单链Oligo合成与DNA组装技术（二）
2.2 Golden Gate组装Golden Gate组装技术是基于非同源重组的代表性技术，其利用Ⅱ型限制性酶 BsaⅠ在识别位点外部切割的特性，设计特异的突出序列同时组装多个片段，且酶切和酶连可以同时进行，原理如图3所示。首先，扩增目的片段，在两端加上BsaⅠ识别序列，同时在识别序列内侧加上不同的4 nt突出部分，相邻片段衎接处的4 nt反向互补配对，然后将片段分别插入酶切前的中间载体，因此一共可以设计256个突出的末端。利用E.coli富集含有不同目的片段的中间载体，将这些载体与最终的载体(含有2个相邻的BsaⅠ酶切位点)混合，加入BsaⅠ和DNA连接酶，同时进行酶切和酶连组装多达9个DNA片段。2011年，Cermak等人利用Golden Gate高效组装了TALEN敲除系统中的重复序列，整个过程只需要两步：第一步先将最多10个RVDs按顺序组装，每个RVDs可识别1个核苷酸；第二步再将这些RVD......阅读全文
单链Oligo合成与DNA组装技术－（二）
2.2 Golden Gate组装Golden Gate组装技术是基于非同源重组的代表性技术，其利用Ⅱ型限制性酶 BsaⅠ在识别位点外部切割的特性，设计特异的突出序列同时组装多个片段，且酶切和酶连可以同时进行，原理如图3所示。首先，扩增目的片段，在两端加上BsaⅠ识别序列，同时在识别序列内侧
单链Oligo合成与DNA组装技术－（一）
合成生物学作为迅速发展的交叉学科，已在生物医药、新材料、诊断、能源和数据储存等领域展现越来越广泛的应用潜力。合成基因组学作为合成生物学的重要研究方向，着重于新生命体系的从头设计与合成，其以Oligo（寡核苷酸链）合成、拼装和转移等核心技术为支撑。新生命体系的从头设计与合成不仅需要合成组成基因组的小片
单链DNA探针技术简介
用双链探针杂交检测另一个远缘DNA时,探针序列与被检测序列间有很多错配。而两条探针互补链之间的配对却十分稳定,即形成自身的无效杂交,结果使检测效率下降。采用单链探针则可解决这一问题。单链DNA探针的合成方法主要有下列两种:(1) 以M13载体衍生序列为模板,用Klenow片段合成单链探针; (2)
互补DNA第二链的合成方法介绍
（1）自身引导法。合成的单链eDNA3’端能够形成一短的发夹结构，这就为第二链的合成提供了现成的引物。当第一链合成反应产物的DNA—RNA杂交链变性后利用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段或反转录酶合成eDNA第二链，最后用对单链特异性的S1核酸酶消化该环，即可进一步克隆。但自身引导合成法
单链－cDNA－的合成实验
本方案利用的是总RNA，因为如果使用18SrRNA作内对照，在后续实验中就不能使用带poly(A)的RNA。并且必须用DNA酶处理RNA，以去除所有污染的基因组DNA。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水10X
单链－cDNA－的合成实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水10XRT-PCR 缓冲液（去除 RNA 酶的双蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)2. 酶和酶缓冲液
单链－cDNA－的合成实验
一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水10XRT-PCR 缓冲液（去除 RNA 酶的双蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)2. 酶和酶缓冲液MMLV 逆转录酶（100~200U/ul)SUPERaseIN
单链互补DNA的定义
中文名称单链互补DNA英文名称single-strand cDNA;sscDNA定 义在逆转录酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
细胞化学词汇单链DNA
中文名称：单链DNA外文名称：single－stranded DNA术语含义：单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
单链DNA的结构特点
单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
细胞化学词汇单链互补DNA
中文名称：单链互补DNA英文名称：single-strand cDNA;sscDNA定 义：在逆转录酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
抗单链DNA抗体的概述
抗ssDNA是抗DNA抗体中临床意义和重要性都不如抗dsDNA的一种，DNA是一个大分子的复合物，由两条核苷酸链形成的双螺旋结构。加热时碱基间的氢键断裂，DNA变性产生ssDNA。抗ssDNA的反应位点主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶构成的碱基。
单链DNA测序技术助力获取游离核酸多组学数据
游离DNA（cfDNA）是指游离在细胞外的DNA，存在于血浆、血清或尿液等体液中。cfDNA的片段组学特征可用于微创、实时、动态地监测生理和病理状态，在肿瘤早筛与复发监测、母婴健康、器官移植、感染疾病等领域具有广阔的应用前景。高通量测序技术是表征cfDNA片段组学特征的主要手段，其中，双链DNA文库
HiDEFseq技术揭示了单链DNA突变的起源
突变是构成DNA密码的分子“字母”的变化，DNA密码是所有活细胞的蓝图。其中一些变化可能影响不大，但其他变化可能导致疾病，包括癌症。现在，一项新的研究引入了一种原创技术HiDEF-seq，该技术可以准确检测突变之前DNA密码中的早期分子变化。该研究的作者说，他们的技术 - 发夹双链增强保真测序 -
单链DNA文库的SELEX筛选实验
