mtSC:单细胞类型自动鉴定的新方法
单细胞测序技术有助于刻画细胞层面的异质性,为进一步探索细胞功能和内在作用机制等奠定了基础。在单细胞转录组测序数据的分析过程中,细胞类型鉴定是必须且重要的一步。常规的细胞类型鉴定依赖于细胞类型标记基因,这种方法费时费力且不稳定,可重复性差,易导致不同实验室的鉴定结果不可比较。随着单细胞测序技术的迅猛发展,众多科学家联名在2017年提出人类细胞图谱计划(The Human Cell Atlas),于2020年提出了人类癌症图谱计划(The Human Tumor Atlas),海量的已标注细胞类型的单细胞转录组测序数据越来越多,利用这些数据作为参考数据集(reference)来鉴定新测序的细胞(single cell assignment against the reference),正成为一种细胞注释的新思路。 2021年5月29日,同济大学生命科学与技术学院生物信息系刘琦教授课题组(段斌,陈绍奇,陈晓涵为文章共同第一作者)......阅读全文
如何鉴定植物细胞的死活?
【实验原理】活细胞与死细胞在性质上有许多差别,特别是通透性的变化最-为明显。活细胞的原生质具有选择透过性;而死细胞则为全透性。选择透过性是质壁分离的先决条件。因此能发生质壁分离的细胞就表示是活的,不能发生质壁分离的细胞则说明是死的。死活细胞间不仅通透性不同,而 pH 值等情况也不同,它们对某些染料的
间充质干细胞(MSCs)鉴定
实验材料MSCs试剂、试剂盒无菌CCMPBSA0.85%台盼蓝盐溶液胰蛋白酶 EDTA仪器、耗材聚丙烯离心管15 ml或50 ml塑料组织培养皿直径15 cm移液器枪头非灭菌结晶紫溶液蒸馏水改良的Neubauer血细胞计数器移液器实验步骤(a)进行MSCs收集和传代。对悬液中的剩余细胞重新计数以确保
怎样鉴定HEP3B细胞
目的探讨核转录因子(NF)-κB对肝细胞癌细胞Hep3B中COX-2表达的调控作用.方法以体外合成的NF-κB亚单位p50反义寡聚脱氧核苷酸(AS ODN)处理Hep3B细胞72 h,利用Western blot方法检测AS ODN处理的Hep3B细胞p50和COX-2蛋白表达水平.利用电泳凝胶迁移
原代细胞免疫荧光鉴定步骤
为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞,使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型,免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤,仅做
间充质干细胞(MSCs)鉴定
实验方法原理 实验材料 MSCs试剂、试剂盒 无菌CCMPBSA0.85%台盼蓝盐溶液胰蛋白酶 EDTA仪器、耗材 聚丙烯离心管15 ml或50 ml塑料组织培养皿直径15 cm移液器枪头非灭菌结晶紫溶液蒸馏水改良的Neubauer血细胞计数器移液器实验步骤 (a)进行MSCs收集和传代。对悬液中的
鉴定植物细胞死活的方法
【实验目的】学习用质壁分离法和用活体染色法鉴定细胞死活【实验原理】活细胞与死细胞在性质上有许多差别,特别是通透性的变化最为明显。活细胞的原生质具有选择透过性;而死细胞则为全透性。选择透过性是质壁分离的先决条件。因此能发生质壁分离的细胞就表示是活的,不能发生质壁分离的细胞则说明是死的。死活细胞间不仅通
杂种细胞的发育动态及体细胞杂种鉴定
一、杂种细胞的发育动态核质重组细胞器重组部分核物质或细胞器丢失核分裂的非同步性二、体细胞杂种的特点形态上的趋中性变异幅度大非整倍性双亲性状的共显性偏亲现象三、杂种细胞的选择系统与杂种植株的鉴定1.杂种细胞的选择系统外观选择互补选择标记选择2.体细胞杂种的鉴定形态鉴定:根据双亲的形态学性状观察进行鉴定
杂种细胞的发育动态及体细胞杂种鉴定指标
一、杂种细胞的发育动态核质重组细胞器重组部分核物质或细胞器丢失核分裂的非同步性二、体细胞杂种的特点形态上的趋中性变异幅度大非整倍性双亲性状的共显性偏亲现象三、杂种细胞的选择系统与杂种植株的鉴定1.杂种细胞的选择系统外观选择 互补选择 荧光标记选择2.体细胞杂种的鉴定 形态鉴定:根据双亲的形态学
细胞系鉴定的办法和依据
细胞系鉴定目前主要基于国际身份认证委员会的标准。依据该标准,可以通过多重荧光PCR技术,对人源8个STR位点以及1个性别决定位点进行检测。
真核细胞总RNA的提取与鉴定
