热仪主机、打印机、电子天平的电源开关。2、运行测试程序,从“测试”菜单进入“开始测试”工作界面。3、往氧弹中装入一个废样进行试验。4、半个小时后开始称样(样重1g左右,天平感量为0.0001g),如天平与计算机已连好,则可自动输入样重

噪音计操作步骤及操作步骤

  噪音计-操作步骤  1、打开噪音计携带箱,取出噪音计,套上传感器。  2、将噪音计置于A状态,检测电池,然后校准噪音计。  3、对照常见的环境声级大小表,调节仪器的测量量程。  4、测量:可以用快(测量声压级变化较大的环境的瞬时值)、慢(测量声压级变化不大的环境中的平均值)、脉冲(测量脉冲声源)

斑点酶联免疫吸附测定(DELISA)材料和方法

(以快速诊断口蹄疫为例) 斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少

直流高压发生器的操作步骤以及方法和主要特点

1、操作前准备:将控制箱的信号输出电缆插座13和测量输入插座14与倍压装置电缆插座用专用电缆连 接好,使用前检查其完好性,联接电缆不应有短路和断路;倍压筒应无凝露现象;用2.5mm2以上的铜线将控制箱接地与倍压装置接地端连接起来并可靠接地。2.水阻的安装说明1)在每次试验前将水阻有气孔一端拧开,将水

实验室小型发酵罐的使用方法和操作步骤

 实验室小型发酵罐是一种配置独特、灵活、操作简便、占地面积极小的实验室台式发酵罐,采用全电脑触摸屏控制系统,彩色触摸屏显示,具有强大的扩展功能,支持多达24 个发酵参数控制,是进行发酵工艺条件研究和精密培养的实验平台。   实验室小型发酵罐的主要部件:  罐体主要用来培养发酵各种菌体,密封性要好; 

两种测定抗体效价方法的实验原理和操作步骤

酶联免疫吸附实验法一、实验目的1. 深入了解ELISA法测定抗体效价的原理。2. 掌握ELISA法测定单克隆抗体效价的方法。二、实验原理ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上,形成酶

库仑法测定COD的方法的操作步骤

操作步骤(1)标定值的测定①准确吸取12 ml重蒸馏水置于锥形瓶中,加1.00 ml 0.050 mol/L的重铬酸钾溶液,慢慢加入17.0 ml硫酸-硫酸银溶液,混匀。放入2~3粒玻璃珠,加热回流。②回流15 min后停止加热,用隔热板将锥形瓶与电炉隔开、稍冷,由冷凝管上端加入33 ml重蒸馏水。

酶联免疫吸附测定的分类方法

  1、夹心法  夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为:  将具有专一性的抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体;  加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结;  洗去多余待测检体;  洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一