western蛋白样品最多可以反复冻融几次

可反复冻融的次数具体情况根据目的蛋白性质(主要是稳定性)而定,当然,最好是一次成功。如果说需要做大量的实验,需要一次准备很多一致性蛋白样品,那么强烈建议你在第一次冷冻前用EP管分装,分装数量和分装量根据你的实验次数和需要一次上样量确定。这样,就完全避免了多次冻融(除了第一次实验不需要冻融;这是从根本上解决你的问题)。再说你提的问题本身,上面也说了,蛋白样品可反复冻融的次数,要根据目的蛋白性质(主要是稳定性)而定,这是说如果你需要的目的蛋白比较稳定,那么,是可以多次反复冻融的,但最好不要多于3次,因为蛋白质在反复冻融下,会变性,而且,储存时间太长了,也会影响实验数据的准确性。一般而言,-20度保存,不要超过2周,最长不要超过1个月;-80度(或-70度)保存,一般不超过半年,最多1年。提一句,新取得样本,如果不是立即提取蛋白,最好立即保存在液氮中(很方便),尤其是如果你还要做RNA实验的话,因为只有在液氮的超低温环境下,才能抑制R......阅读全文

PCR引物存放时间是多少

最近做PCR实验好几次都扩不出来(郁闷死,以前从没这问题),反应体系和条件都是以前一见摸索好了的,唯一可能的问题就是试剂出问题了。 PCR引物存放时间,这要看是什么状态,要是粉末的话,在-20度可以存放好几年;要是已经把引物稀释成液体状态的话,存放时间就要短一点了,但也可以存放一年左右的时间,甚至更

两种不同的总蛋白提取方法总结

蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。本文分别介绍了从新鲜样品中提取总蛋白和从Trizol裂解液中分离总蛋白的方法和步骤。希望与各位老师和同学交流。 膜蛋

含蛋白量最多的脂蛋白有哪些?

HDL是体积最小的脂蛋白,和其他脂蛋白相比,HDL含蛋白量最大(>50%),其主要的载脂蛋白为ApoAⅠ、AⅡ及少量的ApoC、E;磷脂是其主要的脂质,还有少量的胆固醇、胆固醇酯和甘油三酯在卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的作用下,游离胆固醇变成胆固醇酯,经过HDL将蓄积在组织的游离胆固醇运送到肝

Western-Blot-相关技术操作与原理1

【实验原理】: Western Blot 印迹方法,又称为免疫印记,是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离,并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合,再与经

提蛋白时加入裂解液后可以不离心即冻存吗

提蛋白时加入裂解液后一般不可以不离心即冻存的加入裂解液后,细胞就会裂解,之后各种蛋白酶都会激活。放一段时间很多丰度不高的蛋白就检测不到了,即使是冻存但是在冻上(液氮除外)和冻融的过程中,不能保证所有蛋白酶都不发挥活性。所以提蛋白时加入裂解液后一般不可以不离心即冻存的

Western-Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按大小分离蛋白质

Western-Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按大小分离蛋白质

Western-Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按

Western-Blot技术篇之样品制备

Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括: 从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量) 十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按大小分离蛋白质 将分离的蛋白

MAP1B单克隆抗体产品说明书(中文版)

   MAP1B单克隆抗体产品说明书(中文版)   主要用途    MAP1B单克隆抗体是一种旨在用于免疫组织化学、免疫沉淀和免疫印迹实验的鼠源单克隆IgG抗体蛋白。常用于免疫荧光、细胞流式、Western Blot、免疫组化、免疫沉淀等实验。产品即到即用,性能稳定,免疫活性保证。   技术背

测定鸡白细胞介素3ELISA试剂盒的分析方法

样本处理及要求1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2.  血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取

鸭肌球蛋白重链ELISA试剂盒实验科研

鸭肌球蛋白重链ELISA试剂盒实验科研Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。 样本处理及要求1. 