【原理】RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的,也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5μg RNA,但其中大部分为rRNA及由tRNA,而mRNA仅占1%~5%。虽然mRNA大小和序列各不相同,但在多数真核细胞mRNA的
植物细胞的活体染色与死活鉴定
一、原理活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。中性红是常用的活体染料之一,它是一种弱碱性pH指示剂,变色范围在pH6.4-8.0之间(由红变黄)。在中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于液泡在一般情况下呈酸性反应。因此,进入液泡的中性红便解离出大
细胞系错误鉴定:终结的开始
2010年5月ATCC SDO(Standards Development Organization)工作组在Nature review cancer杂志上发表了题为《Cell line misidentification:the beginning of the end》前瞻性报道。以下是全文
你的细胞有做过-STR-鉴定吗?
据统计约 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……,这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa c
植物细胞的活体染色与死活鉴定
一、原理活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。中性红是常用的活体染料之一,它是一种弱碱性pH指示剂,变色范围在pH6.4-8.0之间(由红变黄)。在中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于液泡在一般情况下呈酸性反应。因此,进入液泡的中性红便解离出大
胚胎干细胞的鉴定方式介绍
胚胎干细胞可以通过细胞集落或细胞本身的形态初步鉴定;除此之外,还可以从分子标记和分化潜能等两方面对胚胎干细胞进行鉴定。各基因的表达情况随细胞不同而异。因此,可以用一些在细胞中特异性表达的蛋白质对胚胎干细胞进行鉴定。上述特异性表达的蛋白质又分为两种类型:细胞内的蛋白质以及细胞表面特异性的蛋白质(细胞表
真核细胞总RNA的提取与鉴定
【原理】RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的,也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5μg RNA,但其中大部分为rRNA及由tRNA,而mRNA仅占1%~5%。虽然mRNA大小和序列各不相同,但在多数真核细胞m
植物细胞的活体染色与死活鉴定
实验方法原理:活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。中性红是常用的活体染料之一,它是一种弱碱性pH指示剂,变色范围在pH6.4-8.0之间(由红变黄)。在中性或微碱性环境中,植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌,由于液泡在一般情况下呈酸性反应。因此,进入液泡的中性红便解
植物细胞的活体染色与死活鉴定
活体染色可用于:(1)利用某些无毒或毒性很小的染料来显示细胞内某些天然结构;(2)不影响细胞的生命活动或产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。实验方法原理活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。中性红是常用的活体染料之一,它是一种弱碱性pH指示剂,变色范围在pH6.4-8.
亚细胞结构的分离与鉴定2
第三节 微粒体的分离细胞通过匀浆破碎时,细胞质膜碎成片段,这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等)的小泡有不同的特性,所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体,称微粒体(microsome)。分离
人类骨骼干细胞终于被鉴定出来
骨骼是一种精密而活跃的器官,它由骨、软骨、脂肪、成纤维细胞、神经、血管和造血细胞的多种组织构成,且具有一定的再生潜力。骨骼功能障碍可引发许多疾病,从骨质疏松症、骨关节炎等年龄相关的常见病,到非愈合性骨骼损伤、血液疾病,甚至癌症都可能和骨骼问题有关。目前改善骨骼功能的相关治疗方案仍十分有限,主要原
什么时候需细胞系鉴定?