单链DNA文库的SELEX筛选实验可用于：（1）体外诊断；（2）体内治疗等。实验方法原理SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外，还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选，而且 DNA 文库具有更好的稳定性，操作也相对简便。实验材料3
单链DNA的功概念和作用
单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
分子遗传学词汇单链DNA
中文名称：单链DNA外文名称：single－stranded DNA定义：大部分DNA以双螺旋结构存在，但一经热或碱处理就会变为单链状态。
单链DNA文库的SELEX筛选实验
实验方法原理 SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外，还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选，而且 DNA 文库具有更好的稳定性，操作也相对简便。实验材料 3' 引物链亲和素磁珠仪器、耗材 电泳仪PCR 仪离心机凝胶成像仪
单链DNA结合蛋白的功能简介
单链DNA结合蛋白（Single-stranded DNA-binding protein，缩写SSB或SSBP）又称单链结合蛋白，是专门负责与DNA单链区域结合的一种蛋白质，为DNA复制、重组和修复所必需的成分。 防止两条互补单链再次结合为双螺旋，维持单链状态。防止单链区域形成链内二级结构。
单链DNA文库的SELEX筛选实验
实验方法原理 SELEX 技术除了可以使用 RNA 文库以外，还可以使用单链 DNA 文库进行筛选。单链 DNA 形成高级结构的丰富性也足够用于对许多靶分子的筛选，而且 DNA 文库具有更好的稳定性，操作也相对简便。
双链DNA探针随机引物合成法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切
DNA合成（DNA－synthesis－）技术介绍
蛋白质概念提出：DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照预定核苷酸的顺序，将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸，可自动化操作。)目前，oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效
单链DNA结合蛋白的基本内容
单链结合蛋白（SSB，single strand DNA-binding protein）：结合于螺旋酶沿复制叉方向向前推进产生的单链区，防止新形成的单链DNA重新配对形成双链DNA或被核酸酶降解的蛋白质。 螺旋酶沿复制叉方向向前推进产生了一段单链区，但是这种单链DNA不会长久存在，会很快重新
从M13噬菌体模板合成固定长度的单链DNA探针
实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 限制性内切核酸酶 模板 DNA 寡核苷酸引物 试剂、试
从M13噬菌体模板合成固定长度的单链DNA探针
实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性内切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物试剂、试剂盒 乙酸铵DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 电泳缓冲液Tris-ClKlenow 基础缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材 变性聚丙烯酰胺凝胶或碱性琼脂糖凝胶黏性贴片或磷光黏性贴片Sephad
从M13噬菌体模板合成固定长度的单链DNA探针
实验材料大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段限制性内切核酸酶模板 DNA寡核苷酸引物试剂、试剂盒乙酸铵DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE 电泳缓冲液Tris-ClKlenow 基础缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材变性聚丙烯酰胺凝胶或碱性琼脂糖凝胶黏性贴片或磷光黏性贴片Sephadex
半制备规模单链RNA纯化（二）
图2中所示被选中的馏份收集窗表示不同的质量负荷。峰值采集后，样品可以根据需要对等分和干燥，以便长期储存。TEAA的挥发性使离子对缓冲组分的去除非常容易。溶剂蒸发后被纯化的寡核苷酸实际上是不含盐的。 UPLC条件纯化RNA寡核苷酸的纯度通过ACQUITY UPLC系统来验证。如图3所示，我们的纯化方法
关于胶原的合成与组装的介绍
胶原的合成与组装始于内质网，并在高尔基体中进行修饰，最后在细胞外组装成胶原纤维。在胶原蛋白在粗面内质网膜结合的核糖体上起始合成前α链，并在内质网切除信号肽，通过内质网和高尔基体的加工、修饰和组装，形成三股螺旋的前胶原并分泌到胞外，形成原胶原最后组装成胶原原纤维和胶原纤维。 前胶原是原胶原的前体
从M13噬菌体模板合成非固定长度的单链DNA探针
实验方法原理 在合成过程中，低浓度的放射性标记的 dNTP 使探针的长度限制为 200~300 个核苷酸。但是新合成的 DNA 可通过改变投入的模板量和 dNTP 的浓度使其长度为 100~1000 个核苷酸，如此长度范围内的探针适用于大多数杂交实验。实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klen
从M13噬菌体模板合成非固定长度的单链DNA探针
实验方法原理 在合成过程中，低浓度的放射性标记的 dNTP 使探针的长度限制为 200~300 个核苷酸。但是新合成的 DNA 可通过改变投入的模板量和 dNTP 的浓度使其长度为 100~1000 个核苷酸，如此长度范围内的探针适用于大多数