冻存的组织样品还能提细胞核中的蛋白吗

细胞比较简单,只有细胞膜,抽提过程中,很容易破坏细胞膜,从而得到蛋白,相应蛋白中受到其他物质干扰也比较少,样品较为干净。但是用组织的时候,组织由细胞组成,但是从组织中抽提丹巴就要复杂,做组织匀浆以后,再分离组织碎片和蛋白,但是分离过程可能没有那么好,组织中含有的各种杂质,杂蛋白就比细胞中要多,要复杂

冻融对发酵用大肠杆菌甘油保存的影响分析

摘要:目的:探讨冻融对发酵用大肠杆菌甘油保存的影响.方法:将大肠杆菌用10%的甘油溶液制成菌悬液,分成3组,测定各组菌种的活菌数,同时置-20℃冷冻处理.3组分别被冻融处理1、2、3次.测定冻融处理后、冻存1年及2年各组的活菌数.结果:随着冻融次数的增加,冻融处理后,冻存1年及2年的活菌数均明显降低

中国科学家通过星地联合探测南极冰雪冻融

  利用卫星遥感数据,科学家已获得全南极的多源遥感影像图,测得了冰盖运动和表层冰雪的融化等数据。但由于缺乏地面验证,卫星遥感所获得的冰雪参数的可靠性不高。记者2月15日从我国第27次南极科学考察队了解到,“极端环境无线传感器网络观测平台”将给卫星遥感数据“挑刺”,通过星地联合探测南极冰雪冻融。  

CLD型全自动低温冻融试验机操作规程

1.首先打开设备前盖连接水管将洁净水注入储水箱,以注入到水箱上液位指示标的上线为宜。使用时需要向水泵中注入适量清水(严禁无水工作)。2.打开电源“开关”,这时机器已上电,电源指示灯亮。旋开“开关”按钮,仪表控制系统启动,进入开机界面。3.将浸水饱和后的试样砖垂直地插入支承架,并使试样之间保持空气流通

冻融法细胞破碎一次需要多长时间

1、高速组织捣碎 :将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种 子等。2、玻璃匀浆器匀浆 :先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,

猪PIGRELISA试剂盒实验方法

Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。   样本处理及要求1.  血清:将收集于血清分离管的全血标

鸡脂蛋白脂酶ELISA试剂盒操作程序

Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。   样本处理及要求1.  血清:将收集于血清分离管的全血标

大鼠纤连蛋白ELISA试剂盒检测范围

Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。样本处理及要求1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室

大鼠细胞周期素D2ELISA试剂盒实验原理

Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15% 样本处理及要求1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室

小鼠白细胞介素1β试剂盒使用时需要做什么处理?

 小鼠白细胞介素-1β试剂盒用于测定小鼠血清及相关液体样本中白细胞介素1β(IL-1β)含量。小鼠白细胞介素-1β试剂盒使用时的样本应做好如下处理:  1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4C过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20'C或-80C保存,但应避免反

微管蛋白的可溶性表达及纯化

1、将重组质粒(BL21-2ß2或Rossatta-2ß2)的表达菌37℃摇培过夜后,1:20扩配(约需1h15m);2、至OD600=0.5~0.7时(约1h15min~1h45min),在 15-(0.5-24,0.8-12);20-(0.5-12,0.8-8);28、25-(0.8-8)进行蛋

人基质金属蛋白酶14ELISA试剂盒操作步骤

Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。 有效期:6个月样本处理及要

鸡干细胞因子ELISA试剂盒实验原理

Elisa试剂盒 性能: 1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2.灵敏度:z低检测浓度小于10 pg/ml。 3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。样本处理及要求1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室

Western印迹法检测蛋白

实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng,0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg,所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一,即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时,应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭,靶蛋白与第一抗体的反应,结合靶蛋白的一抗

Western印迹法检测蛋白

实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng,0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg,所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一,即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时,应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭,靶蛋白与第一抗体的反应,结合靶蛋白的一抗

大鼠1磷酸鞘氨醇(S1P)试剂盒样本处理及要求

大鼠1-磷酸鞘氨醇(S1P)试剂盒样本处理及要求:1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2.  血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2

部分ELISA试剂盒样本的检测方法

ELISA试剂盒通常我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培育上清或安排匀浆液等,不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的*步。1、血浆ELISA试剂盒用含抗凝剂的采血管或离心管收集血液标本,标本收集后30min

影响尿液储存稳定性的常见因素

 尿液检验因其获取简便、收集无创和可提供大量生理变化发展进程的信息, 被临床广泛运用。尿液中存在许多潜在的生物标记物, 包括代谢物质、细胞、蛋白、核酸等。这些生物标记物在检测药品的安全性、监测急慢性肾脏疾病和其他泌尿道的生理情况上具有突出的作用。为了发现新的生物标记物以及分析这些生物标记物的