1)当建立或获得一个新的细胞系时; 2)一个涉及到细胞试验项目开始/结束时; 3)在细胞冻存之前,或细胞已连续培养2~3个月时; 4)发表文章或申请课题经费前; 5)细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大时; 6)当实验室使用超过一种细胞系时,所有细胞系应先鉴定以排除交叉污染的可能。
为什么要进行细胞系鉴定?
首先进行细胞系STR鉴定是很重要的。很多生物医药的研究都采用培养细胞来进行,这些细胞可能是受赠于其它研究人员,也可能是从细胞库(如美国 ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得来。据估计,15-20%的实验室,实验中所使用的细胞已经不是原来的细胞系,或者与其它细胞系发
亚细胞结构的分离与鉴定1
细胞由各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分,观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一目标的基本手段。一般认为,转速为10~25Kr/min的离心机称为高速离心机;转速超过25Kr/min,离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/mi
鉴定细胞产生的细胞因子等炎症介质的分析
各种激活类型的细胞可以分泌细胞因子,趋化因子和其他炎症介质,如穿孔素,粒酶免疫或炎症反应的一部分。如ELISA和BD?式微珠阵列(CBA)测量整个细胞群所产生的分泌蛋白的方法。与此相反,细胞内流式细胞仪允许于感兴趣的细胞群,表型鉴定的个别类型的细胞产生的细胞因子等炎症介质的分析。 流式细胞仪检测细
细胞系错误鉴定:终结的开始(三)
交叉污染检测许多方法已被用来检测交叉污染,包括同工酶分析、核型分析、人类白细胞抗原(HLA)分型,免疫分型和DNA指纹识别。这些方法都可以鉴别出某一种细胞系,但是分辨能力各不一样。然而,这些方法在不同实验室所得到的数据却不尽相同,以致没有任何一种方法可以用来建立一个标准参考数据库。许多实验室利用ST
细胞株的污染鉴定、预防和处理
普通微生物污染:培养基浑浊,高倍镜观察有微生物污染;按规定弃用并全面严格灭菌。支原体污染:显微镜无法观察,依经验表现为细胞生长缓慢,有细胞漂浮等等,应通过PCR 等方法鉴定,如发现支原体污染,应按规定弃用,实验室要及时全面消毒灭菌,防止蔓延。(有些常规性细胞学实验不受支原体污染影响,可以继续使用细胞
产单核细胞李斯特菌鉴定
产单核细胞李斯特菌在自然界分布很广,土壤、水、人和动物粪便中均可存在,常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增多症,也可引起脑膜炎、败血症等。近年在发达国家常因污染奶制品引起食物中毒。该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染,孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,也会引起女性阴道、子宫颈的感染,
细胞系错误鉴定:终结的开始(一)
2010年5月ATCC SDO(Standards Development Organization)工作组在Nature review cancer杂志上发表了题为《Cell line misidentification:the beginning of the end》前瞻性报道。以下是
细胞系错误鉴定:终结的开始(二)
案例和影响交叉污染和错误鉴定已有一段很长的历史,这其中有许多的案例,我们很难去判断哪一个是最重要及代价最高的。已被描述的经典案例是Hela细胞污染(关于Hela细胞污染有好几个案例),令人惊奇的是,许多被Hela细胞污染的细胞系居然在一些备受尊敬的杂志上仍被使用,而这一使用距离它们最先发现为Hela
研究开发出细胞身份鉴定新型AI引擎
随着单细胞和空间组学技术的快速发展,公开可共享数据量已突破亿级大关。然而,技术平台产生的差异、复杂疾病状态、跨物种研究带来的批次效应和离群细胞等,对数据解读构成挑战。面对动辄百万规模的离群细胞,传统的“先聚类、后注释”分析方法难以快速、精准且可解释地将这些“身份不明”的细胞映射到参考细胞图谱上,进而